本發(fā)明專利技術(shù)涉及檢測技術(shù)領(lǐng)域，提出了一種同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，包括：先用溶劑輔助蒸發(fā)萃取去除保健酒中糖、色素等不揮發(fā)性組分，再用極性與非極性混合萃取劑對萜烯類目標(biāo)物進(jìn)行液液微萃取，經(jīng)氮吹濃縮后用氣質(zhì)聯(lián)用儀搭配極性和非極性色譜柱對樣品進(jìn)行測定。該方法減少了無關(guān)基質(zhì)的干擾，不僅降低了對色譜柱和檢測器的污染，還提高了混合萃取劑對目標(biāo)化合物的提取效率，僅用少量的有機(jī)溶劑即可對酒樣中揮發(fā)性成分進(jìn)行有效提取，大幅降低有機(jī)溶劑的使用量，降低成本以及減少對環(huán)境的污染，提高了目標(biāo)化合物的響應(yīng)值，擴(kuò)大了檢測范圍，具備干擾少、檢出限低、響應(yīng)值高、檢測范圍廣與準(zhǔn)確度高的優(yōu)勢，檢出限為0.1387μg/L～1.9695μg/L。
1、萜烯類化合物是保健酒中一類非常重要的功能性微量成分，普遍來源于中草藥，是一類由異戊二烯(c5h8)為分子骨架的天然化合物及其含氧衍生物，依據(jù)碳鏈長度可分為單萜(c10h16)、倍半萜(c15h24)及二萜(c20h32)等，具有多種生理活性及藥用價值，如抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、鎮(zhèn)痛、助消化、抗癌、抗腫瘤等，對人類健康至關(guān)重要。具體而言，諸如藏花醛，以其保護(hù)心血管、抗炎、抗氧化及抗腫瘤的多重功效而著稱；d-檸檬烯則展現(xiàn)出利膽溶石、抑菌、抗炎、抗腫瘤及抗氧化等特性；γ-松油烯和β-欖香烯分別以其抗氧化、抑菌與抗腫瘤，以及抗腫瘤的能力受到關(guān)注；β-石竹烯則集抗炎、抗癌、抗菌、抗氧化及鎮(zhèn)痛等功效于一身；而二氫-β-紫羅蘭酮則在降血脂與抗癌抗腫瘤方面展現(xiàn)出獨(dú)特優(yōu)勢。此外，在保健酒中，萜烯不僅扮演著緩解酒精副作用、調(diào)節(jié)生理平衡、預(yù)防疾病及促進(jìn)恢復(fù)的角色，還以其獨(dú)特的芳香與感官特性，為酒體增添了藥香、辛香、花香乃至甜味的復(fù)雜層次，賦予保健酒別具一格的口感體驗(yàn)與健康內(nèi)涵，使之成為集美味與健康于一體的佳品。
2、保健酒因添加了多味藥材，成分相較于白酒更為復(fù)雜，存在糖、氨基酸、色素等多種不揮發(fā)性組分，要想準(zhǔn)確定量分析痕量萜烯類化合物十分困難，目前檢測酒中萜烯類化合物的方法多為頂空固相微萃取，但該方法在萃取過程中存在競爭吸附，多用于定性及半定量研究，無法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。本研究旨在建立一種能夠準(zhǔn)確檢測保健酒中痕量萜烯類化合物的方法。
/>技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本專利技術(shù)提出了一種同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，包括：采用溶劑輔助蒸發(fā)萃取進(jìn)行除雜，液液微萃取聯(lián)合氮吹進(jìn)行提取濃縮，氣質(zhì)聯(lián)用儀采用極性與非極性色譜柱搭配使用進(jìn)行檢測，內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量，計算萜烯類化合物的含量。
2、本專利技術(shù)的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的，本專利技術(shù)提供一種同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，檢測方法具體包括如下步驟：
3、酒樣除雜：取20ml待測酒樣(50％vol)加入20μl內(nèi)標(biāo)振蕩搖勻，再通過溶劑輔助蒸發(fā)萃取(safe)裝置在高真空狀態(tài)下除去不揮發(fā)性組分，收集蒸餾分離出的揮發(fā)性組分；
4、提取濃縮：將收集的揮發(fā)性組分(20ml)置于50ml離心管中，加入10ml超純水，使水與乙醇按2:1的體積比進(jìn)行混合，加入7.2gnacl(氯化鈉與水的質(zhì)量體積比為0.36：1，即1ml水中加入0.36g氯化鈉)至溶液飽和，再加入10ml萃取劑，使水、乙醇與萃取劑按2:1:1的體積比進(jìn)行混合，振蕩5min，超聲10min，8000rpm離心5min，于4℃冷藏靜置過夜，取有機(jī)相經(jīng)無水na2so4脫水，并于20℃經(jīng)氮吹濃縮至1ml，所得濃縮液用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢測；
