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    一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體及其制備方法和應用技術

    技術編號:44232191 閱讀:8 留言:0更新日期:2025-02-11 13:35
    本發明專利技術提供了一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體及其制備方法和應用。嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的氨基酸序列選自如下任一項:(a)如SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列;(b)在SEQ?ID?NO:1的一端或兩端添加標簽序列形成的氨基酸序列。該嘔吐毒素抗獨特型納米抗體可以作為嘔吐毒素的替代品,應用于嘔吐毒素的免疫分析檢測,其靈敏度高、特異性好,可通過基因工程重組表達的方式進行大量生產,制備簡單。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及分子生物學,具體涉及一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體及其制備方法和應用


    技術介紹

    1、脫氧雪腐鐮孢烯醇(deoxynivalenol,don),又名嘔吐毒素,屬于b型單端孢霉烯族毒素,主要由禾谷鐮孢復合群(fusarium?graminearum?species?complex)產生,是引起小麥赤霉病和玉米穗腐病的重要病原菌。don對動物以及人類都有毒性,包括急慢性毒性、細胞毒性、皮膚毒性、免疫毒性等;有明顯的胚胎毒性和致畸作用,被iarc列為ⅲ類致癌物。我國明確規定小麥、大麥、玉米及其制品中don含量不得高于1000μg/kg。

    2、don檢測方法主要有理化分析方法和免疫分析方法,理化分析方法主要包括薄層色譜法(tlc),氣相色譜法(gc),高效液相色譜法(hplc),近紅外光譜分析(nir),以上理化分析方法均需要依賴昂貴的大型精密儀器,專業熟練的實驗人員,以及復雜的樣本前處理,這些限制了該方法的廣泛應用。免疫分析方法包括酶聯免疫吸附檢測法(elisa)、熒光極性免疫分析法、(熒光)免疫層析技術等,其基于抗原抗體的特異性結合,具有靈敏、快速、特異、簡單等優點,近年來已經廣泛應用到嘔吐毒素的檢測中。但是在有些免疫檢測分析中,需要使用嘔吐毒素作為包被抗原或競爭抗原,有些需要使用嘔吐毒素作為校準劑和標準品進行校準以及制作標準曲線,而毒性較大的嘔吐毒素對操作者和環境具有潛在威脅。因此,高質量的無毒替代品代替嘔吐毒素是解決此問題的一種方法,也為開發一種檢測嘔吐毒素(don)的綠色方法提供核心試劑原料。

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    技術實現思路

    1、為解決
    技術介紹
    中存在的問題,本專利技術提供了一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體及其制備方法和應用,該嘔吐毒素抗獨特型納米抗體可以替代嘔吐毒素作為競爭抗原、包被抗原、校準劑或標準品等應用于嘔吐毒素的免疫檢測中,且靈敏度和特異性高。

    2、本專利技術解決上述技術問題的技術方案如下:

    3、第一方面,本專利技術提供了一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體,其氨基酸序列選自以下任一項:

    4、(a)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列;

    5、(b)在seq?id?no:1的一端或兩端添加標簽序列、酶切位點序列或信號序列形成的氨基酸序列。

    6、第二方面,本專利技術提供了編碼上述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的核酸分子。

    7、第三方面,本專利技術提供了一種表達載體,包含上述核酸分子。

    8、第四方面,本專利技術提供了一種轉化或轉染上述表達載體的宿主菌。

    9、第五方面,本專利技術提供了一種用于嘔吐毒素檢測的試劑盒,包括上述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體。

    10、第六方面,本專利技術提供了上述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的制備方法,利用上述宿主菌株生產所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體,或利用噬菌體擴增得到展示有所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的噬菌體粒子。

    11、第七方面,本專利技術提供了上述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體在嘔吐毒素的免疫分析檢測中的應用。

    12、按上述方案,所述免疫分析檢測包括酶聯免疫吸附檢測法、熒光極性免疫分析法、膠體金免疫層析法、時間分辨熒光免疫層析法、電化學免疫傳感法、生物免疫傳感法、納米酶免疫分析法、納米免疫傳感法免疫斑點雜交法和膠乳免疫比濁法。

    13、按上述方案,所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體作為嘔吐毒素的替代品,以競爭抗原、包被抗原、校準劑、質控品或標準品的形式在免疫分析檢測中進行應用。

    14、本專利技術的有益效果是:

    15、1)本專利技術通過噬菌體展示技術,構建羊駝源噬菌體展示納米抗體文庫,通過優化的親和淘選條件,篩選可特異性結合嘔吐毒素單克隆抗體的抗獨特型納米抗體,得到的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體特異性良好,靈敏度高,可以替代嘔吐毒素作為競爭抗原、包被抗原、校準劑、質控品或標準品應用于嘔吐毒素的免疫分析檢測領域,該方法避免使用有毒的純毒素,綠色、無毒、無污染,對操作者和環境友好;

    16、2)將含有嘔吐毒素抗獨特型納米抗體編碼基因的表達載體轉化或轉染至宿主菌,經誘導表達、分離、純化、鑒定,能獲得性能良好的可溶蛋白形式的納米抗體,本專利技術的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體可以在宿主菌內實現大量制備,有效降低了納米抗體的生產成本。

    本文檔來自技高網
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    【技術保護點】

    1.一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體,其特征在于,所述納米抗體的氨基酸序列選自如下任一項:

    2.編碼如權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的核酸分子。

    3.一種表達載體,其特征在于,包含權利要求2所述的核酸分子。

    4.轉化或轉染如權利要求3所述表達載體的宿主菌。

    5.一種用于嘔吐毒素檢測的試劑盒,其特征在于,包括權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體。

    6.如權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的制備方法,其特征在于,利用權利要求4所述的宿主菌生產所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體,或利用噬菌體擴增得到展示有所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的噬菌體粒子。

    7.如權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體在嘔吐毒素的免疫分析檢測中的應用。

    8.根據權利要求7所述的應用,其特征在于,所述免疫分析檢測包括酶聯免疫吸附檢測法、熒光極性免疫分析法、膠體金免疫層析法、時間分辨熒光免疫層析法、電化學免疫傳感法、生物免疫傳感法、納米酶免疫分析法、納米免疫傳感法、免疫斑點雜交法和膠乳免疫比濁法。

    9.根據權利要求7或8所述的應用,其特征在于,所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體作為嘔吐毒素的替代品,以競爭抗原、包被抗原、校準劑、質控品或標準品的形式在免疫分析檢測中進行應用。

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    【技術特征摘要】

    1.一種嘔吐毒素抗獨特型納米抗體,其特征在于,所述納米抗體的氨基酸序列選自如下任一項:

    2.編碼如權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的核酸分子。

    3.一種表達載體,其特征在于,包含權利要求2所述的核酸分子。

    4.轉化或轉染如權利要求3所述表達載體的宿主菌。

    5.一種用于嘔吐毒素檢測的試劑盒,其特征在于,包括權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體。

    6.如權利要求1所述的嘔吐毒素抗獨特型納米抗體的制備方法,其特征在于,利用權利要求4所述的宿主菌生產所述嘔吐毒素抗獨特型納米抗體,或利用噬菌體擴增得到展示有所述...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:唐曉倩黃小容李培武張奇姜俊
    申請(專利權)人:中國農業科學院油料作物研究所
    類型:發明
    國別省市:

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