【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
技術介紹
1、腫瘤治療電場(ttfield)是在中頻范圍(100khz至500khz)內的低強度(例如，1v/cm至3v/cm)交變電場，該低強度交變電場通過干擾有絲分裂來靶向實體腫瘤。該非侵入性治療靶向實體腫瘤并且描述于例如美國專利第7,016,725號、第7,089,054號、第7,333,852號、第7,565,205號、第8,244,345號、第8,715,203號、第8,764,675號、第10,188,851號以及第10,441,776號中。ttfield通常通過兩對換能器陣列來遞送，該兩對換能器陣列在所治療的腫瘤內產生垂直場；構成這些對中的每一對的換能器陣列定位在正進行治療的身體部分的相對側上。更具體地，對于系統，換能器陣列的一對電極位于腫瘤的左右(lr)，并且換能器陣列的另一對電極位于腫瘤的前后(ap)。ttfields被批準用于治療多形性膠質母細胞瘤(gbm)，并且可以例如通過系統(澤西島圣赫利爾的novocure有限公司(novocure?limited,st.helier,jersey))來遞送，該系統包括放置在受試者的光頭上的換能器陣列。
2、用于在裝置中輸送ttfields的每個換能器陣列包括一組陶瓷圓盤電極，這些電極通過一層導電醫用凝膠耦合到受試者的皮膚(例如但不限于用于治療gbm的受試者的剃頭)。醫用凝膠的目的是變形以匹配身體的輪廓，并在陣列和皮膚之間提供良好的電接觸；因此，凝膠界面橋接皮膚并減少干擾。該裝置旨在由受試者連續穿戴2至4天，然后移除，使受試者進行衛生護理和重新剃頭(如果需
3、已經表明ttfields延遲dna損傷修復機制，特別是負責修復雙鏈dna斷裂的機制；具體而言，但不限于，brca1和范可尼(fanconi)貧血蛋白已顯示在對其施加交變電場后基因和蛋白表達下調(giladi等人(2017)radiation?oncology,12(1):206；karanam等人(2017)cell?death?dis,8(3):e2711；mumblat等人(2021)international?journal?ofradiation?oncology,biology,physics,111(3):e463)。
4、成簇規律間隔短回文重復序列crispr相關核酸酶蛋白(稱為crispr-cas9)是一種來自原核生物的基因編輯系統，是其適應性免疫的關鍵組成部分。crispr-cas9系統的這種基因編輯機制已經適應并用于哺乳動物細胞中，以沉默或促進dna中精確序列的基因表達。crispr-cas9的工作機制是通過識別具有針對關注的特定序列的單向導rna的dna元件，然后由cas9酶切割雙鏈dna缺口(zhang等人(2021)mol.cancer,20：126；afolabi等人(2019)immunology,158(2):63-69)。在這一點上，在crispr-cas9系統的當前使用中采用了dna修復機制(richardson等人(2018)nature?genetics,50(8):1132-1139)。
5、然而，本領域需要新的和改進的系統和方法來治療或減少癌癥以及其它病癥和疾病的發生。本專利技術正是針對此類新的和改進的系統和方法。
技術實現思路
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1.一種試劑盒，其包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述CRISPR相關核酸內切酶選自Cas3、Cas9、Cas12、Cas12a、Cas12b、Cas12e、Cas12f、Cas13a、Cas13b、mini-Cas9和Cas9切口酶(nCas9)。
3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其中以下至少一項：
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述靶DNA序列是腫瘤抑制基因中的功能缺失突變，并且其中所述腫瘤抑制基因選自p53、視網膜母細胞瘤(Rb)、10號染色體上缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)、Ras關聯結構域家族(RASSF)、ADP-核糖基化因子(ARF)、腺瘤性結腸息肉病(APC)、共濟失調毛細血管擴張突變(ATM)、檢查點激酶2(CHK2)、乳腺癌1蛋白(BRCA1)、乳腺癌2蛋白(BRCA2)、BRCA2的伴侶和定位子(PALB2)、結節性硬化癥復合物1(TSC1)、結節性硬化癥復合物2(TSC2)、神經纖維瘤病1型(NF1)、肝激酶B1(LKB1)、E2F1、KLF5、叉頭盒03a類(FOXO3a)、p38和希佩爾
