【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及小分子as2863619在改善牙周膜干細胞功能中的應用。
技術介紹
1、牙周組織，特別是骨組織的退化，最終會損害牙齒的支持。牙周炎是導致牙周破壞的首要因素。基于干細胞的組織工程技術的出現為治療牙周骨缺損提供了一種新穎而有前途的方法。
2、為了實現更高效和精確的組織再生，種子細胞的類型、功能和活性起著至關重要的作用。牙周膜干細胞(periodontal?ligament?stem?cells,pdlscs)是位于牙周韌帶的一類間充質干細胞(mesenchymal?stem?cells,mscs)，具有包括成骨和成脂譜系分化等多譜系分化能力和極強的免疫調節能力。另外，牙周膜干細胞的來源豐富，倫理爭議較小，可特異性地分化出牙周相關組織，因此，可作為牙周組織再生中最理想的種子細胞。然而，越來越多的證據表明，牙周膜干細胞在體外擴增培養中或炎癥環境刺激下逐漸失去其功能，從而限制了其在組織工程中的應用。
3、因此，提高牙周膜干細胞在體外擴增過程中的功能特性或改善牙周膜干細胞在炎癥環境下的功能損傷，進一步推進其在牙周組織降解中的應用成為當務之急。
技術實現思路
1、為了解決上述技術問題，本專利技術提供了小分子as2863619在改善牙周膜干細胞功能中的應用。本專利技術通過在體外擴增牙周膜干細胞的培養基中添加小分子as2863619，發現該培養基可以明顯改善牙周膜干細胞的綜合功能。
2、為了實現上述之專利技術目的，本專利技術提供
3、第一方面，本專利技術提供了小分子as2863619在改善牙周膜干細胞功能中的應用，其特征在于，所述改善牙周膜干細胞功能具體為，
4、a)提高牙周膜干細胞的干性和/或免疫調節能力；和/或
5、b)促進牙周膜干細胞的成骨分化；和/或
6、c)抑制牙周膜干細胞的成脂分化。
7、在本專利技術中，小分子as2863619是一種有效的、口服的細胞周期蛋白依賴性激酶8(cdk8)和cdk19抑制劑，結構式如圖1所示，名稱：4-(1-(2-甲基-1h-苯并[d]咪唑-6-基)-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-基)-1,2,5-惡二唑-3-胺二鹽酸鹽，cas編號：2241300-51-4，分子式：c16h14cl2n8o。as2863619可以將抗原特異性效應子/記憶t細胞轉換為foxp3+調節性t(treg)細胞，以研究各種免疫疾病。as2863619是一種有效的口服的細胞周期蛋白依賴性激酶8(cdk8)和cdk19抑制劑，ic50分別為0.61nm和4.28nm。as2863619抑制cdk8/19可增強stat5的激活，從而激活foxp3基因。
8、第二方面，本專利技術還提供了一種用于提高牙周膜干細胞的干性和/或免疫調節能力、和/或促進牙周膜干細胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干細胞成脂分化的培養基，所述培養基包含as2863619。
9、在一些實施方案中，所述as2863619的用量為(250-500)nm；在具體實施方案中，所述as2863619的用量為250nm或500nm。
10、進一步地，所述培養基中包含amem基礎培養基、8％-10％胎牛血清和0.5％-1.5％雙抗；優選地，所述胎牛血清為10％，所述雙抗為青霉素-鏈霉素混合液(penicillin-streptomycin?solution,p/s)，用量為1％。
11、采用上述技術方案，在基礎培養基中添加as2863619、胎牛血清、雙抗，對牙周膜干細胞進行增殖誘導，獲得的牙周膜干細胞具有很好的干性和免疫調節能力。
12、進一步地，所述培養中還包含β-甘油磷酸酯、地塞米松和l-抗壞血酸。
13、進一步地，所述β-甘油磷酸酯的用量為(8-10)mm，所述地塞米松的用量為(80-120)nm，所述l-抗壞血酸的用量為(40-60)μg/ml。優選地，所述地塞米松的用量為100nm，所述l-抗壞血酸的用量為50μg/ml。
14、采用上述技術方案，在基礎培養基中添加as2863619、胎牛血清、雙抗、β-甘油磷酸酯、地塞米松和l-抗壞血酸，對牙周膜干細胞進行成骨分化誘導，相比對照而言，as2863619能夠明顯促進pdlsc成骨分化。
15、進一步地，所述培養中還包含地塞米松、吲哚美辛、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤和l-抗壞血酸。
16、進一步地，所述地塞米松的用量為(0.5-1.5)μm，所述吲哚美辛的用量為(80-120)μm，所述3-異丁基-1-甲基黃嘌呤的用量為(400-600)μm，所述l-抗壞血酸的用量為(40-60)μg/ml。優選地，所述地塞米松的用量為1μm，所述吲哚美辛的用量為100μm，所述3-異丁基-1-甲基黃嘌呤的用量為500μm，所述l-抗壞血酸的用量為50μg/ml。
