【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于微生物發(fā)酵培養(yǎng)領域，具體地涉及一種貝萊斯芽孢桿菌、制備方法及其應用。
技術介紹
1、近年來，隨著公眾對食品和環(huán)境中化學農(nóng)藥安全性的普遍關注以及危險性化學農(nóng)藥的禁用，促使人們尋求安全有效的植物病害控制途徑，而利用有益微生物防治植物病害愈發(fā)受到重視。它是向被打破了的植物自然生態(tài)系中引入對植物有益的外源拮抗菌、或通過調(diào)節(jié)環(huán)境促使自然的有益微生物群體增長，并表現(xiàn)出生防活性，通過微生物之間的相互作用達到防病的目的。
2、貝萊斯芽孢桿菌作為一種新型生防微生物因子近幾年備受人們關注。對其研究主要集中在飼料、醫(yī)藥、紡織、水產(chǎn)、污水處理、植物保護等領域。貝萊斯芽孢桿菌在植物病害防控、促進植物生長、誘導系統(tǒng)抗性、積累防御酶及其抑菌活性物質(zhì)等方面均表現(xiàn)出較大的潛力。芽孢桿菌在農(nóng)業(yè)推廣應用中多以芽孢形態(tài)存在，在發(fā)酵生產(chǎn)過程中也多以提升有效芽孢數(shù)和成孢率為目標。
3、目前，提供一種高芽孢轉(zhuǎn)化率的貝萊斯芽孢桿菌仍然是值得期待的。
技術實現(xiàn)思路
1、為了解決以上至少一個問題，本公開提供了一種貝萊斯芽孢桿菌、制備方法及其應用。使用本公開所提供貝萊斯芽孢桿菌，能夠有效抑制植物根腐病的病原微生物。所提供的發(fā)酵培養(yǎng)基和相應的發(fā)酵培養(yǎng)方法，進一步提升了所述貝萊斯芽孢桿菌的有效芽孢數(shù)，降低了發(fā)酵液粘度，顯著改善了噴粉干燥后粉劑的分散效果，提升了產(chǎn)品性狀。
2、根據(jù)本公開的一個方面，提供了一種貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?velezensis)，所述貝萊斯芽孢桿菌的16s
3、在一些實施方式中，所述貝萊斯芽孢桿菌的gyrb基因具有如seq?id?no：2所示的核苷酸序列，或與其具有至少95％、95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的核苷酸序列。
4、在一些實施方式中，所述貝萊斯芽孢桿菌為革蘭氏陽性菌。
5、在一些實施方式中，所述貝萊斯芽孢桿菌能夠抑制引起植物根腐病的病原微生物。
6、在一些實施方式中，所述病原微生物包括以下中的一種或多種：鐮刀菌(fusariumspp.)、絲核菌(rhizoctonia?sp.)、莖點屬真菌(phoma?spp.)、黃濕桿菌(bacillus?spp.)、腐霉菌(pythum?spp.)、絲囊菌(aphanomyces?spp.)、歐文多桿菌(erwinia?spp.)或羅耳阿太菌(athelia?rolfsii)。
7、在一些實施方式中，所述植物包括以下中的一種或多種：藜科、豆科、十字花科、茄科、葫蘆科、薔薇科植物。
8、在一些實施方式中，所述植物包括以下中的一種或多種：甜菜、大豆、蠶豆、胡蘿卜、土豆、黃瓜、草莓或煙草。
9、在一些實施方式中，所述貝萊發(fā)酵斯芽孢桿菌保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心cctcc，保藏菌株名稱為貝萊斯芽孢桿菌knf-209(bacillus?velezensis?knf-209)，菌種保藏編號為cctcc?no.m2022319。
10、根據(jù)本公開的又一個方面，提供了一種用于所述貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：玉米淀粉1％～5％，和/或麩皮0.1％～1％，其中“％”表示g/100ml。
11、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：玉米淀粉1％、2％、3％、4％或5％，和/或麩皮0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1％，其中“％”表示g/100ml。
12、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括玉米粉，豆粕，玉米漿，蛋白胨，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，氯化鈣、氯化錳和余量的水或填料。
13、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括玉米粉1％～5％，豆粕0.1～1％，玉米漿(固含量45％)1％～5％，蛋白胨0.1％～5％，磷酸二氫鉀0.01％～1％，，硫酸鎂0.01～1％，氯化鈣0.01～1％，氯化錳0.01％～1％和余量的水或填料，其中“％”表示g/100ml。
14、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基ph＝7.0～8.0。
15、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基ph＝7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。
16、根據(jù)本公開的又一個方面，提供了一種貝萊斯芽孢桿菌的培養(yǎng)物，所述培養(yǎng)物包括所述的貝萊斯芽孢桿菌和其產(chǎn)生的芽孢；任選地，還包括所述的培養(yǎng)基。
17、在一些實施方式中，所述培養(yǎng)物的粘度＜160cp、＜150cp、＜140cp、＜130cp、＜120cp、＜110cp、＜100cp、＜90cp、＜80cp、＜70cp、＜60cp或＜50cp。
18、根據(jù)本公開的又一個方面，提供了一種培養(yǎng)所述的貝萊斯芽孢桿菌的方法，所述方法發(fā)酵培養(yǎng)步驟，所述發(fā)酵培養(yǎng)步驟包括使用發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)所述的貝萊斯芽孢桿菌，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括玉米淀粉1％～5％和/或麩皮0.1％～1％。
