【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于基因工程疫苗領(lǐng)域，具體涉及一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、雞傳染性法氏囊病(ibd)是由傳染性法氏囊病毒(ibdv)引起的一種主要危害雛雞的急性、高度接觸性、免疫抑制性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為“影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)的重要疾病”。目前，ibdv超強(qiáng)毒株(vvibdv)和新型變異毒株(varibdv)是我國(guó)ibdv的兩大優(yōu)勢(shì)流行毒株，但目前市場(chǎng)上缺乏同時(shí)預(yù)防兩種毒株的商品化ibd疫苗。h9亞型禽流感病毒(aiv)是嚴(yán)重危害我國(guó)家禽業(yè)的另一病原，該病毒近年來(lái)在我國(guó)的分離率逐年上升，表明傳統(tǒng)滅活疫苗免疫已不能有效防控h9亞型aiv感染，迫切需要研制更加安全、高效的新型疫苗。
2、國(guó)內(nèi)外研發(fā)人員開(kāi)發(fā)了一系列基于火雞皰疹病毒(hvt)載體的重組病毒載體疫苗株，如新城疫病毒(ndv)、雞傳染性法氏囊病毒(ibdv)、h9亞型禽流感病毒(aiv)、雞傳染性喉氣管炎病毒(iltv)等。這些載體疫苗有效地克服了滅活疫苗和弱毒活疫苗免疫效果易受母源抗體干擾的缺陷，有效地解決了病毒容易感染早期雛雞的現(xiàn)狀。但現(xiàn)有技術(shù)將單獨(dú)表達(dá)不同外源基因的重組火雞皰疹病毒同時(shí)接種1日齡雞后，會(huì)出現(xiàn)兩種或多種重組病毒載體疫苗在雞體內(nèi)互相競(jìng)爭(zhēng)的問(wèn)題，從而導(dǎo)致免疫失敗，而且將不同種類的外源基因同時(shí)插入到同一火雞皰疹病毒載體又會(huì)出現(xiàn)只對(duì)其中一種病有良好免疫效果的問(wèn)題，或?qū)λ幸卟∶庖咝Ч疾焕硐氲慕Y(jié)果，因此亟需一種能夠同時(shí)表達(dá)多種外源抗原基因且穩(wěn)定傳代，
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒。
2、本專利技術(shù)的目的還在于提供一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒構(gòu)建方法。
3、本專利技術(shù)的目的還在于提供一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒的應(yīng)用。
4、為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
5、一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒，所述重組火雞皰疹病毒是將包含雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、h9亞型禽流感病毒ha基因和雞傳染性法氏囊病毒新型變異株vp2基因編碼序列haa2、土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列以及兔β球蛋白多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架cagw-haa2插入到火雞皰疹病毒基因組，同時(shí)將包含小鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因編碼序列以及sv40多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架cmv-ibdv2插入到火雞皰疹病毒基因組后獲得的。
6、進(jìn)一步的，所述編碼序列haa2是由h9亞型禽流感病毒ha基因編碼序列和傳染性法氏囊病毒新型變異株vp2基因編碼序列以豬捷申病毒2a自剪切肽編碼序列連接獲得，所述編碼序列haa2的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
7、進(jìn)一步的，所述表達(dá)框架cagw-haa2是將目的基因編碼序列haa2克隆入pcaggs載體的雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子和兔β球蛋白多聚腺苷酸序列之間，并將土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列插入haa2與兔β球蛋白多聚腺苷酸序列之間獲得，所述表達(dá)框架cagw-haa2的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
8、進(jìn)一步的，所述表達(dá)框架cmv-ibdvc2是將雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因克隆入pcmv載體的小鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子和sv40多聚腺苷酸序列之間獲得的。
9、進(jìn)一步的，所述重組火雞皰疹病毒是將含有火雞皰疹病毒fc126株基因組dna片段的重組黏粒hvt01、hvt02、hvt03、hvt06，含有h9亞型禽流感病毒ha基因和雞傳染性法氏囊病毒新型變異株vp2基因表達(dá)框架的重組黏粒hvt04-53-haa2，以及含有雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因表達(dá)框架的重組黏粒hvt05-65-ibdv2共轉(zhuǎn)染至雞胚成纖維細(xì)胞后，通過(guò)病毒拯救獲得的；所述的重組黏粒hvt01、hvt02、hvt03、hvt06分別含有火雞皰疹病毒fc126株基因組第1-30189位、第21572-61476位，第50871-90478位、第129602-159160位核苷酸片段。
10、進(jìn)一步的，所述的重組黏粒hvt04-53-haa2是在hvt04的基礎(chǔ)上，在hvt基因組95322-95323位核苷酸之間插入表達(dá)框架cagw-haa2后獲得的；所述的重組黏粒hvt04包含fc126株基因組73762-108139位的核苷酸片段。
11、進(jìn)一步的，所述的重組黏粒hvt05-65-ibdv2是在hvt05的基礎(chǔ)上，在hvt基因組112071-112088位核苷酸之間插入表達(dá)框架cmv-ibdv2后獲得的；所述的重組黏粒hvt05包含fc126株基因組96776-135815位的核苷酸片段。
12、一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒在制備h9亞型禽流感和雞傳染性法氏囊病疫苗中的應(yīng)用。