17、采用上述技術方案，在基礎培養基中添加as2863619、胎牛血清、雙抗、地塞米松、吲哚美辛、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤和l-抗壞血酸，對牙周膜干細胞進行成脂分化誘導，相比對照而言，處理21天后脂滴的形成被顯著抑制，as2863619能夠明顯抑制牙周膜干細胞的脂肪生成。
18、第三方面，本專利技術還提供了一種提高牙周膜干細胞的干性和/或免疫調節能力、和/或促進牙周膜干細胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干細胞成脂分化的方法，所述方法包括采用本專利技術第二方面所述的培養體系對牙周膜干細胞進行培養。
19、第四方面，本專利技術還提供了采用本專利技術第三方面的方法培養獲得的牙周膜干細胞。
20、第五方面，本專利技術還提供了基于本專利技術第二方面所述的培養基、本專利技術第三方面所述的方法和第四方面得到的牙周膜干細胞在預防、治療和/或改善牙周膜干細胞相關疾病或障礙中的應用。
21、進一步地，所述牙周膜干細胞相關疾病或障礙是指需要進行牙周膜干細胞輸注的相關疾病或障礙，包括但不限于：牙周病、牙齒缺失、牙槽骨缺損、頜面部骨缺損和自身免疫性疾病等。
22、在一些實施方案中，通過一種或多種選自全身、局部、靜脈內、皮下、關節內、肌內、鞘內和腹膜內的途徑向所述受試者施用所述紅細胞。在一些實施方案中，所述受試者包括一種或多種動物，包括例如牛、馬、綿羊、靈長類動物、禽類和嚙齒類動物物種。所述受試者可以是其血液中包含紅細胞的動物(例如，哺乳動物、鳥、魚、爬行動物或兩棲動物)。在一些實施方案中，所述受試者可以是哺乳動物，例如人或非人哺乳動物。在另一些實施方案中，所述受試者可以是小鼠、大鼠、倉鼠、白鼬、沙鼠、兔、猴子、黑猩猩、馬、矮種馬、驢、綿羊、豬、雞、山羊、貓或狗。在優選的實施方案中，所述受試者為人。
23、本專利技術相對于現有技術而言，首次發現小分子as2863619能夠提高牙周膜干細胞的干性和/或免疫調節能力，促進牙周膜干細胞成骨分化，以及抑制牙周膜干細胞的成脂分化。將小分子as2863619添加至培養基中，可以提高本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.小分子AS2863619在改善牙周膜干細胞功能中的應用，其特征在于，所述改善牙周膜干細胞功能具體為，
2.一種用于提高牙周膜干細胞的干性和/或免疫調節能力、和/或促進牙周膜干細胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干細胞成脂分化的培養基，其特征在于，所述培養基包含AS2863619。
3.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述AS2863619的用量為(250-500)nM。
4.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述培養基中包含aMEM基礎培養基、8％-10％胎牛血清和0.5％-1.5％雙抗。
5.根據權利要求4所述的培養基，其特征在于，所述培養中還包含β-甘油磷酸酯、地塞米松和L-抗壞血酸。
6.根據權利要求5所述的培養基，其特征在于，所述β-甘油磷酸酯的用量為(8-10)mM，所述地塞米松的用量為(80-120)nM，所述L-抗壞血酸的用量為(40-60)μg/mL。
7.根據權利要求4所述的培養基，其特征在于，所述培養中還包含地塞米松、吲哚美辛、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤和L-抗壞血酸。
...【技術特征摘要】
1.小分子as2863619在改善牙周膜干細胞功能中的應用，其特征在于，所述改善牙周膜干細胞功能具體為，
2.一種用于提高牙周膜干細胞的干性和/或免疫調節能力、和/或促進牙周膜干細胞成骨分化、和/或抑制牙周膜干細胞成脂分化的培養基，其特征在于，所述培養基包含as2863619。
3.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述as2863619的用量為(250-500)nm。
4.根據權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述培養基中包含amem基礎培養基、8％-10％胎牛血清和0.5％-1.5％雙抗。
5.根據權利要求4所述的培養基，其特征在于，所述培養中還包含β-甘油磷酸酯、地塞米松和l-抗壞血酸。
6.根據權利要求5所述的培養基，其特征在于，所述β-甘油磷酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：胡田勇，賀海鵬，劉志強，程保輝，黃佳敏，
申請(專利權)人：深圳市龍崗區耳鼻咽喉醫院深圳市耳鼻咽喉研究所，深圳市龍崗區口腔醫學研究所，
類型：發明
國別省市：
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