【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體涉及一種新型硫化氫供體、制備方法及其在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應用。
技術介紹
1、h2s是繼一氧化氮、一氧化碳之后發現的第三種具有生物學效應的氣體信號分子。它可以由內源性產生并自由穿過生物膜直接觸發細胞內的信號級聯反應，進而廣泛參與機體內多種生理過程，具有免疫調節、屏障修復、抗凋亡、抗氧化等多種功效。生理濃度下的h2s可以減少促炎細胞因子、趨化因子的產生，并誘導中性粒細胞凋亡和巨噬細胞向抗炎表型轉變。h2s還可以抑制白細胞對血管內皮的黏附以及白細胞向炎癥部位的遷移，從而在受損組織的修復中起關鍵作用。有研究表明，抑制健康大鼠內源性h2s合成會誘專利技術顯的腸道炎癥和黏膜損傷；給予h2s則能顯著降低促炎細胞因子tnf-α的表達，減輕結腸炎癥，促進粘膜愈合。相關研究已公開通過調節caspase-3活性可以抑制大鼠缺血再灌注或腦缺血模型中胃上皮細胞的凋亡從而起到保護細胞功效。相關研究已公開在小鼠肝缺血再灌注損傷模型中，低濃度na2s治療可以觀察到肝臟細胞脂質過氧化水平的下降。綜上所述，h2s所具有的修復粘膜損傷、抗凋亡、抗氧化功能很好地契合了炎癥性疾病治療的需求，為相關疾病治療提供了一個新契機。
2、現有的h2s供給手段包括最為基礎的無機硫化鹽類供體，如na2s、nahs、cas等，這類供體在溶液中會快速降解，大量，快速的釋放h2s。無機硫化鹽類供體在溶液中穩定性較差，直接局部給藥后迅速釋放h2s，不能模擬體內緩慢而連續地產生h2s的過程，且局部過量的h2s會對機體產生一定的危害。緩釋供體，
3、盡管目前外源性h2s供體的開發取得了顯著進展，但這些供體始終無法很好地模擬體內h2s的產生，不能穩定、勻速地釋放h2s，對h2s發揮其生物功能造成了極大影響。且短時間內局部濃度過高又會產生毒副作用。因此，開發新的h2s供給策略，實現h2s在體內的可控、穩定釋放對于提高h2s介導的炎癥性疾病治療效果來說至關重要。
技術實現思路
1、針對當前h2s供體無法很好地模擬體內h2s的產生，不能穩定、勻速地釋放h2s的問題，本專利技術的目的在于設計提供一種新型硫化氫供體、制備方法及其在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應用。
2、本專利技術選用藥物載體來對改性胱硫醚γ裂解酶(cgl-e339v)進行封裝保護，以保障酶促反應的穩定進行。同時在硫化氫供體的表面包覆了具有靶向、長循環等功能的功能涂層，賦予不同硫化氫供體全新的性能。而當粒子富集于病灶處后，產h2s酶促反應的進行，很好地模擬了內源性h2s穩定釋放的功能。這一創新實現了精準、安全、持久的硫化氫供給手段，具備廣闊的應用前景。有望為炎癥性疾病治療提供新的治療思路和策略。
3、為了實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
4、一方面，本專利技術提供了一種新型硫化氫供體，所述硫化氫供體包含硫化氫合成酶，裝載硫化氫合成酶的藥物載體，以及包覆在藥物載體外的功能涂層。所述藥物載體為金屬有機框架類材料、高分子納米材料、脂質體類材料、外泌體類材料或水凝膠類材料，可以針對不同炎癥性疾病特點為生物酶提供保護、緩釋、富集等功能。所述功能涂層為表面活性劑、聚合物、邊緣活性劑、生物膜或脂雙層，用于改善藥物載體的理化性質，從而進一步賦予其在體靶向，長循環等特殊性能。
5、優選，所述金屬有機框架類材料為uio系列材料、zifs系列材料、pcn系列材料或mil系列材料；更優選，所述pcn系列材料為pcn-333納米粒子；
6、優選，所述高分子納米材料為聚合物納米粒子、聚合物膠束或聚合物納米纖維；更優選，所述高分子納米材料為聚乳酸-羥基乙酸共聚物(plga)；
7、優選，所述脂質體類材料為二棕櫚酰磷脂酰膽堿脂質體、二硬脂酰磷脂酰膽堿脂質體或二油酰磷脂酰膽堿脂質體；更優選，所述脂質體類材料為二油酰磷脂酰膽堿脂質體；
8、優選，所述外泌體類材料為間充質干細胞msc、造血干細胞外泌體或m2巨噬細胞外泌體；更優選，所述外泌體類材料為m2巨噬細胞外泌體；
9、優選，所述水凝膠類材料為海藻酸鈉-殼聚糖水凝膠、聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸，或明膠-氧化海藻酸鈉水凝膠；更優選，所述水凝膠類材料為海藻酸鈉-殼聚糖水凝膠；
10、所述的一種新型硫化氫供體，所述功能涂層為表面活性劑，聚合物、邊緣活性劑、生物膜或脂雙層。
