【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子生物學，具體涉及lyz溶菌酶mrna量在作為豬傳染性胃腸炎診斷標志物中的應用。
技術介紹
1、豬傳染性胃腸炎(porcinetransmissiblegastroenteritis,tge)是由豬傳染性胃腸炎病毒(porcinetransmissiblegastroenteritisvirus,tgev)引起的以豬嘔吐、腹瀉、脫水為特征的高度接觸性傳染病，對養豬業造成巨大的損失。該病可感染不同年齡的豬，但對新生仔豬的致死率高達100％，成年豬感染后發病溫和，可能會出現生長障礙和無乳等現象。近年來，該病在世界各地頻頻發生，我國四川、湖北、吉林、北京、廣州等多個地區也均有流行，并且呈上升趨勢。由于tgev經常與其他病毒混合感染，或常伴細菌的繼發感染，使臨床癥狀復雜多樣，混合感染和繼發感染大大增加了tgev診斷的難度。因此，建立一種快速、準確檢測tgev的方法，為豬傳染性胃腸炎的防控及抗傳染性胃腸炎新品種的培育具有重要的意義。
2、lyz溶菌酶又稱胞壁質酶(muramidase)或n-乙酰胞壁質聚糖水解酶(n-acetylmuramide?glycanohydrlase)，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的n-乙酰胞壁酸和n-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂內容物逸出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與dna、rna、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
3、
技術實現思路
1、本專利技術提供的lyz溶菌酶mrna表達量在作為豬傳染性胃腸炎診斷標志物中的應用，旨在解決上述
技術介紹
中存在的問題。
2、為了實現上述技術目的，本專利技術主要采用如下技術方案：
3、第一方面，本專利技術公開了lyz溶菌酶mrna表達量在作為豬傳染性胃腸炎診斷標志物中的應用。
4、第二方面，本專利技術公開了檢測lyz溶菌酶mrna表達量的試劑在制備豬傳染性胃腸炎檢測或診斷產品中的應用。
5、在本專利技術的較佳實施方式中，所述檢測lyz溶菌酶mrna的試劑包括上游引物sus-lyz-f：5’-actaggcgttaaagcatgggtg-3’和下游引物sus-lyz-r：5’-agagacaaggtgagctgaagaa-3’。
6、第三方面，本專利技術公開了一種檢測豬傳染性胃腸炎診斷標志物lyz溶菌酶的引物，所述引物包括上游引物sus-lyz-f：5’-actaggcgttaaagcatgggtg-3’和下游引物sus-lyz-r：5’-agagacaaggtgagctgaagaa-3’。
7、第四方面，本專利技術公開了一種如第三方面所述的引物在制備檢測或診斷傳染性胃腸炎產品中的應用。
8、第五方面，本專利技術公開了一種檢測豬傳染性胃腸炎病毒的試劑盒，所述試劑盒包括第三方面所述的引物。
9、第六方面，本專利技術公開了如第五方面所述的試劑盒在制備檢測或診斷豬傳染性胃腸炎產品中的應用。
10、第七方面，本專利技術公開了一種定量檢測豬胃腸部細胞lyz溶菌酶mrna表達量的方法，包括如下步驟：
11、步驟1、引物設計與合成：設計并合成用于擴增lyz溶菌酶的引物及內參引物；
12、步驟2、提取待測豬回腸上皮細胞總rna并進行反轉錄獲得cdna；
13、步驟3、實時熒光定量pcr：分別利用步驟(1)所述的引物，以待測豬胃腸部細胞cdna為模板進行熒光定量pcr；
14、步驟4、定量檢測豬胃腸部細胞lyz溶菌酶mrna表達量：對步驟(3)所述實時熒光定量pcr的ct值進行統計分析，確定豬胃腸部細胞lyz溶菌酶mrna表達量。
15、在本專利技術的較佳實施方式中，用于擴增lyz溶菌酶的引物包括上游引物sus-lyz-f：5’-actaggcgttaaagcatgggtg-3’和下游引物sus-lyz-r：5’-agagacaaggtgagctgaagaa-3’；內參引物物包括上游引物βactin-sus-f：5’-ctggcaccacaccttctacaa-3’和下游引物βactin-sus-r：5’-gtgttgaaggtctcgaacatgat-3’。
