本發明專利技術屬于生物醫藥技術領域，具體涉及睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用。本發明專利技術發現斑馬魚中性粒細胞分布于魚腹部中軸線上，且比較整齊，斑馬魚經CuSO<subgt;4</subgt;炎癥誘導后中性粒細胞分布較為雜亂，魚體全身均有分布，經CuSO<subgt;4</subgt;炎癥誘導后添加睡蓮提取物，中性粒細胞與正常斑馬魚相似，表明其炎癥得到了控制；正常斑馬魚抗氧化染色后，身體的熒光較暗，特別是身體部分。經硫酸銅誘導后其身體的熒光顯色較強，再經睡蓮提取物處理后熒光顯色又恢復變暗，起到了抗氧化作用。睡蓮提取物能夠抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷，并且隨著濃度越高抗氧化和抗炎癥效果越好。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體涉及睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用。
技術介紹
1、炎癥是一種對入侵的病原體或無菌性組織損傷的一種有益的宿主反應。炎癥反應是一種由細胞和炎性介質在時間和空間上共同作用的結果，達到中和或者消除損傷刺激來維持內環境穩態的結果。雖然炎癥主要是一種生理和有益的過程，但是不能消退的炎癥過程將導致許多炎癥疾病的發生。對于炎癥的治療，早期曾廣泛使用糖皮質激素類抗炎藥(地塞米松、強的松和可的松等)，但長期使用會產生依賴性，易引起腎上腺皮質功能衰退等副作用。
2、斑馬魚是一種脊椎動物，與人類基因的相似度高達87％，且其產卵數量大、發育周期短，是優良的天然產物功能評價模式動物。斑馬魚模型既具有體外實驗快速、高效、低廉、用藥量小等優勢，又具有哺乳類動物實驗預測性強、可比度高、可觀察多個器官等優點，近年已在化合物藥效、毒性評價中得到廣泛應用。因此，基于斑馬魚模型，篩選新的抗氧化和炎癥損傷藥物，對于本領域來說尤為重要。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于在于提供睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用，有效抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷，篩選生物標志物，準確評價睡蓮提取物抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷功能，并且安全性良好。
2、為了實現上述目的，本專利技術提供了睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用。
3、優選的，所述睡蓮提取物包括睡蓮水提取物；
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p>4、所述睡蓮水提取物的制備方法包括：利用水對睡蓮粉末進行提取，收集提取液，得到所述睡蓮水提取物。5、優選的，所述睡蓮粉末和所述水的質量體積比為6.4g：(500～1000)ml；
6、所述提取的次數為1～2次；所述提取的溫度為100℃，每次提取的時間為30min。
7、優選的，所述睡蓮粉末能過20目篩。
8、優選的，所述睡蓮粉末的制備方法包括：取睡蓮第一天開花的新鮮花朵，去除雜質后，插入裝有清水的容器中，日常光照，待其第二天花朵開放，去除花梗和萼片后干燥、粉碎，得到所述睡蓮粉末。
9、優選的，所述干燥的方式包括：70～80℃熱風烘干至水分含量≤10％。
10、優選的，所述斑馬魚包括72～80hpf斑馬魚；所述硫酸銅的誘導濃度為10～15μm。
11、優選的，所述睡蓮提取物的添加量為25～125mg/l斑馬魚養殖水，所述所述睡蓮提取物的質量以睡蓮粉末的質量計。
12、本專利技術還提供了生物標志物在下述一項或兩項中的應用：
13、(1)預測硫酸銅誘導斑馬魚氧化和炎癥損傷敏感性；
14、(2)評價睡蓮提取物抗斑馬魚氧化和炎癥損傷功能中的應用；所述斑馬魚氧化和炎癥損傷的誘導因素包括硫酸銅；
15、所述生物標志物包括il1b、il11a、cxc18a、nfkbiaa、serpine1、mmp9、il4r.1、ptgs2a和ptgs2b中的一種或多種。
16、本專利技術還提供了一種評價睡蓮提取物抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷功能的方法，包括如下步驟：
17、向對照組斑馬魚養殖水中添加硫酸銅后繼續培養；
18、向實驗組斑馬魚養殖水中添加睡蓮提取物和硫酸銅后繼續培養；
19、分別檢測實驗組和對照組斑馬魚中生物標志物的表達量；所述生物標志物為il1b、il11a、cxc18a、nfkbiaa、serpine1、mmp9、il4r.1、ptgs2a和ptgs2b中的一種或多種；
20、將實驗組斑馬魚中生物標志物的表達量與對照組進行比對，評價所述睡蓮提取物抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷功能：若實驗組斑馬魚中生物標志物的表達量顯著低于對照組，則所述睡蓮提取物具有抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷作用。
