【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及質(zhì)粒提取試劑盒，具體為starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒。
技術(shù)介紹
1、現(xiàn)有技術(shù)中，細(xì)菌質(zhì)粒dna的提取方法一般包括細(xì)菌裂解、dna聚集沉淀、除雜、dna純化分離等步驟。傳統(tǒng)提取方法主要包含柱式法和ctab裂解法，這些方法操作繁瑣，耗時較長，不利于大量提取，并且操作過程中可能會使用氯仿、苯酚等有機(jī)溶劑，污染較大。
2、磁珠法細(xì)菌質(zhì)粒dna提取試劑盒利用表面修飾后的磁珠和dna分子的特異性吸附，采用磁性納米分離技術(shù)，具有方便和重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。但是現(xiàn)今報(bào)道的磁珠細(xì)菌質(zhì)粒dna提取法存在著磁珠對dna的吸附不充分，導(dǎo)致所需提取時間長的問題。因此，有必要開發(fā)提取速度快、提取效率高的細(xì)菌質(zhì)粒dna高通量提取方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題。
2、為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供如下技術(shù)方案：
3、starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，包括懸浮液、裂解液、結(jié)合液、洗滌液和洗脫液，還包括改性共聚磁珠混懸液，所述改性共聚磁珠混懸液為改性共聚磁珠與異丙醇按照質(zhì)量比1：10～20混合配置而成；
4、所述改性共聚磁珠包括以下制備步驟：
5、s1、將fe3o4@sio2磁性納米粒子加入至fe3o4@sio2磁性納米粒子質(zhì)量4～5倍的無水甲苯中，超聲分散10～15min，再加入fe3o4@sio2磁性納米粒子質(zhì)量3～4倍的烯丙基
6、s2、將氫氧化鈉、n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺、過硫酸銨、甲基丙烯酸甲酯和乙烯基吡啶加入至甲基丙烯酸甲酯質(zhì)量3～5倍的去離子水中，再加入甲基丙烯酸甲酯質(zhì)量0.08～0.1倍的改性fe3o4@sio2磁性納米粒子，攪拌均勻，在溫度為35～40℃條件下，攪拌反應(yīng)30～40min，之后加入甲基丙烯酸甲酯質(zhì)量0.8～1.2倍的n，n′-四甲基乙二胺，攪拌均勻，反應(yīng)3～3.5h，反應(yīng)結(jié)束后靜置1～2h，再將產(chǎn)物用于丙酮和去離子水分別清洗3～4次后，制備成共聚磁珠；
7、s3、將共聚磁珠加入至共聚磁珠質(zhì)量10～15倍的質(zhì)量份數(shù)為25～28％的氨水溶液中溶脹；在溫度為0～5℃，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，加入共聚磁珠質(zhì)量600～700倍的正庚烷，在轉(zhuǎn)速為450～500r/min條件下，攪拌30～40min，然后以1ml/s速度勻速滴加共聚磁珠質(zhì)量5～6倍的正硅酸乙酯溶液，滴加完畢后，繼續(xù)攪拌反應(yīng)3～4h，反應(yīng)結(jié)束后過濾，并將過濾產(chǎn)品用于丙酮和去離子水分別清洗3～4次后，自然晾干，制得改性共聚磁珠。
8、作為優(yōu)化，所述fe3o4@sio2磁性納米粒子包括以下制備步驟：將fe3o4磁性納米粒子加入至fe3o4磁性納米粒子質(zhì)量180～200倍的去離子水中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，攪拌10～20min，攪拌均勻后，升溫至75～85℃，之后以10ml/h的速度勻速滴加fe3o4磁性納米粒子質(zhì)量20～22倍的na2sio3溶液，并采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36～38％的鹽酸溶液調(diào)整ph至6～6.5，滴加完畢后攪拌反應(yīng)3～3.5h，攪拌完畢后通過磁力分離，并將分離產(chǎn)物采用無水乙醇和去離子水分別清洗3～5次后，在溫度為55～65℃條件下，真空干燥14～16h后制得fe3o4@sio2磁性納米粒子。
9、作為優(yōu)化，所述na2sio3溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12～14％。
