【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
相關申請的交叉引用本申請要求于2023年2月1日向韓國知識產權局提交的韓國專利申請第10-2023-0013569號和于2023年5月11日向韓國知識產權局提交的韓國專利申請第10-2023-0061331號的權益，其公開內容通過引用整體并入本文。本申請涉及多孔顆粒及其制備方法。更具體地，本申請涉及用于親和色譜法的多孔顆粒及其制備方法。
技術介紹
1、隨著生物制藥和再生醫學領域擴展，對可以有效地分離和純化細胞、組織、微生物等的體系的需求日益增加。
2、在常規的親和色譜技術中，主要使用由親水性瓊脂糖制成的純化樹脂，但是這樣的樹脂在純化過程期間被緩沖溶液溶脹，并因此引起強度降低，這導致純化速度和純化效率劣化。因此，已經嘗試制備具有改善的強度的合成聚合物。
3、當使用純化樹脂時，雜質的非特異性結合主要通過疏水性相互作用發生。吸附的雜質可能污染純化的樹脂顆粒，并對固定在樹脂上的蛋白a配體的活性和目標物質的結合具有不利影響。此外，如果雜質與純化目標物質一起流出，則最終產物的純度降低，并且如果雜質被施用于患者，則其可能引發免疫反應。
4、因此，需要開發關于可以減少非特異性吸附的顆粒及其制備方法的技術。
技術實現思路
1、技術問題
2、本申請的一個目的是提供具有開孔體系的多孔顆粒。
3、本申請的另一個目的是提供非特異性吸附減少的多孔顆粒。
4、本申請的另一個目的是提供用于蛋白質純化的顆粒(例如，柱樹脂)。
5、本
6、本申請的再一個目的是提供用于制備如上所述的多孔顆粒的方法。
7、本申請的以上和其他目的可以全部通過下面詳細描述的本申請來解決。
8、技術方案
9、根據本申請的一個實施方案，提供了多孔顆粒及其制備方法。所述顆粒可用作用于蛋白質純化的顆粒(柱樹脂)，特別地用于親和色譜法的顆粒。在本文中，“多孔顆粒”可以意指在各顆粒的內部和/或表面上具有孔的顆粒。更具體地，多孔顆粒可以意指具有開孔體系的顆粒。
10、將用于蛋白質純化的顆粒(柱樹脂)暴露于含有抗體蛋白質和其他細胞培養物來源的雜質的溶液。因此，出現雜質非特異性地吸附在顆粒表面上的情況。為了確保顆粒與目標物質之間的結合并提高最終產物的純度，必須減少雜質的非特異性吸附。本申請的專利技術人在實驗上確定了下述制備方法和由此制備的顆粒可以減少這樣的非特異性吸附，并完成了本申請的專利技術。
11、具體地，為了使多孔顆粒在親和色譜法中具有足夠的純化能力，目標物質(例如，igg)必須能夠盡可能多地與蛋白a配體結合。為了盡可能多地提供這樣的結合，必須將大量的配體固定至顆粒，因為顆粒的比表面積高。為了增加比表面積，顆粒的孔必須足夠大，并且孔的數目(或孔隙率)也必須確保在高水平。這是因為，如果顆粒的孔小，當固定配體時，配體可能無法移動到顆粒的內部，并且當將目標物質純化時，目標物質可能無法在內部移動。此外，為了順利進行純化，顆粒的形狀需要均勻。
12、此外，在純化過程期間，雜質蛋白質與純化顆粒之間的吸附主要通過雜質蛋白質與純化顆粒之間的疏水鍵發生，使得當顆粒具有更多親水性基團時，可以減少疏水鍵(非特異性吸附)。
13、考慮到這樣的觀點，本申請的專利技術人對用于制備多孔顆粒的材料、其含量、反應條件、顆粒的表面特性等進行了廣泛的研究，并完成了本申請的專利技術。
14、現在，將更詳細地描述本申請的專利技術。
15、在與本申請相關的一個實施方案中，本申請涉及用于制備多孔顆粒的方法。根據本申請的方法制備的多孔顆粒可以具有適用于蛋白質純化目的，特別是適用于親和色譜法的特征。
16、具體地，該方法包括在反應器中將分散相組合物(a)與連續相組合物(b)混合，然后使混合物進行懸浮聚合反應。其中，“分散相組合物”意指在與連續相組合物混合之后可以形成分散相(或液滴)的組合物，以及“連續相組合物”意指在與分散相組合物混合之后可以形成連續相的組合物。
17、在本申請的一個實施方案中，分散相組合物包含含環氧基的可聚合單體(b1)、交聯劑(b2)和成孔劑(b3)。在本申請的一個實施方案中，除了含環氧基的可聚合單體(b1)、交聯劑(b2)和成孔劑(b3)之外，分散相組合物還可以包含引發劑(b4)。在另一個實施方案中，分散相組合物可以為上述組分的混合物。
18、通過分散相組合物的懸浮聚合，可以獲得包含源自可聚合單體(b1)和交聯劑(b2)的單元的懸浮聚合產物。更具體地，通過懸浮聚合可以獲得包含源自可聚合單體(b1)和交聯劑(b2)的單元、或者為可聚合單體(b1)(通過引發劑進行)與交聯劑(b2)之間的反應產物的懸浮聚合產物。懸浮聚合產物可以為顆粒或包括顆粒的顆粒組，并且各個單獨的顆粒可以具有下述顆粒特征。
19、在一個示例性實施方案中，可聚合單體(b1)可以為含有碳與環氧基團(或縮水甘油基)之間的不飽和鍵的單體。這樣的可聚合單體的類型沒有特別限制，但可以為例如具有環氧基的(甲基)丙烯酸酯單體，并且更具體地，可以提及(甲基)丙烯酸縮水甘油酯、(甲基)丙烯酸4,5-環氧丁酯或(甲基)丙烯酸9,10-環氧硬脂酯。然而，本申請的分散相組合物中包含的可聚合單體的類型并不由以上列出的單體指定。
