【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分析化學領域，具體地，涉及同時檢測氨基酸組合物中半胱氨酸或其鹽、乙酰半胱氨酸及胱氨酸中的至少兩種的方法。
技術介紹
1、復方氨基酸注射液或口服液是一類重要的醫療和營養補充產品，主要用于提供人體所需的氨基酸，支持蛋白質合成和代謝，在臨床上廣泛應用于手術后恢復、營養不良、肝病、腎病等多種情況。這類產品通常根據不同的醫療需求和患者的特定情況，提供不同配方和濃度的氨基酸注射液或口服液。
2、目前市場上的氨基酸品種種類較多，例如復方氨基酸注射液(17aa、17aa-ⅱ、17aa-ⅲ)、復方氨基酸注射液(18aa-ⅵ)、復方氨基酸注射液(18aa-ⅶ)、復方氨基酸注射液(18aa-ⅸ)、復方氨基酸注射液(小兒20aa)等等，這些產品均含有半胱氨酸，然而半胱氨酸易氧化降解，導致產品質量不穩定，進而影響藥品的安全性及有效性。
3、cn115317590a專利公開，復方氨基酸注射液中，可用乙酰半胱氨酸替代半胱氨酸作為活性成分，然而乙酰半胱氨酸在某些氧化過程中或化學條件下，乙酰基團斷裂或被去除，釋放出半胱氨酸，半胱氨酸則因易氧化降解成胱氨酸。由此，進一步加劇了這類產品質量的不穩定性。
4、因此，需要對復方氨基酸注射液中的半胱氨酸或乙酰半胱氨酸的含量及其常見降解物質進行準確定性和定量分析，以滿足藥典和監管要求。
技術實現思路
1、本專利技術旨在至少在一定程度上解決現有技術中存在的技術問題至少之一。為此，本專利技術提供了同時檢測氨基酸組合物中半胱氨酸、乙酰
2、需要聲明的是，本專利技術是基于專利技術人對以下問題的發現和認識作出的：
3、采用高效液相色譜法檢測氨基酸組合物(比如復方氨基酸注射液)中半胱氨酸的含量在本領域中是常見的，然而通過該方法同時檢測包括半胱氨酸在內的兩種或三種半胱氨酸及其替代物、有關物質(比如半胱氨酸的替代物乙酰半胱氨酸，半胱氨酸的氧化降解產物胱氨酸)是非常困難的。因為，半胱氨酸、胱氨酸、乙酰半胱氨酸采用高效液相色譜法同時檢測，分離度低，難以有效分離，檢測的精密度、重復性和準確度不能滿足準確定量的需求，無法滿足藥典和監管要求。
4、在上述三種化合物中，乙酰半胱氨酸由于乙酰基的引入，其疏水性最高，胱氨酸由于二硫鍵的存在，其疏水性次之，而半胱氨酸由于硫醇基的極性，疏水性最低。這種疏水性的差異可以被用來優化hplc的分離條件。專利技術人經過大量試驗發現，當采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以硫酸銨溶液和離子對試劑的混合溶液作為流動相a，以有機相(比如甲醇)作為流動相b，進行梯度洗脫時，半胱氨酸、胱氨酸、乙酰半胱氨酸分離度好；進一步控制流動相a的ph值為1.5～2.5時，能進一步提高這三種物質的分離度，實現有效分離。試驗結果顯示，硫酸銨溶液和離子對試劑的混合溶液對于將半胱氨酸、胱氨酸、乙酰半胱氨酸相互分離，且對于將胱氨酸、胱氨酸、乙酰半胱氨酸與其他氨基酸組分或雜質有效分離是必需的。與不含離子對試劑的硫酸銨溶液、不含硫酸銨的烷基磺酸鈉緩沖液、含離子對試劑的乙酸銨緩沖溶液、含離子對試劑的磷酸鹽緩沖液相比，采用硫酸銨溶液和離子對試劑的混合溶液作為流動相a，以有機化合物作為流動相b，進行梯度洗脫，能實現上述三種物質的有效分離，進一步優化保留時間，得到保留時間穩定、峰形良好的色譜峰，實現半胱氨酸、胱氨酸、乙酰半胱氨酸的準確定量。專利技術人針對上述方法進行了專屬性、溶液穩定性和準確度等方法學驗證。結果表明，該方法的專屬性強、穩定性好、準確度高，檢測結果準確、可靠、有效、重復性好、精密度高。
5、因此，在本專利技術的第一方面，本專利技術提出了一種同時檢測氨基酸組合物中半胱氨酸、乙酰半胱氨酸及胱氨酸或以上所述氨基酸的鹽中的至少兩種的方法。根據本專利技術的實施例，采用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件包括：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，采用流動相a和流動相b進行梯度洗脫；其中，所述流動相a為硫酸銨溶液和離子對試劑的混合溶液。根據本專利技術實施例的方法能將氨基酸組合物中的半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、胱氨酸或以上所述氨基酸的其鹽相互分離，能與其他氨基酸或雜質有效分離，分離度高；對照品和氨基酸組合物中的半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、胱氨酸或以上所述氨基酸的其鹽的保留時間穩定、峰形好。本專利技術的方法專屬性強、穩定性好、準確度高，檢測結果準確、可靠、有效、重復性好、精密度高，可廣泛應用于氨基酸組合物中半胱氨酸、乙酰半胱氨酸及胱氨酸的定性和定量分析。
6、在高效液相色譜(hplc)中，術語“流動相b”通常被稱為有機相或強洗脫劑，與“流動相a(水相或弱洗脫劑)”一起使用，形成梯度洗脫系統。
7、在本專利技術的一些可選的實施方案中，流動相b可以包含，包括不限于：甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮。