5、內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量：以待測酒樣同等酒精度的乙醇水溶液(50％vol)配制萜烯類化合物系列梯度標(biāo)準(zhǔn)混合液，取系列梯度標(biāo)準(zhǔn)混合液各4ml置于50ml離心管中，加入20μl內(nèi)標(biāo)使用液，加入2ml超純水，使水與乙醇按2:1的體積比進(jìn)行混合，加入1.5gnacl至溶液飽和，再加入2ml萃取劑，使水、乙醇與萃取劑按2:1:1的體積比進(jìn)行混合，振蕩5min，超聲10min，8000rpm離心5min，于4℃冷藏靜置過夜，取有機(jī)相經(jīng)無水na2so4脫水后用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢測；以萜烯類化合物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱坐標(biāo)，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中萜烯類化合物含量與內(nèi)標(biāo)物含量比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6、本專利技術(shù)提供了一種針對酒樣的前處理方法，包括如下步驟：取20ml待測酒樣(50％vol)加入20μl內(nèi)標(biāo)振蕩搖勻，再通過溶劑輔助蒸發(fā)萃取(safe)裝置在高真空狀態(tài)下除去不揮發(fā)性組分，收集蒸餾分離出的揮發(fā)性組分，置于50ml離心管中，加入10ml超純水，使水與乙醇按2:1的體積比進(jìn)行混合，加入7.2gnacl(氯化鈉與水的質(zhì)量體積比為0.36：1，即1ml水中加入0.36g氯化鈉)至溶液飽和，再加入10ml萃取劑，使水、乙醇與萃取劑按2:1:1的體積比進(jìn)行混合，振蕩5min，超聲10min，8000rpm離心5min，于4℃冷藏靜置過夜，取有機(jī)相經(jīng)無水na2so4脫水，并于20℃經(jīng)氮吹濃縮至1ml，所得濃縮液用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢測。
7、在一些實(shí)施方式中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法如下：以待測酒樣同等酒精度的乙醇水溶液(50％vol)配制萜烯類化合物系列梯度標(biāo)準(zhǔn)混合液，取系列梯度標(biāo)準(zhǔn)混合液各4ml置于50ml離心管中，加入20μl內(nèi)標(biāo)使用液，加入2ml超純水，使水與乙醇按2:1的體積比進(jìn)行混合，加入1.5gnacl至溶液飽和，再加入2ml萃取劑，使水、乙醇與萃取劑按2:1:1的體積比進(jìn)行混合，振蕩5min，超聲10min，8000rpm離心5min，于4℃冷藏靜置過夜，取有機(jī)相經(jīng)無水na2so4脫水后用氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢測；以萜烯類化合物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值為縱坐標(biāo)，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中萜烯類化合物含量與內(nèi)標(biāo)物含量比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
8、本專利技術(shù)采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量在一定程度上可以消除樣品前處理過程中因操作條件變化所引起的誤差，并可以有效抵消樣品基質(zhì)差異造成的提取效果差異，使定量結(jié)果更穩(wěn)定、可靠。
9、本專利技術(shù)針對保健酒中的萜烯類化合物，采用氣質(zhì)聯(lián)用儀搭配極性和非極性色譜柱進(jìn)行分析檢測，擴(kuò)大了萜烯類化合物的檢測范圍。
10、本專利技術(shù)通過在樣品前處理過程中引入溶劑輔助蒸發(fā)萃取，顯著消除了保健酒中諸如糖分、色素等非揮發(fā)性雜質(zhì)的干擾，可以提升萜烯類化合物檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。同時，該技術(shù)還有效預(yù)防了色譜柱及精密檢測設(shè)備的污染問題，從而延長了這些關(guān)鍵部件的使用壽命。
11、本專利技術(shù)在樣品前處理過程中采用液液微萃取技術(shù)，相比于液液萃取顯著減少了有機(jī)溶劑的消耗量，僅需微量有機(jī)溶劑便能高效提取酒樣中的揮發(fā)性成分，從而有效降低了檢測成本，并顯著減輕了對環(huán)境的潛在污染。隨后，通過氮吹技術(shù)進(jìn)一步處理，實(shí)現(xiàn)了酒樣中萜烯類化合物的高效濃縮，此舉增強(qiáng)了目標(biāo)分析物的信號響應(yīng)值，在一定程度上能夠提升檢測準(zhǔn)確性。
12、本專利技術(shù)采用正戊烷與無水乙醚(正戊烷：無水乙醚＝1：1)混合萃取劑，能夠有效地從酒樣中提取出萜烯類揮發(fā)性成分，提取效果好，為后續(xù)的檢測分析奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
13、本專利技術(shù)可以檢測保健酒中的一種或同時檢測多種萜烯類化合物。在檢測上述11種萜烯類化合物中的一種或多種時，檢測重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、結(jié)果可靠。
14、本專利技術(shù)相對于現(xiàn)有技術(shù)具有以下有益效果：