20、分散相組合物還包含交聯劑(b2)。在本申請的一個實施方案中，可以使用可以參與交聯反應的含有至少兩個碳之間雙鍵(例如，乙烯基)的化合物作為交聯劑。
21、根據本申請的實施方案可以使用的交聯劑包括例如多官能(甲基)丙烯酸酯，如乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、三羥甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇三(甲基)丙烯酸酯、二季戊四醇六(甲基)丙烯酸酯、二季戊四醇六甲基丙烯酸酯或三甲基丙烷三甲基丙烯酸酯。或者，可以組合使用以上列出的交聯劑中的一者或更多者。
22、在一個示例性實施方案中，交聯劑化合物可以為不含親水性基團(例如羥基)的化合物。作為實驗證實的結果，如果交聯劑除了碳之間雙鍵之外還含有親水性基團，則交聯劑的反應速率可能降低，這可能導致難以形成足夠的顆粒孔的條件。
23、分散相組合物還包含成孔劑(b3)。成孔劑不參與聚合反應，但為在懸浮聚合反應期間可以在從分散相液滴中逸出的同時在聚合顆粒中形成孔的組分。
24、在本申請的一個實施方案中，成孔劑(b3)可以為與含環氧基的可聚合單體(b1)的hansen溶解度參數之差為1.30至4.70的成孔劑，或者可以包括這樣的成孔劑。具體地，含環氧基的可聚合單體(b1)與成孔劑之間的hansen溶解度參數之差可以為1.40或更大、1.50或更大、1.60或更大、1.70或更大、1.80或更大、1.90或更大、2.00或更大、2.10或更大、2.20或更大、2.30或更大、2.40或更大、2.50或更大、2.60或更大、2.70或更大、2.80或更大、2.90或更大、3.00或更大、3本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于制備多孔顆粒的方法，所述方法包括：
2.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
3.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
4.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
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8.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
9.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
10.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
11.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，
12.根據權利要求11所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
13.根據權利要求12所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
14.一種多孔顆粒，包含源自具有環氧基的可聚合單體和交聯劑的聚合單元，
15.根據權利要求14所述的
...【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種用于制備多孔顆粒的方法，所述方法包括：
2.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
3.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
4.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
5.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
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7.根據權利要求1所述的用于制備多孔顆粒的方法，其中：
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【專利技術屬性】
技術研發人員：金叡智，金玟采，吳承峻，金智善，金潤燮，
申請(專利權)人：株式會社LG化學，
類型：發明
國別省市：
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