【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，特別是涉及一種circrna環化質粒及其構建方法、試劑盒及應用。
技術介紹
1、circular?rna(circrna)是一種新型的環狀非編碼rna，由pre-mrna反向剪接產生。由于circrna特殊的環狀結構，對核酸外切酶的降解具有天然抵抗力，其穩定性遠高于相應的linear?mrna。研究表明，細胞質中累積的circrna可以通過mirnas的“海綿”作用，抑制mirna和靶基因之間的結合，調控多種疾病的發生發展過程。此外，circrna還可以通過和rna/蛋白質結合，參與維持rna穩定性、轉錄后修飾、蛋白定位等多種生物學過程，具有重要的生物學意義和研究價值。本專利技術擬開發一種circrna環化質粒，從而在宿主細胞中實現circrna環化和特異性表達。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種circrna環化質粒及其構建方法、試劑盒及應用，以解決上述現有技術存在的問題。采用該circrna環化質粒，可以實現circrna的環化和特異性表達，且對應linear?rna的表達水平不受影響。
2、不同于linear?rna的常規線性剪接模式，circrna通過外顯子或內含子反向剪接形成，形成方式包括外顯子環化和內含子環化。研究發現，果蠅laccase2基因能在果蠅體內外產生大量circrna。laccase2內含子的重復序列具有很強的互補性，通過堿基配對形成環化，這一過程受多個hnrnp和sr家族蛋白的調控。同時，laccase2內含子中
3、基于此，本專利技術提供了如下方案：
4、本專利技術提供一種circrna環化質粒的構建方法，包括將依次連接的laccasef片段和laccaser片段插入動物細胞表達載體中，構建得到所述circrna環化質粒的步驟；
5、所述laccasef片段的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；
6、所述laccaser片段的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。
7、進一步地，所述動物細胞表達載體為puas-attb載體。
8、本專利技術還提供一種根據上述的構建方法構建得到的circrna環化質粒。
9、本專利技術還提供上述的circrna環化質粒在制備circrna環化試劑盒中的應用。
10、本專利技術還提供一種circrna環化試劑盒，包括上述的circrna環化質粒。
11、本專利技術還提供上述的circrna環化質粒或circrna環化試劑盒在實現rna的環化表達中的應用。
12、進一步地，通過將重組質粒轉染至動物細胞中來實現rna的環化表達；
13、所述重組質粒是將目標rna的cdna插入上述的circrna環化質粒的laccasef片段和laccaser片段之間而構建得到。
14、本專利技術還提供一種環化表達rna的方法，包括以下步驟：
15、將目標rna的cdna插入上述circrna環化質粒的laccasef片段和laccaser片段之間，構建得到重組質粒；
16、將所述重組質粒轉染至動物細胞中，培養表達得到circrna。
17、進一步地，所述動物細胞為果蠅s2細胞。
18、本專利技術公開了以下技術效果：
19、本專利技術利用laccase2基因的環化作用，構建了一種circrna環化質粒，通過uas-gal4系統，可以實現circrna的環化和特異性表達，且對應linear?rna的表達水平不受影響。本專利技術有助于對特定circrna的功能和調控機制進行深入研究。
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1.一種circRNA環化質粒的構建方法，其特征在于，包括將依次連接的LaccaseF片段和LaccaseR片段插入動物細胞表達載體中，構建得到所述circRNA環化質粒的步驟；
2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述動物細胞表達載體為pUAS-attB載體。
3.一種根據權利要求1或2所述的構建方法構建得到的circRNA環化質粒。
4.一種如權利要求3所述的circRNA環化質粒在制備circRNA環化試劑盒中的應用。
5.一種circRNA環化試劑盒，其特征在于，包括權利要求3所述的circRNA環化質粒。
6.一種如權利要求3所述的circRNA環化質粒或權利要求5所述的circRNA環化試劑盒在實現RNA的環化表達中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，通過將重組質粒轉染至動物細胞中來實現RNA的環化表達；
8.一種環化表達RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述動物細胞為果蠅S2細胞。
【技術特征摘要】
1.一種circrna環化質粒的構建方法，其特征在于，包括將依次連接的laccasef片段和laccaser片段插入動物細胞表達載體中，構建得到所述circrna環化質粒的步驟；
2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述動物細胞表達載體為puas-attb載體。
3.一種根據權利要求1或2所述的構建方法構建得到的circrna環化質粒。
4.一種如權利要求3所述的circrna環化質粒在制備circrna環化試劑盒中的應用。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：祁玉娟，于駿，黃秋汝，孔芬，張國慶，陳霞，鄭波，曹義娟，嚴曉南，顧娟，胡方方，孫擎擎，劉小燕，蔣楠，厲振北，鄭森，李嘉欣，吉莉，
申請(專利權)人：徐州市中心醫院，
類型：發明
國別省市：
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