19、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：玉米淀粉1％、2％、3％、4％或5％，和/或麩皮0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1％，其中“％”表示g/100ml。
20、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括玉米粉，豆粕，玉米漿，蛋白胨，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，氯化鈣和/或氯化錳。
21、在一些實施方式中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括玉米粉1％～5％，豆粕0.1～1％，玉米漿(固含量45％)1％～5％，蛋白胨0.1％～5％，本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
1.一種貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus?vezelensis)，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌的16SrDNA具有如SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列，或與其具有至少95％、95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的核苷酸序列。
2.根據(jù)權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌的gyrB基因具有如SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列，或與其具有至少95％、95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5
3.一種用于權利要求1或2所述貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括玉米淀粉1％～5％和/或麩皮0.1％～1％。
4.根據(jù)權利要求3所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括玉米粉1％～5％，豆粕0.1～1％，玉米漿1％～5％，蛋白胨0.1％～5％，磷酸二氫鉀0.01％～1％，硫酸鎂0.01～1％，氯化鈣0.01～1％和/或氯化錳0.01％～1％，余量的水或填料；
5.一種權利要求1或2所述的貝萊斯芽孢桿菌的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法包括發(fā)酵培養(yǎng)步驟，所述發(fā)酵培養(yǎng)步驟包括使用發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)所述的貝萊斯芽孢桿菌，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括玉米淀粉1％～5％和/或麩皮0.1％～1％。
6.根據(jù)權利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包括玉米粉1％～5％，豆粕0.1～1％，玉米漿1％～5％，蛋白胨0.1％～5％，磷酸二氫鉀0.01％～1％，硫酸鎂0.01～1％，氯化鈣0.01～1％和/或氯化錳0.01％～1％，余量的水或填料；
7.一種組合物，所述組合物包含權利要求1或2所述的貝萊斯芽孢桿菌，或者減毒的所述貝萊斯芽孢桿菌、經(jīng)輻射的所述貝萊斯芽孢桿菌、所述貝萊斯芽孢桿菌的培養(yǎng)物、所述貝萊斯芽孢桿菌產(chǎn)生的芽孢、所述貝萊斯芽孢桿菌的代謝產(chǎn)物或所述貝萊斯芽孢桿菌的上清液。
8.根據(jù)權利要求7所述組合物，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌的培養(yǎng)物為液體培養(yǎng)物，發(fā)酵培養(yǎng)物或者發(fā)酵培養(yǎng)物的上清；
9.一種組合物的制備方法，所述制備方法包括對權利要求1或2所述貝萊斯芽孢桿菌進行過濾、濃縮干燥，制成菌劑的步驟；優(yōu)選噴霧干燥。
10.權利要求1或2所述貝萊斯芽孢桿菌、權利要求7或8所述組合物在防治農(nóng)業(yè)病害中的應用；
...【技術特征摘要】
1.一種貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?vezelensis)，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌的16srdna具有如seq?id?no：1所示的核苷酸序列，或與其具有至少95％、95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的核苷酸序列。
2.根據(jù)權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌，其特征在于，所述貝萊斯芽孢桿菌的gyrb基因具有如seq?id?no：2所示的核苷酸序列，或與其具有至少95％、95.1％、95.2％、95.3％、95.4％、95.5％、95.6％、95.7％、95.8％、95.9％、96％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的核苷酸序列，
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：果然，周莉，劉守德，黃芳，熊圓圓，徐廣，
申請(專利權)人：武漢科諾生物科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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