5.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述靶DNA序列是功能基因突變的腫瘤學獲得，其中所述基因選自Ras(H-Ras、K-Ras和N-Ras)、促分裂原活化蛋白激酶(MEK)、細胞外信號調節激酶(ERK)、c-Jun?NH2-末端激酶(JNK)、人表皮生長因子受體2(HER2)、表皮生長因子受體(EGFR)、c-Myc、富馬酰基乙酰乙酸水解酶(FAH)、TAT、4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(HPD)、fms相關酪氨酸激酶3(FLT3)、c-KIT、BRAF、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶(PIK3CA)、端粒酶逆轉錄酶(TERT)、ETS變異轉錄因子1(ETV1)、β-連環蛋白(CTNNB1)、E2F1和T細胞急性淋巴細胞白血病1(TAL1)。
6.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述靶DNA序列是來自細菌或病毒的序列，所述細菌或病毒選自人乳頭瘤病毒(HPV)、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(分別為HBV病毒和HCV病毒)、愛潑斯坦-巴爾病毒(EBV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、新型冠狀病毒、單純皰疹病毒(HSV)、人皰疹病毒8(HHV-8)、人嗜T淋巴細胞病毒-1(HTLV-1)、梅克爾細胞多瘤病毒(MCPyV)、巨細胞病毒(CMV)、幽門螺桿菌、沙眼衣原體、傷寒沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、牛鏈球菌和支原體。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的試劑盒，其中所述CRISPR-Cas系統呈由sgRNA和核酸內切酶肽或蛋白質形成的核糖核蛋白(RNP)復合物的形式。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的試劑盒，其中所述CRISPR-Cas系統的至少一種組分位于至少一個DNA質粒中。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的試劑盒，其中所述CRISPR-Cas系統的至少一種組分位于至少一個基于DNA或RNA的病毒載體中。
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其中所述病毒載體選自腺病毒、腺相關病毒、慢病毒、逆轉錄病毒、痘苗病毒和/或單純皰疹病毒載體或人工病毒。
11.根據權利要求1至10中任一項所述的試劑盒，其中所述CRISPR-Cas系統的至少一種組分位于以下中的至少一種中：脂質體、脂質納米顆粒、免疫脂質體、脂質復合物、聚復合物、泊洛沙姆、聚陽離子、病毒體、金納米顆粒、其它無機納米顆粒及其組合。
12.根據權利要求1至11中任一項所述的試劑盒，其中所述CRISPR-Cas系統的至少一種組分以裸的形式提供以用于直接物理遞送。
13.根據權利要求1至12中任一項所述的試劑盒，其中所述sgRNA和CRISPR相關核酸內切酶或編碼其的基因位于不同的遞送載體中。
14.根據權利要求1至13中任一項所述的試劑盒，其中所述sgRNA和編碼CRISPR相關核酸內切酶的基因中的至少一者經修飾以包括細胞穿透肽序列。
15.根據權利要求1至14中任一項所述的試劑盒，其中所述sgRNA和CRISPR相關核酸內切酶或編碼其的基因中的至少一者經配制以用于通過選自以下的途徑施用：注射、輸注、局部施用、植入、電穿孔、脂質轉染、顯微注射、微流體、生物射彈、粒子槍加速及其組合。
16.根據權利要求1至15中任一項所述的試劑盒，其中所述交變電場被配置為以約100kHz至約10MHz范圍內的頻率施加。
17.根據權利要求1至16中任一項所述的試劑盒，其中所述交變電場被配置為以至少1V/cm的場強施加。