11、優選，所述表面活性劑為聚山梨醇酯-20(tween?20)；
12、優選，所述聚合物為透明質酸(ha)；
13、優選，所述邊緣活性劑為油酸山梨坦(span?80)；
14、第二方面，本專利技術提供了任一項所述的一種新型硫化氫供體的制備方法，包括以下步驟：
15、(1)表達獲得具有催化含硫氨基酸產生硫化氫能力的酶；
16、具體的制備過程包括：
17、合成具有催化含硫氨基酸產生硫化氫能力的酶cgl-e339v的氨基酸序列，進行pcr反應，獲得cgl基因全長序列，在后端加入his標簽后，與表達載體進行雙酶切，回收目的基因片段和質粒載體，轉化進感受態細菌，培養后分別獲得重組菌；
18、利用化學轉化法將重組質粒轉化進感受態細菌，進行孵育，加入無抗性的lb液體培養基，震蕩培養，然后轉接至含有抗生素的lb平皿上，對陽性菌落進行pcr、酶切和測序鑒定，進行目標蛋白的純化，獲得原核表達系統，表達獲得氨基酸序列如seq?id?no.1所示的改性胱硫醚γ裂解酶；
19、seq?id?no.1的氨基酸序列為：
20、mqekdassqgflphfqhfatqaihvgqdpeqwtsravvppislsttfkqgapgqhsgfeysrsgnptrnclekavaaldgakyclafasglaatvtithllkagdqiicmddvyggtnryfrqvasefglkisfvdcskiklleaaitpetklvwietptnptqkvidie本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述硫化氫供體包含硫化氫合成酶，裝載硫化氫合成酶的藥物載體，以及包覆在藥物載體外的功能涂層。
2.如權利要求1所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述硫化氫合成酶為改性胱硫醚γ裂解酶。
3.如權利要求2所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述改性胱硫醚γ裂解酶為將胱硫醚γ裂解酶第339位的E突變為V后得到的，改性胱硫醚γ裂解酶的氨基酸序列如SEQID?NO.1所示。
4.如權利要求1所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述藥物載體為金屬有機框架類材料、高分子納米材料、脂質體類材料、外泌體類材料或水凝膠類材料；
5.如權利要求1所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述功能涂層為表面活性劑、聚合物、邊緣活性劑、生物膜或脂雙層；
6.一種如權利要求1-5任一項所述的新型硫化氫供體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
7.一種用于治療炎癥性疾病的藥物，其特征在于，包含如權利要求1-5任一項所述的新型硫化氫供體和藥學上可接受的輔料。
8.如權利要求7所述的一種用
9.如權利要求1-5任一項所述的一種新型硫化氫供體在制備治療炎癥性疾病的藥物中的應用。
10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述炎癥性疾病為炎癥性腸病、銀屑病或動脈粥樣硬化。
...【技術特征摘要】
1.一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述硫化氫供體包含硫化氫合成酶，裝載硫化氫合成酶的藥物載體，以及包覆在藥物載體外的功能涂層。
2.如權利要求1所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述硫化氫合成酶為改性胱硫醚γ裂解酶。
3.如權利要求2所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述改性胱硫醚γ裂解酶為將胱硫醚γ裂解酶第339位的e突變為v后得到的，改性胱硫醚γ裂解酶的氨基酸序列如seqid?no.1所示。
4.如權利要求1所述的一種新型硫化氫供體，其特征在于，所述藥物載體為金屬有機框架類材料、高分子納米材料、脂質體類材料、外泌體類材料或水凝膠類材料；
5.如權利要求1所述的一種新型硫化氫供體...
【專利技術屬性】
技術研發人員：喬晁強，張瑞麗，王忠良，邵帥，王剛，
申請(專利權)人：西安電子科技大學，
類型：發明
國別省市：
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