【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生化免疫測定，首先涉及一種血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒，還具體涉及一種血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒的制備方法及其在生化免疫測定中的應用。
技術介紹
1、血清淀粉樣蛋白a（serum?amyloid?a，saa）是一類多基因編碼的多形態蛋白家族，組織淀粉樣蛋白a的前體物質，屬于急性時相反應蛋白。血漿中saa在體內參與機體的多種生理或病理反應，具有多種功能，具體包括：與血漿高密度脂蛋白（hdl）結合，促進膽固醇逆向轉運至肝臟中進行代謝；作為急性時相反應蛋白，能夠募集免疫細胞至炎癥部位，參與炎癥反應；某些研究證明saa還可能誘導降解細胞外基質的酶的表達；此外，saa的降解產物能以淀粉樣蛋白a原纖維的形式沉積在不同的器官中，這是慢性炎癥病理組織學改變的一個重要特征。在正常狀態下，人體內的saa主要由肝細胞表達；當機體發生急性時相反應時，會釋放細胞因子（如il-1、il-6、tnf等），這些因子會刺激肝細胞、巨噬細胞、成纖維細胞及部分脂肪細胞大量表達急性期saa，使血漿中saa濃度急劇升高100-1000倍，而且急性期saa的半衰期短，只有50分鐘左右，是非常靈敏的急性時相反應蛋白，也是臨床上的重要感染及炎癥指標，雖然saa與crp均為急性時相反應蛋白，但saa的高敏感性和短半衰期，在某些方面可能優于crp，可用于評估急性時相反應；研究還發現腫瘤細胞和動脈粥樣硬化斑塊中的細胞也能合成急性期saa，這可能與其參與淀粉樣變性和動脈粥樣硬化形成有關，且作為器官移植排斥反應和多種腫瘤的早期指標，saa課用于腫瘤、動脈粥樣硬化和心血管事件
2、目前，已有用于血清saa的測定的方法包括膠體金法（檢測范圍5-500?mg/l、精密性低）、免疫凝集法（操作復雜）、磁微粒化學發光方法（測定成本高）和膠乳免疫比濁法，雖然現有的膠乳免疫比濁法測定saa具有準確度/靈敏度/特異性高、穩定性好、方便快捷、成本低廉等優點，但是采用膠乳免疫比濁法測定血清saa仍存在一定的缺陷，尤其是在將saa抗體包被在膠乳顆粒的制備過程中，物理吸附法得到的致敏膠乳顆粒穩定性較差，抗體容易脫落；而常用的化學偶聯法，如edc（1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳化二亞胺鹽酸鹽）法，雖然可以提高穩定性，但步驟繁瑣，且制備工藝中為了去除未交聯的抗體和雜質，確保試劑的純凈性，一般需要都包括離心后再進行超聲分散的步驟，該處理步驟容易導致抗體失活或脫落；故制備過程中由于saa抗體包被的不穩定性會影響測定結果的準確性和穩定性，一般會通過表面活性劑、蛋白保護劑等添加劑來提升穩定性，但是添加劑也需要綜合考量與制劑組分的相容性以及對抗體活性等等不利影響。此外，在實際臨床應用當中，樣本中乳糜微粒等物質的干擾也會導致檢測結果不準確。因此，需要針對這些問題提供一種高準確性、高可靠性的膠乳免疫比濁法測定saa的試劑盒及其制備方法。
技術實現思路
1、本專利技術為了克服上述問題，提供一種組分優化后靈敏度、線性范圍、抗干擾能力、穩定性、重復性等性能指標明顯提高的血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒及由該血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒的制備方法和應用。
2、為實現上述專利技術目的，本專利技術通過以下技術方案實現：
3、第一方面，本專利技術提供了一種試劑組合物，采用膠乳增強免疫比濁法用于測定血清淀粉樣蛋白a，包括彼此獨立的試劑1和試劑2，該試劑1的ph為6.5～8.5，包含第一緩沖液、無機鹽、穩定劑、聚陰離子、防腐劑、第一表面活性劑和聚乙二醇6000；該試劑2的ph為6.0～8.0，包含第二緩沖液、無機鹽、穩定劑、防腐劑、第二表面活性劑、dss和抗saa抗體包被膠乳顆粒；其中，第一緩沖液和第二緩沖液的主要成分不同，無機鹽在試劑1和試劑2中的終濃度均為2%～15%；抗saa抗體包被膠乳顆粒在試劑2中的濃度為0.5～2.0?mg/ml、其中制備抗saa抗體包被膠乳顆粒的膠乳顆粒的粒徑為50～180?nm，制備抗saa抗體包被膠乳顆粒的過程中包括使用硫醇類還原劑作為淬滅劑，用于終止未反應的edc的催化活性。
4、根據本專利技術的一個優選實施例，在試劑組合物中，試劑2中可以不包括穩定劑。
5、根據本專利技術的一個優選實施例，在試劑組合物中，第一緩沖液和第二緩沖液均選自15～280?mmol/l的tris-hcl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液、hepes緩沖液和氨基乙酸緩沖液中的任意一種或兩種；無機鹽選自氯化鈣、氯化鈉和氯化鎂中的任意一種或兩種；穩定劑選自0.1%～0.5%的牛血清白蛋白、甘露醇、明膠和酪蛋白中的任意一種或兩種；聚陰離子選自0.3～0.9?mmol/l的聚陰離子纖維素、聚馬來酸和硫酸軟骨素中的任意一種；防腐劑選自疊氮鈉、苯甲酸和proclin-300中的任意一種或兩種；且防腐劑在試劑1中的終濃度為0.5%～3%，防腐劑在試劑2中的終濃度為1%~5%；第一表面活性劑選自0.05%～0.2%的吐溫20、triton?x-100、sds、b66中的任意一種或兩種；第二表面活性劑選自0.05%～0.2%的吐溫20、triton?x-100、b66中的任意一種或兩種；聚乙二醇6000在試劑1中的終濃度為4%～8%；dss在試劑2中的終濃度為50～200?mg/l。