<...【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種試劑盒，其包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述crispr相關核酸內切酶選自cas3、cas9、cas12、cas12a、cas12b、cas12e、cas12f、cas13a、cas13b、mini-cas9和cas9切口酶(ncas9)。
3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其中以下至少一項：
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述靶dna序列是腫瘤抑制基因中的功能缺失突變，并且其中所述腫瘤抑制基因選自p53、視網膜母細胞瘤(rb)、10號染色體上缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物(pten)、ras關聯結構域家族(rassf)、adp-核糖基化因子(arf)、腺瘤性結腸息肉病(apc)、共濟失調毛細血管擴張突變(atm)、檢查點激酶2(chk2)、乳腺癌1蛋白(brca1)、乳腺癌2蛋白(brca2)、brca2的伴侶和定位子(palb2)、結節性硬化癥復合物1(tsc1)、結節性硬化癥復合物2(tsc2)、神經纖維瘤病1型(nf1)、肝激酶b1(lkb1)、e2f1、klf5、叉頭盒03a類(foxo3a)、p38和希佩爾-林道病(vhl)。
5.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述靶dna序列是功能基因突變的腫瘤學獲得，其中所述基因選自ras(h-ras、k-ras和n-ras)、促分裂原活化蛋白激酶(mek)、細胞外信號調節激酶(erk)、c-jun?nh2-末端激酶(jnk)、人表皮生長因子受體2(her2)、表皮生長因子受體(egfr)、c-myc、富馬酰基乙酰乙酸水解酶(fah)、tat、4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(hpd)、fms相關酪氨酸激酶3(flt3)、c-kit、braf、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶(pik3ca)、端粒酶逆轉錄酶(tert)、ets變異轉錄因子1(etv1)、β-連環蛋白(ctnnb1)、e2f1和t細胞急性淋巴細胞白血病1(tal1)。
6.根據權利要求3所述的試劑盒，其中所述靶dna序列是來自細菌或病毒的序列，所述細菌或病毒選自人乳頭瘤病毒(hpv)、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(分別為hbv病毒和hcv病毒)、愛潑斯坦-巴爾病毒(ebv)、人免疫缺陷病毒(hiv)、新型冠狀病毒、單純皰疹病毒(hsv)、人皰疹病毒8(hhv-8)、人嗜t淋巴細胞病毒-1(htlv-1)、梅克爾細胞多瘤病毒(mcpyv)、巨細胞病毒(cmv)、幽門螺桿菌、沙眼衣原體、傷寒沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、牛鏈球菌和支原體。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的試劑盒，其中所述crispr-cas系統呈由sgrna和核酸內切酶肽或蛋白質形成的核糖核蛋白(rnp)復合物的形式。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的試劑盒，其中所述crispr-cas系統的至少一種組分位于至少一個dna質粒中。
9.根據權利要求1至8中任一項所述的試劑盒，其中所述crispr-cas系統的至少一種組分位于至少一個基于dna或rna的病毒載體中。
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其中所述病毒載體選自腺病毒、腺相關病毒、慢病毒、逆轉錄病毒、痘苗病毒和/或單純皰疹病毒載體或人工病毒。
11.根據權利要求1至10中任一項所述的試劑盒，其中所述crispr-cas系統的至少一種組分位于以下中的至少一種中：脂質體、脂質納米顆粒、免疫脂質體、脂質復合物、聚復合物、泊洛沙姆、聚陽離子、病毒體、金納米顆粒、其它無機納米顆粒及其組合。
12.根據權利要求1至11中任一項所述的試劑盒，其中所述crispr-cas系統的至少一種組分以裸的形式提供以用于直接物理遞送。