21、有益效果：
22、本專利技術提供了睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用。本專利技術發現斑馬魚中性粒細胞分布于魚腹部中軸線上，且比較整齊，斑馬魚經cuso4炎癥誘導后中性粒細胞分布較為雜亂，魚體全身均有分布，經cuso4炎癥誘導后添加睡蓮提取物，中性粒細胞與正常斑馬魚相似，表明其炎癥得到了控制；正常斑馬魚抗氧化染色后，身體的熒光較暗，特別是身體部分。經硫酸銅誘導后其身體的熒光顯色較強，再經睡蓮提取物處理后熒光顯色又恢復變暗，起到了抗氧化作用。睡蓮提取物能夠抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷，并且隨著濃度越高抗氧化和抗炎癥效果越好。并且實施例結果表明，黃金國睡蓮水提物對斑馬魚的半致死濃度為3200mg/l，其安全濃度為半致死濃度除以10，具體為320mg/l；巴拿馬太平洋的半致死濃度為2100mg/l，其安全濃度為半致死濃度除以10，具體為210mg/l，安全性良好。
23、進一步的，本專利技術還提供了生物標志物在評價睡蓮提取物抗斑馬魚氧化和炎癥損傷功能中的應用，所述生物標志物包括il1b、il11a、cxc18a、nfkbiaa、serpine1、mmp9、il4r.1、ptgs2a和ptgs2b中的一種或多種。本專利技術發現在含有硫酸銅(cuso4)的養殖水中，斑馬魚il1b、il11a、cxc18a、nfkbiaa、serpine1、mmp9、il4r.1、ptgs2a和ptgs2b的表達水平顯著升高，而在睡蓮制品(睡蓮水提取物)+cuso4的養殖水中能夠恢復正常水平。因此，基于斑馬魚il1b、il11a、cxc18a、nfkbiaa、serpine1、mmp9、il4r.1、ptgs2a和ptgs2b基因，能夠準測預測硫酸銅誘導斑馬魚氧化和炎癥損傷敏感性，評價睡蓮提取物的抗氧化和抗炎癥功能。
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【技術保護點】
1.睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述睡蓮提取物包括睡蓮水提取物；
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述睡蓮粉末和所述水的質量體積比為6.4g：(500～1000)mL；
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述睡蓮粉末能過20目篩。
5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述睡蓮粉末的制備方法包括：取睡蓮第一天開花的新鮮花朵，去除雜質后，插入裝有清水的容器中，日常光照，待其第二天花朵開放，去除花梗和萼片后干燥、粉碎，得到所述睡蓮粉末。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述干燥的方式包括：70～80℃熱風烘干至水分含量≤10％。
7.根據權利要求1任一項所述的應用，其特征在于，所述斑馬魚包括72～80hpf斑馬魚；所述硫酸銅的誘導濃度為10～15μM。
8.根據權利要求1～7任一項所述的應用，其特征在于，所述睡蓮提取物的添加量為25～125mg/L斑馬魚養殖水，所述睡蓮提取物的質量以睡蓮粉末的質量計。
9.生物標志物在下述一項或兩項中的應用：
10.一種評價睡蓮提取物抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷功能的方法，其特征在于，包括如下步驟：
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【技術特征摘要】
1.睡蓮提取物在制備抗硫酸銅誘導的斑馬魚氧化和炎癥損傷產品中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述睡蓮提取物包括睡蓮水提取物；
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述睡蓮粉末和所述水的質量體積比為6.4g：(500～1000)ml；
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述睡蓮粉末能過20目篩。
5.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述睡蓮粉末的制備方法包括：取睡蓮第一天開花的新鮮花朵，去除雜質后，插入裝有清水的容器中，日常光照，待其第二天花朵開放，去除花梗和萼片后干燥、粉碎，得到所述睡蓮粉末...
【專利技術屬性】
技術研發人員：龍凌云，毛立彥，檀小輝，黃秋偉，黃秋嵐，覃茜，黃歆怡，謝振興，於艷萍，丁麗瓊，劉功德，田程飄，陸祖正，謝朝敏，艾靜汶，
申請(專利權)人：廣西壯族自治區亞熱帶作物研究所廣西亞熱帶農產品加工研究所，
類型：發明
國別省市：
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