【技術實現步驟摘要】
技術介紹
1、自然殺傷t細胞(nkt細胞)代表表達自然殺傷(nk)細胞表面標志物的t淋巴細胞的子集。nkt細胞的子集(稱為恒定nkt細胞(inkt))表達高度受限的t細胞受體(tcr)。盡管inkt細胞在連接先天性和適應性免疫反應中起重要作用并且已經涉及多種疾病，例如感染性疾病、過敏、哮喘、自身免疫和腫瘤監測(juno等plos?pathog.2012；8(8))，它們的激活通常需要cd1d限制性脂質配體α-半乳糖苷神經酰胺(gal-cer)。引入gal-cer(例如以gal-cer/cd1d四聚體的形式)所需的程序可以顯著地增加使用這些nkt細胞治療患者的費用并且在一些情況下限制它們的治療性用途的范圍。因此，對可用于治療具有廣泛組織類型的患者的安全且有成本效益的nkt細胞療法的需求仍然存在。
技術實現思路
1、本文提供了可以在不存在gal-cer的情況下被激活的cik?nkt細胞。在一些實施方式中，大于50％的所述cik?nkt細胞群體中的所述細胞表達cd?56和cd3并且小于10％的所述群體中的所述細胞表達va24。還提供了包含來自所述群體的多個cik?nkt細胞的組合物和試劑盒。還提供了產生所述cin?nkt細胞和使用所述細胞治療癌癥的方法。
2、本公開提供了一種cik?nkt細胞的群體，其中大于50％的所述群體中的所述細胞表達cd?56和cd3并且小于10％的所述群體中的所述細胞表達va24。
3、任選地，所述cik?nkt細胞的群體可以在不存在α
4、任選地，所述cik?nkt細胞以1.0至10.0之間的ec50殺傷多個所述靶細胞。任選地，所述cik?nkt細胞可以以不小于所述cik?nkt細胞在存在gal-cer的情況下殺傷所述靶細胞的所述ec50的90％且不大于所述ec50的110％的ec50殺傷所述靶細胞。
5、本公開還提供了一種組合物，其包含來自上述cik?nkt細胞的群體中的任一者的多個cik?nkt細胞和生理上可接受的賦形劑。
6、還提供了一種用于治療癌癥的試劑盒，其包含來自上述cik?nkt細胞的群體中的任一者的多個cik?nkt細胞和容器和/或顯示所述試劑盒是用于治療癌癥的標簽。
7、還提供了一種從臍帶血樣品中富集cik?nkt細胞的方法，所述方法包括：從所述臍帶血樣品中分離單核細胞；和使分離的單核細胞與選自il-7、alt-803或il-15、flt3配體和gal-cer的一種或多種試劑接觸，從而富集cik?nkt細胞。il-7，如果存在，濃度范圍可以是5至20ng/ml。alt-803，如果存在，濃度范圍可以是100至300ng/ml。flt3配體，如果存在，濃度范圍可以是5至20ng/ml。gal-cer，如果存在，濃度范圍可以是2至10μg/ml。
8、任選地，所述方法還包括從所述臍帶血樣品的其余部分分離富集的cik?nkt細胞。任選地，所述方法進一步包括使所述分離的cik?nkt細胞與抗cd3、抗cd28和il2接觸以擴增所述cik?nkt細胞。任選地，所述方法進一步包括使所述分離的cik?nkt細胞與gal-cer接觸。任選地，所述gal-cer以載有gal-cer的cd1d四聚體的形式被使用。任選地，所述抗cd3抗體以5ng/ml至60ng/ml的量存在。任選地，所述抗cd28抗體以0.1μg/ml至2μg/ml的量存在。任選地，il-2以50ng/ml至500ng/ml的濃度存在。任選地，cik?nkt細胞的富集和/或擴增不包括干擾素-γ。
9、還提供了一種通過上述的富集、分離和擴增cik?nkt細胞的方法產生的cik?nkt細胞的群體。
10、還提供了一種在有需要的患者中治療癌癥或病毒感染的方法，所述方法包括向所述患者施用治療有效量的來自如上所述的cik?nkt細胞的群體中的任一者的cik?nkt細胞，從而治療癌癥。任選地，將每平方米所述患者的體表面積約1x108至約1x1011個細胞施用于患者。任選地，所述癌癥選自白血病、淋巴瘤、真性紅細胞增多癥、多發性骨髓瘤、華氏巨球蛋白血癥(waldenstrom’smacroglobulinemia)、重鏈病、肉瘤和癌。任選地，通過選自靜脈內的、腹膜內的和皮下的途徑將所述細胞施用于所述患者。任選地，所述方法進一步包括施用抗體。
11、還提供了權利要求1所述的cik?nkt細胞的群體，其中所述cik?nkt細胞表達car和/或細胞因子，并且大于50％的所述cik?nkt細胞群體中的所述細胞表達cd?56和cd3和小于10％的所述群體中的所述細胞表達va24。
12、前述的一般描述和以下的詳細描述是示例性和說明性的并且旨在提供對本公開的進一步說明。其他目的、優點和新穎特征對本領域技術人員將是顯而易見的。
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1.一種CIK?NKT細胞的群體，其中大于50％的所述群體中的所述細胞表達CD?56和CD3，并且小于10％的所述群體中的所述細胞表達Va24。
