【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專(zhuān)利技術(shù)為一種類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，屬于檢測(cè)分析。
技術(shù)介紹
1、類(lèi)固醇類(lèi)(steroids)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物是一類(lèi)具有多環(huán)結(jié)構(gòu)的生物活性物質(zhì)，屬于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(edcs)。這類(lèi)物質(zhì)具有穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，來(lái)源廣泛，生物富集性強(qiáng)，隱蔽性好，污染持久，對(duì)生態(tài)環(huán)境及人體健康存在較大風(fēng)險(xiǎn)。其中比較典型的幾類(lèi)包括雌酮(estrone,e1)、17β-雌二醇(17β-estradiol,e2)、雌三醇(estriol,e3)以及17α-乙炔基雌二醇(17α-ethynylestradiol,ee2)。其中ee2為人工合成激素，對(duì)生物體的健康造成影響，例如對(duì)斑馬魚(yú)的胚胎毒性。e1會(huì)對(duì)生物精子質(zhì)量和數(shù)量產(chǎn)生影響。此外，環(huán)境中的e2也對(duì)生物有著不同程度的影響。由此可見(jiàn)，這類(lèi)物質(zhì)對(duì)生態(tài)環(huán)境及人類(lèi)健康有著顯著的影響。隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，對(duì)該類(lèi)新型污染物的監(jiān)測(cè)已顯得尤為重要。因此，研究具有普遍適用性、能夠滿(mǎn)足大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室條件的準(zhǔn)確且穩(wěn)定的檢測(cè)方法具有重要意義。
2、目前國(guó)內(nèi)類(lèi)固醇類(lèi)的檢測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法(羅慶等.固相萃取-衍生化-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定水中類(lèi)固醇類(lèi)雌激素。理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)).2015,51(10))，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(周永順等.超聲波提取-固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定沉積物中24種皮質(zhì)類(lèi)固醇激素[j].色譜,2022,40(02):165-174.)等檢測(cè)方法。液相色譜-質(zhì)譜法雖然靈敏度高，但儀器成本較高，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員操作要求高，且系統(tǒng)誤差較大，許多實(shí)驗(yàn)室缺乏相應(yīng)條件。
3、目前，雌激素衍生化主要依賴(lài)于兩種試劑：n-甲基-n-(三甲基硅基)三氟乙酰胺(mstfa)和n,o-雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺(bstfa)。研究人員已使用mstfa對(duì)水和生物組織中的雌激素進(jìn)行了分析(h.m.kuch,k.ballschmiter,determination?of?endogenousand?exogenous?estrogens?in?effluents?from?sewage?treatment?plants?at?the?ng/l-level,fresenius?j?anal?chem?366(4)(2000)392-5.)。而bstfa則用于檢測(cè)廢水中的甾體激素(y.zhou,j.zha,z.wang,occurrence?and?fate?of?steroid?estrogens?in?thelargest?wastewater?treatment?plant?in?beijing,china,environ?monit?assess?184(11)(2012)6799-813.)。
4、現(xiàn)有的衍生化法在檢測(cè)雌激素衍生物(包括e1或ee2)時(shí)，在完成衍生化反應(yīng)后，通常使用二氯甲烷，正己烷或其混合溶劑作為注射溶劑對(duì)樣品進(jìn)行稀釋定容；這會(huì)導(dǎo)致ee2的衍生化產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)閑1的衍生化產(chǎn)物從而使檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性受到影響。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)方法的不足，本專(zhuān)利技術(shù)提供了一種基于衍生化基團(tuán)作為子離子的氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(gc-ms/ms)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(mrm)模式的類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物衍生化的分析檢測(cè)方法。同時(shí)，提出一種針對(duì)衍生化物在串聯(lián)質(zhì)譜下的新檢測(cè)思路，即通過(guò)二次碰撞獲取特征離子碎片上來(lái)自苯環(huán)上的結(jié)構(gòu)完整的衍生化基團(tuán)(tms)來(lái)對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定量。為廣大實(shí)驗(yàn)室提供一種成本較低、抗干擾能力較強(qiáng)、靈敏度較高，相關(guān)性較好且具有普遍適用性的類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的檢測(cè)方法。
2、本專(zhuān)利技術(shù)以衍生化基團(tuán)作為子離子的類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的檢測(cè)方法是將待檢測(cè)樣品用衍生化試劑衍生化處理，衍生化產(chǎn)物用吡啶稀釋定容后，采用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(gc-ms/ms)儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析，檢測(cè)中采用衍生化基團(tuán)作為子離子對(duì)不同類(lèi)固醇衍生化產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。
3、所述類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物為雌酮(e1)、17β-雌二醇(e2)、雌三醇(e3)或17α-乙炔基雌二醇(ee2)。
4、待檢測(cè)樣品的制備如下：
5、1、液體樣品是先使用0.45μm濾膜過(guò)濾，濾液用活化后的固相萃取柱pls對(duì)類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物進(jìn)行富集，甲醇-丙酮混合液對(duì)固相萃取柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，干燥后，加入衍生化試劑，在室溫下震蕩反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用用吡啶稀釋定容，制得待檢測(cè)樣品；
6、2、固體樣品是冷凍干燥后與硅藻土混合，使用加速溶劑萃取法利用甲醇-丙酮混合液進(jìn)行萃取，萃取液濃縮至3ml左右、使用固相萃取柱pls凈化、吹干，加入衍生化試劑，在室溫下震蕩反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用吡啶稀釋定容，制得待檢測(cè)樣品，其中冷凍干燥物與硅藻土的質(zhì)量比為1-2:1。