15、本專利技術(shù)先采用溶劑輔助蒸發(fā)萃取去除保健酒中糖、色素等不揮發(fā)性組分，再采用極性與非極性混合萃取劑對萜烯類化合物進(jìn)行液液微萃取，減少了無關(guān)基質(zhì)的干擾，不僅降低了對色譜柱和檢測器的污染，還提高了萃取劑對目標(biāo)化合物的提取效率；采用液液微萃取技術(shù)，僅使用少量的有機(jī)溶劑即可對酒樣中揮發(fā)性成分進(jìn)行有效提取，大幅本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其包括，其特征在于，包括如下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟一中待測目標(biāo)萜烯類化合物包括d-檸檬烯、γ-松油烯、對傘花烴、β-欖香烯、β-石竹烯、藏花醛、α-石竹烯、α-萜品醇、Δ-杜松烯、二氫-β-紫羅蘭酮和肉桂醛。
3.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟二中內(nèi)標(biāo)使用液濃度為500mg/L。
4.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟四中溶劑輔助蒸發(fā)萃取裝置的恒溫水浴和恒溫水箱溫度均為50℃，兩個冷阱中加入液氮，當(dāng)真空度小于1×10-3Pa時，緩慢打開滴液漏斗塞，控制樣品流速為1mL/min，收集揮發(fā)性組分，該方法是在高真空狀態(tài)下除去保健酒中糖、色素等不揮發(fā)性組分，減少無關(guān)基質(zhì)干擾，蒸餾分離得到揮發(fā)性組分。
5.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟六中萃取劑為乙酸乙酯、無水乙醚、二氯甲烷、正己烷、正戊烷中的一種或兩種混合物。
6.如權(quán)利要求5所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，步驟六中萃取劑由無水乙醚:正戊烷＝1:1混合而成。
7.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟七中氣質(zhì)聯(lián)用儀色譜條件為：采用硝基對苯二甲酸改性的聚乙二醇毛細(xì)管色譜柱(DB-FFAP：60m×0.25mm×0.25μm)，進(jìn)樣口溫度為250℃，載氣為高純氦氣(純度≥99.999％)，不分流恒流模式進(jìn)樣，流速1mL/min，進(jìn)樣量為1μL，升溫程序：起始溫度40℃，保持5min，以3℃/min速率升溫至240℃，保持5min；采用(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷毛細(xì)管色譜柱(HP-5MS：30m×0.25mm×0.2μm)，進(jìn)樣口溫度為250℃，載氣為高純氦氣(純度≥99.999％)，不分流恒流模式進(jìn)樣，流速1mL/min，進(jìn)樣量為1μL，升溫程序：初溫40℃，以3.5℃/min升至200℃，保持1min，再以25℃/min升至300℃，保持1min；質(zhì)譜條件為電離方式為電子轟擊源(EI)，能量70eV；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；輔助通道加熱溫度280℃；質(zhì)譜掃描質(zhì)量范圍35-350amu，質(zhì)譜分析采用NIST20譜庫。
8.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟九中萜烯類化合物的計算公式為：
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【技術(shù)特征摘要】
1.一種同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其包括，其特征在于，包括如下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟一中待測目標(biāo)萜烯類化合物包括d-檸檬烯、γ-松油烯、對傘花烴、β-欖香烯、β-石竹烯、藏花醛、α-石竹烯、α-萜品醇、δ-杜松烯、二氫-β-紫羅蘭酮和肉桂醛。
3.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟二中內(nèi)標(biāo)使用液濃度為500mg/l。
4.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟四中溶劑輔助蒸發(fā)萃取裝置的恒溫水浴和恒溫水箱溫度均為50℃，兩個冷阱中加入液氮，當(dāng)真空度小于1×10-3pa時，緩慢打開滴液漏斗塞，控制樣品流速為1ml/min，收集揮發(fā)性組分，該方法是在高真空狀態(tài)下除去保健酒中糖、色素等不揮發(fā)性組分，減少無關(guān)基質(zhì)干擾，蒸餾分離得到揮發(fā)性組分。
5.如權(quán)利要求1所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在于，所述步驟六中萃取劑為乙酸乙酯、無水乙醚、二氯甲烷、正己烷、正戊烷中的一種或兩種混合物。
6.如權(quán)利要求5所述的同時檢測保健酒中11種萜烯類化合物的檢測方法，其特征在...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：江莎，杜佳煒，倪興婷，劉家歡，寧珍珍，李強(qiáng)，楊強(qiáng)，
申請(專利權(quán))人：勁牌有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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