6、根據本專利技術的一個優選實施例，在試劑組合物中，第一緩沖液為磷酸鹽緩沖液；第二緩沖液為甘氨酸緩沖液；無機鹽中至少包含氯化鈉；穩定劑為牛血清白蛋白；聚陰離子為聚陰離子纖維素。
7、優選地，試劑1中磷酸鹽緩沖液的濃度為50?mmol/l，調節ph的緩沖能力在6.5-8.5。
8、優選地，試劑1中無機鹽為8.5%氯化鈉和1.5%氯化鈣，可以有效防止無機鹽對酶與底物結合的干擾，且降低聚陰離子粘度。
9、優選地，試劑1和試劑2中穩定劑均為0.2%的牛血清白蛋白。
10、優選地，試劑1和試劑2中防腐劑均為1%的疊氮鈉。
11、優選地，試劑1中聚陰離子為0.5?mmol/l的聚陰離子纖維素，可以不影響試劑的穩定性，還可以降低乳糜顆粒干擾。
12、優選地，試劑1中第一表面活性劑為0.1%的吐溫20。
13、優選地，試劑1中聚乙二醇6000的濃度為5%。
14、優選地，試劑2中第二緩沖液為100?mmol/l的甘氨酸緩沖液，調節ph的緩沖能力在6.0-8.0。
15、優選地，試劑2中無機鹽為8%的氯化鈉。
16、優選地，試劑2中第二表面活性劑為0.15%的triton?x-100。
17、第二方面，本專利技術提供了一種血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒，包含上述試劑組合物，還包含有質控品和校準品，質控品和校準品均包含至少2個濃度水平的人重組淀粉樣蛋白a，緩沖液均為含人血清的甘氨酸緩沖液。
18、根據本專利技術的一個優選實施例，在血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒中，質控品包含至少2個濃度水平的人重組淀本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種試劑組合物，其特征在于，采用膠乳增強免疫比濁法用于測定血清淀粉樣蛋白A，包括彼此獨立的試劑1和試劑2，其特征在于：
2.根據權利要求1所述的試劑組合物，其特征在于，所述試劑2中可以不包括穩定劑。
3.根據權利要求1-2任一項中所述的試劑組合物，其特征在于，
4.根據權利要求1所述的試劑組合物，其特征在于，所述第一緩沖液為磷酸鹽緩沖液；所述第二緩沖液為甘氨酸緩沖液；所述無機鹽中至少包含氯化鈉；所述穩定劑為牛血清白蛋白；所述聚陰離子為聚陰離子纖維素。
5.一種血清淀粉樣蛋白A測定試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-4任一項中所述的試劑組合物，還包含有質控品和校準品，所述質控品和所述校準品均包含至少2個濃度水平的人重組淀粉樣蛋白A，緩沖液均為含人血清的甘氨酸緩沖液。
6.根據權利要求5所述的血清淀粉樣蛋白A測定試劑盒，其特征在于，所述質控品包含至少2個濃度水平的人重組淀粉樣蛋白A，這2個濃度水平分別為：
7.一種抗SAA抗體包被膠乳顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
8.根據權利要求7所
9.一種血清淀粉樣蛋白A測定試劑盒的制備方法，其特征在于，制備獲得權利要求1-2任一項中所述的試劑組合物，其中，
10.權利要求1-4任一項中所述的試劑組合物，權利要求5-6任一項中所述的血清淀粉樣蛋白A測定試劑盒，權利要求7-8任一項中所述的抗SAA抗體包被膠乳顆粒的制備方法，權利要求9所述的血清淀粉樣蛋白A測定試劑盒的制備方法，在制備膠乳試劑相關產品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種試劑組合物，其特征在于，采用膠乳增強免疫比濁法用于測定血清淀粉樣蛋白a，包括彼此獨立的試劑1和試劑2，其特征在于：
2.根據權利要求1所述的試劑組合物，其特征在于，所述試劑2中可以不包括穩定劑。
3.根據權利要求1-2任一項中所述的試劑組合物，其特征在于，
4.根據權利要求1所述的試劑組合物，其特征在于，所述第一緩沖液為磷酸鹽緩沖液；所述第二緩沖液為甘氨酸緩沖液；所述無機鹽中至少包含氯化鈉；所述穩定劑為牛血清白蛋白；所述聚陰離子為聚陰離子纖維素。
5.一種血清淀粉樣蛋白a測定試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-4任一項中所述的試劑組合物，還包含有質控品和校準品，所述質控品和所述校準品均包含至少2個濃度水平的人重組淀粉樣蛋白a，緩沖液均為含人血清的甘氨酸緩沖...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李雪，李傳保，徐立，
申請(專利權)人：北京萬泰德瑞診斷技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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