7、所述甲醇-丙酮混合液是甲醇和丙酮按體積比1:1-3的比例混合制得；衍生化試劑為n-甲基-n-(三甲基硅基)三氟乙酰胺(mstfa)或n,o-雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺(bstfa)，當(dāng)衍生化試劑為n,o-雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺時(shí)，反應(yīng)在室溫下震蕩反應(yīng)；當(dāng)衍生化試劑為n-甲基-n-(三甲基硅基)三氟乙酰胺時(shí)，在55-60℃下反應(yīng)。
8、本專(zhuān)利技術(shù)通過(guò)scan模式掃描、碰撞能量?jī)?yōu)化、檢測(cè)器電壓優(yōu)化，最終確立了4種類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的定量離子對(duì)為tms-e1?257m/z>73m/z；di-tms-e2?285m/z>73m/z；di-tms-ee2?285m/z>73m/z；tri-tms-e3?345m/z>73m/z；以三甲基硅離子基團(tuán)(tms)作為子離子，其質(zhì)荷比為73。
9、gc-ms/ms儀器分析條件為：色譜柱為cbx-5ms，載氣為氦氣，cid氣為氬氣，流速1ml/min，不分流方式進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度280℃，進(jìn)樣體積1μl；色譜柱柱箱：起始溫度50℃，保持2min，以20℃/min升溫至240℃，保持2min，以12℃/min升溫至260℃，保持3min，以3℃/min升溫至280℃，保持4min。接口溫度300℃，ei離子源溫度250℃，電子轟擊能量70ev，溶劑延時(shí)12min，質(zhì)譜掃描起始時(shí)間14.7min，結(jié)束時(shí)間28min。
10、本專(zhuān)利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果：
11、本專(zhuān)利技術(shù)簡(jiǎn)化了衍生化的溶劑配合問(wèn)題，可直接使用衍生化試劑對(duì)提取的樣品進(jìn)行衍生化反應(yīng)，保證了衍生化產(chǎn)物的單一性和穩(wěn)定性，避免了分析過(guò)程中ee2的衍生化產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為e1的衍生化產(chǎn)物這一問(wèn)題；同時(shí)，本專(zhuān)利技術(shù)采用衍生化基團(tuán)進(jìn)行定量，根據(jù)hj168-2020的要求完成了方法檢出限和精密度的測(cè)定，結(jié)果表明，本專(zhuān)利技術(shù)擁有較高的相關(guān)性和較低的檢出限，和良本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種基于GC-MS/MS檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：待檢測(cè)樣品用衍生化試劑衍生化處理，衍生化產(chǎn)物用吡啶稀釋定容后，采用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析，檢測(cè)中采用衍生化基團(tuán)作為子離子對(duì)不同類(lèi)固醇衍生化產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于GC-MS/MS檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物為雌酮、17β-雌二醇、雌三醇或17α-乙炔基雌二醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于GC-MS/MS檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：液體樣品是先使用0.45μm濾膜過(guò)濾，濾液用活化后的固相萃取柱對(duì)類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物進(jìn)行富集，甲醇-丙酮混合液對(duì)固相萃取柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，干燥后制得待檢測(cè)樣品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于GC-MS/MS檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：固體樣品是冷凍干燥后與硅藻土混合，使用加速溶劑萃取法利用甲醇-丙酮混合液進(jìn)行萃取，萃取液濃縮、凈化、吹干，制得待檢測(cè)樣品，其中冷凍干燥物與硅藻土的質(zhì)量比為1-2:1。
5.根據(jù)權(quán)利要
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于GC-MS/MS檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：衍生化基團(tuán)為三甲基硅烷離子團(tuán)，其質(zhì)荷比為73，針對(duì)4種類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的定量離子對(duì)為T(mén)MS-E1?257m/z>73m/z；di-TMS-E2?285m/z>73m/z；di-TMS-EE2285m/z>73m/z；tri-TMS-E3?345m/z>73m/z。
7.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的基于GC-MS/MS檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：甲醇-丙酮混合液是甲醇和丙酮按體積比1:1-3的比例混合制得。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種基于gc-ms/ms檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：待檢測(cè)樣品用衍生化試劑衍生化處理，衍生化產(chǎn)物用吡啶稀釋定容后，采用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)分析，檢測(cè)中采用衍生化基團(tuán)作為子離子對(duì)不同類(lèi)固醇衍生化產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gc-ms/ms檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物為雌酮、17β-雌二醇、雌三醇或17α-乙炔基雌二醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gc-ms/ms檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：液體樣品是先使用0.45μm濾膜過(guò)濾，濾液用活化后的固相萃取柱對(duì)類(lèi)固醇類(lèi)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物進(jìn)行富集，甲醇-丙酮混合液對(duì)固相萃取柱進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，干燥后制得待檢測(cè)樣品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于gc-ms/ms檢測(cè)類(lèi)固醇類(lèi)內(nèi)分泌干擾物的方法，其特征在于：固體樣品是冷凍干燥后與硅藻土混合，使用加速溶劑萃取法利用甲醇-丙酮混合液進(jìn)行萃取，萃取液濃縮、凈化、吹干，制得待檢測(cè)樣品，其中冷凍干燥物與...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李銳，卞世聞，周圓，閆琨，徐小峰，楊曉冬，張瑩，楊瑩，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：云南省生態(tài)環(huán)境廳駐昆明市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)站，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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