2.根據權利要求1所述的CIK?NKT細胞的群體，其中所述CIK?NKT細胞可以在不存在α-半乳糖苷神經酰胺(Gal-Cer)的情況下殺傷靶細胞。
3.根據權利要求1所述的CIK?NKT細胞的群體，其中所述靶細胞是癌細胞。
4.根據權利要求2所述的CIK?NKT細胞的群體，其中所述CIK?NKT細胞以1.0至10.0之間的EC50殺傷多個所述靶細胞。
5.根據權利要求4所述的CIK?NKT細胞的群體，其中所述CIK?NKT細胞可以以不小于所述CIK?NKT細胞在存在Gal-Cer的情況下殺傷所述靶細胞的所述EC50的90％且不大于所述EC50的110％的EC50殺傷所述靶細胞。
6.一種組合物，其包含來自權利要求1中任一項所述的CIK?NKT細胞的群體的多個CIKNKT細胞和生理上可接受的賦形劑。
7.一種用于從血液樣品培養CIK?NKT細胞的試劑盒，所述試劑盒包含
8.一種細胞培養混合物，其包含單核細胞以及i)IL-7，ii)ALT-803或IL-15，iii)FLT3配體，和iv)Gal-Cer。
9.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述單核細胞包含CIK?NKT細胞的群體，其中大于50％的所述群體中的所述細胞表達CD?56和CD3，并且小于10％的所述群體中的所述細胞表達Va24。
10.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述單核細胞來源于臍帶血樣品。
11.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述單核細胞來源于外周血樣品。
12.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述IL-7的濃度范圍為5至20ng/mL。
13.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述ALT-803的濃度范圍為100至300ng/mL。
14.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述FLT3配體以5至20ng/mL的濃度范圍存在。
15.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述Gal-Cer以2至10μg/mL的濃度范圍存在。
16.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述Gal-Cer以載有Gal-Cer的CD1d四聚體的形式存在。
17.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述細胞培養混合物還包含抗CD3抗體、抗CD28抗體和IL2。
18.根據權利要求17所述的細胞培養混合物，其中所述抗CD3抗體以5ng/mL至60ng/mL的量存在。
19.根據權利要求17所述的細胞培養混合物，其中所述抗CD28抗體以0.1μg/mL至2μg/mL的量存在。
20.根據權利要求17所述的細胞培養混合物，其中所述IL-2以50ng/mL至500ng/mL的濃度存在。
...【技術特征摘要】
1.一種cik?nkt細胞的群體，其中大于50％的所述群體中的所述細胞表達cd?56和cd3，并且小于10％的所述群體中的所述細胞表達va24。
2.根據權利要求1所述的cik?nkt細胞的群體，其中所述cik?nkt細胞可以在不存在α-半乳糖苷神經酰胺(gal-cer)的情況下殺傷靶細胞。
3.根據權利要求1所述的cik?nkt細胞的群體，其中所述靶細胞是癌細胞。
4.根據權利要求2所述的cik?nkt細胞的群體，其中所述cik?nkt細胞以1.0至10.0之間的ec50殺傷多個所述靶細胞。
5.根據權利要求4所述的cik?nkt細胞的群體，其中所述cik?nkt細胞可以以不小于所述cik?nkt細胞在存在gal-cer的情況下殺傷所述靶細胞的所述ec50的90％且不大于所述ec50的110％的ec50殺傷所述靶細胞。
6.一種組合物，其包含來自權利要求1中任一項所述的cik?nkt細胞的群體的多個ciknkt細胞和生理上可接受的賦形劑。
7.一種用于從血液樣品培養cik?nkt細胞的試劑盒，所述試劑盒包含i)il-7，ii)alt-803或il-15，iii)flt3配體，和iv)gal-cer。
8.一種細胞培養混合物，其包含單核細胞以及i)il-7，ii)alt-803或il-15，iii)flt3配體，和iv)gal-cer。
9.根據權利要求8所述的細胞培養混合物，其中所述單核細胞包含cik?nkt細胞的群體，其中...
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