13、本專利技術(shù)利用重組克隆技術(shù)，將包含雞傳染性法氏囊病毒新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的表達(dá)框架插入到火雞皰疹病毒基因組的95322-95323位核苷酸之間，同時(shí)將雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因表達(dá)框架插入到火雞皰疹病毒基因組的112071-112088位核苷酸之間，構(gòu)建了共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒疫苗株h20401。
14、本專利技術(shù)提供的重組病毒制備的疫苗能夠提供針對(duì)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異毒株以及h9亞型禽流感病毒感染的多重保護(hù)，具有良好的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述重組火雞皰疹病毒是將包含雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、H9亞型禽流感病毒HA基因和雞傳染性法氏囊病毒新型變異株VP2基因編碼序列HAA2、土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列以及兔β球蛋白多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架CAGW-HAA2插入到火雞皰疹病毒基因組，同時(shí)將包含小鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因編碼序列以及SV40多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架CMV-IBDV2插入到火雞皰疹病毒基因組后獲得的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述編碼序列HAA2是由H9亞型禽流感病毒HA基因編碼序列和傳染性法氏囊病毒新型變異株VP2基因編碼序列以豬捷申病毒2A自剪切肽編碼序列連接獲得，所述編碼序列HAA2的核苷酸序列如SEQ?IDNO.1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述表達(dá)框架CMV-IBDVC2是將雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因克隆入pCMV載體的小鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子和SV40多聚腺苷酸序列之間獲得的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述重組火雞皰疹病毒是將含有火雞皰疹病毒FC126株基因組DNA片段的重組黏粒HVT01、HVT02、HVT03、HVT06，含有H9亞型禽流感病毒HA基因和雞傳染性法氏囊病毒新型變異株VP2基因表達(dá)框架的重組黏粒HVT04-53-HAA2，以及含有雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因表達(dá)框架的重組黏粒HVT05-65-IBDV2共轉(zhuǎn)染至雞胚成纖維細(xì)胞后，通過(guò)病毒拯救獲得的；
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述的重組黏粒HVT04-53-HAA2是在HVT04的基礎(chǔ)上，在HVT基因組95322-95323位核苷酸之間插入表達(dá)框架CAGW-HAA2后獲得的；所述的重組黏粒HVT04包含F(xiàn)C126株基因組73762-108139位的核苷酸片段。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述的重組黏粒HVT05-65-IBDV2是在HVT05的基礎(chǔ)上，在HVT基因組112071-112088位核苷酸之間插入表達(dá)框架CMV-IBDV2后獲得的；所述的重組黏粒HVT05包含F(xiàn)C126株基因組96776-135815位的核苷酸片段。
8.一種如權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株VP2基因以及H9亞型禽流感病毒HA基因的重組火雞皰疹病毒在制備禽流感和雞傳染性法氏囊病疫苗中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述重組火雞皰疹病毒是將包含雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、h9亞型禽流感病毒ha基因和雞傳染性法氏囊病毒新型變異株vp2基因編碼序列haa2、土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列以及兔β球蛋白多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架cagw-haa2插入到火雞皰疹病毒基因組，同時(shí)將包含小鼠巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因編碼序列以及sv40多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架cmv-ibdv2插入到火雞皰疹病毒基因組后獲得的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述編碼序列haa2是由h9亞型禽流感病毒ha基因編碼序列和傳染性法氏囊病毒新型變異株vp2基因編碼序列以豬捷申病毒2a自剪切肽編碼序列連接獲得，所述編碼序列haa2的核苷酸序列如seq?idno.1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述表達(dá)框架cagw-haa2是將目的基因編碼序列haa2克隆入pcaggs載體的雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子和兔β球蛋白多聚腺苷酸序列之間，并將土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列插入haa2與兔β球蛋白多聚腺苷酸序列之間獲得，所述表達(dá)框架cagw-haa2的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株和新型變異株vp2基因以及h9亞型禽流感病毒ha基因的重組火雞皰疹病毒，其特征在于，所述表達(dá)框架cmv-ibdvc2是將雞傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因克隆入pcmv載...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李凱，田世茂，李曉涵，王笑梅，李守軍，車艷杰，朱秀同，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院都市農(nóng)業(yè)研究所，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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