13.根據權利要求1至12中任一項所述的試劑盒，其中所述sgrna和crispr相關核酸內切酶或編碼其的基因位于不同的遞送載體中。
14.根據權利要求1至13中任一項所述的試劑盒，其中所述sgrna和編碼crispr相關核酸內切酶的基因中的至少一者經修飾以包括細胞穿透肽序列。
15.根據權利要求1至14中任一項所述的試劑盒，其中所述sgrna和crispr相關核酸內切酶或編碼其的基因中的至少一者經配制以用于通過選自以下的途徑施用：注射、輸注、局部施用、植入、電穿孔、脂質轉染、顯微注射、微流體、生物射彈、粒子槍加速及其組合。
16.根據權利要求1至15中任一項所述的試劑盒，其中所述交變電場被配置為以約100khz至約10mhz范圍內的頻率施加。
17.根據權利要求1至16中任一項所述的試劑盒，其中所述交變電場被配置為以至少1v/cm的場強施加。
18.根據權利要求1至17中任一項所述的試劑盒，還包括至少一種裝置和/或至少一種試劑，用于檢查樣品以鑒定所述樣品中的所述靶dna序列。
19.用于權利要求21至60中任一項所述的方法的成簇規律間隔短回文重復序列(crispr)相關蛋白(crispr-cas)系統，所述crispr-cas系統包括：
20.成簇規律間隔短回文重復序列(crispr)相關蛋白(crispr-cas)系統在根據權利要求21至60中任一項所述的方法中的用途，所述crispr-cas系統包括：
21.一種在至少一種細胞中誘導細胞凋亡的方法，所述方法包括以下步驟：
22.根據權利要求21所述的方法，其中所述crispr相關核酸內切酶選自cas3、cas9、cas12、cas12a、cas12b、cas12e、cas12f、cas13a、cas13b、mini-cas9和cas9切口酶(ncas9)。
23.根據權利要求21或22所述的方法，其中所述靶dna序列選自癌基因中功能基因突變的腫瘤學獲得、腫瘤抑制基因中的功能缺失突變、感染性微生物的基因和產生自身抗體的免疫細胞中的自身抗原序列。
24.根據權利要求23所述的方法，其中所述靶dna序列針對選自以下的基因中的突變：p53、視網膜母細胞瘤(rb)、10號染色體上缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物(pten)、ras關聯結構域家族(rassf)、adp-核糖基化因子(arf)、腺瘤性結腸息肉病(apc)、共濟失調毛細血管擴張突變(atm)、檢查點激酶2(chk2)、乳腺癌1蛋白(brca1)、乳腺癌2蛋白(brca2)、brca2的伴侶和定位子(palb2)、結節性硬化癥復合物1(tsc1)、結節性硬化癥復合物2(tsc2)、神經纖維瘤病1型(nf1)、肝激酶b1(lkb1)、e2f1、klf5、叉頭盒03a類(foxo3a)、ras(h-ras、k-ras和n-ras)、絲裂原活化蛋白激酶激酶(mek)、細胞外信號調節激酶(erk)、c-jun?nh2-末端激酶(jnk)、p38、人表皮生長因子受體2(her2)、表皮生長因子受體(egfr)、c-myc、希佩爾-林道病(vhl)、富馬酰基乙酰乙酸水解酶(fah)、tat、4-羥基苯丙酮酸雙加氧酶(hpd)、fms相關酪氨酸激酶3(flt3)、c-kit、braf、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶(pik3ca)、端粒酶逆轉錄酶(tert)、ets變異轉錄因子1(etv1)、β-連環蛋白(ctnnb1)、e2f1和t細胞急性淋巴細胞白血病1(tal1)。
25.根據權利要求23所述的方法，其中所述靶dna序列是來自微生物的基因，所述微生物選自人乳頭瘤病毒(hpv)、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(分別為hbv病毒和hcv病毒)、愛潑斯坦-巴爾病毒(ebv)、人免疫缺陷病毒(hiv)、新型冠狀病毒、單純皰疹病毒(hsv)、人皰疹病毒8(hhv-8)、人嗜t淋巴細胞病毒-1(htlv-1)、梅克爾細胞多瘤病毒(mcpyv)、巨細胞病毒(cmv)、幽門螺桿菌、沙眼衣原體、傷寒沙門氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、牛鏈球菌和支原體。
26.根據權利要求21至25中任一項所述的方法，其中所述crispr-cas系...
【專利技術屬性】
技術研發人員：T·坎，T·沃洛申瑟拉，L·阿維多，
申請(專利權)人：諾沃庫勒有限責任公司，
類型：發明
國別省市：
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