8、在制藥領域，氨基酸鹽是常見的化合物，通常具有較好的溶解性和穩定性，易于在水溶液中運輸和吸收。在醫藥制劑中，選擇合適的氨基酸鹽可以提高藥物的生物利用度和療效。在營養補充劑中，氨基酸鹽可以作為活性成分，幫助補充人體所需的氨基酸。示例性地，本文所述的氨基酸的鹽包括不限于：鹽酸鹽、醋酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽。
9、在本專利技術的一些可選的實施方案中，所述氨基酸的鹽為鹽酸鹽、醋酸鹽、蘋果酸鹽或檸檬酸鹽，優選鹽酸鹽。
10、根據本專利技術的實施例，基于所述流動相a的體積，所述硫酸銨溶液的終濃度為0.01～0.1mol/l，優選0.02～0.05mol/l，更優選0.025～0.045mol/l。專利技術人經過大量試驗確定，流動相a中硫酸銨溶液的較佳濃度。該濃度范圍內的硫酸銨溶液，有助于進一步提高半胱氨酸、胱氨酸和乙酰半胱氨酸之間的分離度，有助于優化保留時間，進而獲得更好的色譜峰形。該濃度范圍內的硫酸銨溶液，還有助于維持高效液相色譜系統的穩定性，減少背景噪音，提高分析的可靠性，有助于減少氨基酸組合物中其他非檢測目標成分的干擾，提高檢測的準確性和重復性。
11、根據本專利技術的實施例，所述離子對試劑為烷基磺酸鈉化合物。通過烷基磺酸鈉的疏水性烷基鏈與疏水性化合物之間的疏水性相互作用，以及其磺酸基(-so3-)與疏水性化合物的極性基團(如半胱氨酸的硫醇基-sh)之間的電荷-偶極或離子-偶極相互作用，烷基磺酸鈉化合物與半胱氨酸、胱氨酸、乙酰半胱氨酸之間形成離子對，進一步增加了這三種化合物與十八烷基硅烷鍵合硅膠的相互作用，從而調節其保留時間，得到更好的分離度和峰形。
12、在本專利技術的一些可選實施方案中，所述離子對試劑包括本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種同時檢測氨基酸組合物中半胱氨酸、乙酰半胱氨酸及胱氨酸或以上所述氨基酸的鹽中的至少兩種的方法，其特征在于，采用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件包括：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，采用流動相A和流動相B進行梯度洗脫；
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸的鹽為鹽酸鹽、醋酸鹽、蘋果酸鹽或檸檬酸鹽，優選鹽酸鹽；任選地，基于所述流動相A的體積，所述硫酸銨溶液的終濃度為0.01～0.1mol/L，優選0.02～0.05mol/L，更優選0.025～0.045mol/L。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述離子對試劑為烷基磺酸鈉化合物；
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相A混合溶液的pH值為1.5～2.5；
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜條件還包括：檢測波長為195nm-210mm，進樣體積為10～70μL，流速為0.8～1.0mL/min，柱溫為25℃～35℃；
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相B為甲醇；
7.根據權
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸組合物包括：胱氨酸、乙酰半胱氨酸、半胱氨酸或其鹽中的至少兩種；
9.權利要求1～8任一項所述的方法在檢測氨基酸組合物中半胱氨酸和/或乙酰半胱氨酸和/或胱氨酸或以上所述氨基酸的鹽中的應用。
10.權利要求9所述的應用，其特征在于，所述氨基酸組合物包括：胱氨酸，乙酰半胱氨酸或半胱氨酸或以上氨基酸鹽中的至少兩種；
...【技術特征摘要】
1.一種同時檢測氨基酸組合物中半胱氨酸、乙酰半胱氨酸及胱氨酸或以上所述氨基酸的鹽中的至少兩種的方法，其特征在于，采用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件包括：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，采用流動相a和流動相b進行梯度洗脫；
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸的鹽為鹽酸鹽、醋酸鹽、蘋果酸鹽或檸檬酸鹽，優選鹽酸鹽；任選地，基于所述流動相a的體積，所述硫酸銨溶液的終濃度為0.01～0.1mol/l，優選0.02～0.05mol/l，更優選0.025～0.045mol/l。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述離子對試劑為烷基磺酸鈉化合物；
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相a混合溶液的ph值為1.5～2.5；
5.根據權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張民，吳俊，胡金濤，宋婷，劉超，譚玉梅，付夢玲，
申請(專利權)人：遠大醫學營養科學武漢有限公司，
類型：發明
國別省市：
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