16、在本專利技術的較佳實施方式中，步驟4中，當待測細胞中豬胃腸部細胞lyz溶菌酶mrna相對表達量低于1.41時，可用于說明細胞沒有被tgev感染，反之，則被tgev感染。
17、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
18、本專利技術通過豬傳染性胃腸炎病毒tgev感染豬回腸上皮細胞細胞系ipi-2i，進行轉錄組測序，篩選差異表達mrna，其中lyz溶菌酶mrna在tgev感染組顯著高于mock組，因此可以用了檢測豬傳染性胃腸炎感染的標記基因。
19、本專利技術的檢測方法省時、省力、易于檢測、結果準確。
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1.LYZ溶菌酶mRNA表達量在作為豬傳染性胃腸炎診斷標志物中的應用。
2.檢測LYZ溶菌酶mRNA的試劑在制備豬傳染性胃腸炎檢測或診斷產品中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述檢測LYZ溶菌酶mRNA的試劑包括上游引物sus-LYZ-F：5’-ACTAGGCGTTAAAGCATGGGTG-3’和下游引物sus-LYZ-R：5’-AGAGACAAGGTGAGCTGAAGAA-3’。
4.一種檢測豬傳染性胃腸炎診斷標志物LYZ溶菌酶的引物，其特征在于，所述引物包括上游引物sus-LYZ-F：5’-ACTAGGCGTTAAAGCATGGGTG-3’和下游引物sus-LYZ-R：5’-AGAGACAAGGTGAGCTGAAGAA-3’。
5.如權利要求4所述的引物在制備檢測或診斷傳染性胃腸炎產品中的應用。
6.一種檢測豬傳染性胃腸炎病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求4所述的引物。
7.如權利要求6所述的試劑盒在制備檢測或診斷豬傳染性胃腸炎產品中的應用。
8.一種定量檢測
9.根據權利要求8所述的定量檢測豬胃腸部細胞LYZ溶菌酶mRNA表達量的方法，其特征在于，用于擴增LYZ溶菌酶的引物包括上游引物sus-LYZ-F：5’-ACTAGGCGTTAAAGCATGGGTG-3’和下游引物sus-LYZ-R：5’-AGAGACAAGGTGAGCTGAAGAA-3’；內參引物物包括上游引物βactin-sus-F：5’-CTGGCACCACACCTTCTACAA-3’和下游引物βactin-sus-R：5’-GTGTTGAAGGTCTCGAACATGAT-3’。
10.根據權利要求8所述的定量檢測豬胃腸部細胞LYZ溶菌酶mRNA表達量的方法，其特征在于，步驟4中，當待測細胞中豬胃腸部細胞LYZ溶菌酶mRNA相對表達量低于1.41時，可用于說明細胞沒有被TGEV感染，反之，則被TGEV感染。
...【技術特征摘要】
1.lyz溶菌酶mrna表達量在作為豬傳染性胃腸炎診斷標志物中的應用。
2.檢測lyz溶菌酶mrna的試劑在制備豬傳染性胃腸炎檢測或診斷產品中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述檢測lyz溶菌酶mrna的試劑包括上游引物sus-lyz-f：5’-actaggcgttaaagcatgggtg-3’和下游引物sus-lyz-r：5’-agagacaaggtgagctgaagaa-3’。
4.一種檢測豬傳染性胃腸炎診斷標志物lyz溶菌酶的引物，其特征在于，所述引物包括上游引物sus-lyz-f：5’-actaggcgttaaagcatgggtg-3’和下游引物sus-lyz-r：5’-agagacaaggtgagctgaagaa-3’。
5.如權利要求4所述的引物在制備檢測或診斷傳染性胃腸炎產品中的應用。
6.一種檢測豬傳染性胃腸炎病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求4所述的引物。
7.如權利要求6...
【專利技術屬性】
技術研發人員：喬木，吳俊靜，任雙，張宇，彭先文，梅書棋，周佳偉，徐忠，李梓芃，馮越，孫華，宋忠旭，趙海忠，李良華，陳通，曾威，
申請(專利權)人：湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所，
類型：發明
國別省市：
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