【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥，具體的說是一種腎損傷生物標志物蛋白的應用及檢測方法。
技術(shù)介紹
1、近年來，全球慢性腎病危害性顯著增加。根據(jù)世衛(wèi)組織2020年12月發(fā)布的《2019年全球衛(wèi)生估計報告》，腎臟疾病已成為“全球十大死因”之一。據(jù)預測至2040年，全球慢性腎臟病所致壽命損失年數(shù)將上升至第5位。腎臟疾病發(fā)病率高，治療效果差，損傷前期不易被發(fā)現(xiàn)，且會對腎臟造成不可逆損傷，因此，防控的關(guān)鍵在于找到敏感生物標志物。
2、dkk3(dickkopf-3)是腎小管生成的分泌性蛋白，可特異性反映腎小管損傷情況，在不同類型的腎臟疾病中，尿dkk3蛋白水平均顯著升高，使得dkk3成為腎臟損傷的潛在生物標志物。研究發(fā)現(xiàn)慢性腎臟疾病患者尿液中dkk3蛋白水平顯著高于正常人群
3、現(xiàn)有技術(shù)中，β2-mg蛋白是反映腎小球濾過功能的靈敏指標，當各種原發(fā)性或繼發(fā)性腎小球病變累及腎小球濾過功能時，尿液中β2-mg蛋白指數(shù)會升高，在長時間使用觀察中，發(fā)現(xiàn)β2-mg蛋白作為腎小管損傷標志物，僅能反映腎小管重吸收功能的障礙，無法直接反映腎小管的損傷情況。
4、為此，本專利技術(shù)提供一種腎損傷生物標志物蛋白的應用及檢測方法。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，解決
技術(shù)介紹
中提出的至少一個問題，提出的一種腎損傷生物標志物蛋白的應用及檢測方法。
2、本專利技術(shù)解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：本專利技術(shù)所述的一種腎損傷生物標志物蛋白檢測方法，該檢測方法具體步驟如下：p>
3、s1：獲取受測尿液樣本，并進行離心獲取上清液；
4、s2：在elisa反應板中加入1μg/ml山羊抗兔抗體的pbs后對其進行密封孵育；拍干反應板；用含0.2％twain-20的pbs(pbst)洗滌，拍干反應板，重復2次，得到包被好的elisa板；
5、s3：將dkk3、β2-mg蛋白標準品分別用pbs溶解，分別稀釋后，對不同濃度蛋白標準液進行標準曲線的繪制；
6、s4：在包被好的elisa板孔中分別依次加入不同濃度蛋白標準液或檢測尿樣各50μl、hrp標記抗體100μl、tmb顯色液100μl和終止液50μl；
7、s5：于終止反應后15分鐘內(nèi)，將反應板置于酶標儀中，讀取od450值；
8、s6：繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算dkk3和β2-mg蛋白的濃度。
9、優(yōu)選的，該試劑具體配方為：山羊抗兔dkk3抗體的碳酸鹽緩沖液、山羊抗兔β2-mg抗體的碳酸鹽緩沖液、1％bsa封閉緩沖液、標準品、hrp標記二抗溶液、洗滌液、tmb顯色液、終止液。
10、優(yōu)選的，所述s1中具體操作步驟為：
11、s1-1：取尿液3ml；
12、s1-2：經(jīng)過3000rpm離心5分鐘；
13、s1-3：取上清為檢測尿液樣本。
14、優(yōu)選的，所述s2中密封孵育為在溫度4℃條件下密封孵育24h。
15、優(yōu)選的，所述s3中具體稀釋濃度為：
16、dkk3蛋白：3.125、6.25、12.5、25、50、100ng/ml；
17、β2-mg蛋白：2.5、5、10、20、40、80ng/ml。
18、本專利技術(shù)的有益效果如下：
19、本專利技術(shù)所述的一種腎損傷生物標志物蛋白的應用及檢測方法，尿dkk3蛋白是腎小管上皮細胞分泌的蛋白，可隨尿液排出體外，具有比現(xiàn)有經(jīng)典腎損傷生物標志物β2-mg蛋白更高的靈敏性和特異性，在腎小管損傷早期尿液中dkk3蛋白會顯著升高，且非侵入性方式易得到檢測者的接受，有利于腎小管損傷早篩理念的推廣。
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1.一種腎損傷生物標志物蛋白檢測方法，其特征在于：該檢測方法具體步驟如下：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腎損傷生物標志物蛋白ELISA檢測試劑，其特征在于：該試劑具體配方為：山羊抗兔DKK3抗體的碳酸鹽緩沖液、山羊抗兔β2-MG抗體的碳酸鹽緩沖液、1％BSA封閉緩沖液、標準品、HRP標記二抗溶液、洗滌液、TMB顯色液、終止液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腎損傷生物標志物蛋白檢測方法，其特征在于：所述S1中具體操作步驟為：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腎損傷生物標志物蛋白檢測方法，其特征在于：所述S2中密封孵育為在溫度4℃條件下密封孵育24h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腎損傷生物標志物蛋白檢測方法，其特征在于：所述S3中具體稀釋濃度為：
【技術(shù)特征摘要】
1.一種腎損傷生物標志物蛋白檢測方法，其特征在于：該檢測方法具體步驟如下：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腎損傷生物標志物蛋白elisa檢測試劑，其特征在于：該試劑具體配方為：山羊抗兔dkk3抗體的碳酸鹽緩沖液、山羊抗兔β2-mg抗體的碳酸鹽緩沖液、1％bsa封閉緩沖液、標準品、hrp標記二抗溶液、洗滌液、tmb顯色液、終止液。
...【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉莉莉，鄧耀棠，李國樑，歐嘉怡，冼思敏，周家圳，陳嘉斌，
申請(專利權(quán))人：廣東省職業(yè)病防治院廣東省職業(yè)衛(wèi)生檢測中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
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