10、作為優(yōu)化，所述fe3o4磁性納米粒子包括以下制備步驟：將fecl3·6h2o加入至fecl3·6h2o質(zhì)量30～35倍的乙二醇中，攪拌30～35min，之后加入無水乙酸鈉和聚乙二醇，繼續(xù)攪拌30～35min，攪拌完畢后，在溫度為200～210℃條件下反應(yīng)48～50h，反應(yīng)完畢通過磁力分離，并將分離產(chǎn)物采用無水乙醇和去離子水分別清洗3～5次后，在溫度為55～65℃條件下，真空干燥24～26h后制得fe3o4磁性納米粒子。
11、作為優(yōu)化，所述無水乙酸鈉為fecl3·6h2o質(zhì)量2.5～2.8倍。
12、作為優(yōu)化，所述聚乙二醇為fecl3·6h2o質(zhì)量0.7～0.75倍。
13、作為優(yōu)化，所述正硅酸乙酯溶液是將正硅酸乙酯和正庚烷按照體積比1：4，混合配制而成。
14、作為優(yōu)化，所述氫氧化鈉、n，n′-亞甲基雙丙烯酰胺、過硫酸銨、甲基丙烯酸甲酯和乙烯基吡啶之間質(zhì)量比為0.28～0.3：0.22～0.24：0.8～0.9：1：0.8～0.9。
15、starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒的提取方法，采用上述所述的starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒進(jìn)行提取，包括如下步驟：
16、步驟(1)、將細(xì)菌培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到滅菌的離心管中，離心收集菌體沉淀；
17、步驟(2)、向步驟(1)的菌體沉淀中加懸浮液,進(jìn)行渦旋振蕩,得到菌體懸液；
18、步驟(3)、向步驟(2)的菌體懸液中加入裂解液對菌體沉淀進(jìn)行裂解，得到菌體裂解液；
19、步驟(4)、向步驟(3)的菌體裂解液中加入結(jié)合液，離心分離，取上清液移至離心管內(nèi)，之后加入改性共聚磁珠混懸液，在25～35℃條件下靜置3～5min，再將離心管置于磁力架的磁場中，去除殘液；
20、步驟(5)、向步驟(4)中去除殘液的離心管中加入洗滌液，振蕩再顛倒2～3次后，再次置于磁力架的磁場中，去除殘液，重復(fù)該過程一次后，在25～35℃條件下將離心管靜止5～10min，再加入洗脫液，在25～35℃條件下孵育3～5min，再將離心管置于磁場中，并將剩余溶液抽取，置于-20℃保存，所得溶液即為抽提獲得的高純度質(zhì)粒。
21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)所達(dá)到的有益效果是：
22、本申請采用的表面修飾后的磁珠和質(zhì)粒之間的特異性吸附，采用磁性納米分離技術(shù)，具有方便和重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)；磁珠采用丙烯酸甲酯和乙烯基吡啶共聚物作為主體，并在其表面覆蓋fe3o4@sio2磁性納米粒子，并且fe3o4@sio2磁性納米粒子表面接枝有烯丙基三甲氧基硅烷可以提高其在溶液中的分散性，使其在共聚物表面均勻分散，另一方面通過烯丙基三甲氧基硅烷上的雙鍵使其牢牢固定在共聚物表面，并在最終在共聚磁珠表面通過四乙氧基正硅烷在氨水介質(zhì)中的溶膠-凝膠反應(yīng)再次覆蓋一層sio2，從而使其表面具備大量的硅羥基，實(shí)現(xiàn)特異性吸附；
23、在共聚過程中采用丙烯酸甲酯和乙烯基吡啶進(jìn)行共聚方式，制備共聚磁珠主體，該共聚磁珠主體可以在堿性條件下溶脹，在酸性條件下收縮，由于在質(zhì)粒制備過程中，常采用的堿性裂解法，會導(dǎo)致最終提取溶液中呈堿性，因此采用丙烯酸甲酯和乙烯基吡啶使其在堿性條件下溶脹，從而使磁珠的接觸表面積增大，使其上附著更多的質(zhì)粒，在洗脫液中本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，包括懸浮液、裂解液、結(jié)合液、洗滌液和洗脫液，其特征在于，還包括改性共聚磁珠混懸液，所述改性共聚磁珠混懸液為改性共聚磁珠與異丙醇按照質(zhì)量比1：10～20混合配置而成；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述Fe3O4@SiO2磁性納米粒子包括以下制備步驟：將Fe3O4磁性納米粒子加入至Fe3O4磁性納米粒子質(zhì)量180～200倍的去離子水中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，攪拌10～20min，攪拌均勻后，升溫至75～85℃，之后以10mL/h的速度勻速滴加Fe3O4磁性納米粒子質(zhì)量20～22倍的Na2SiO3溶液，并采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36～38％的鹽酸溶液調(diào)整pH至6～6.5，滴加完畢后攪拌反應(yīng)3～3.5h，攪拌完畢后通過磁力分離，并將分離產(chǎn)物采用無水乙醇和去離子水分別清洗3～5次后，在溫度為55～65℃條件下，真空干燥14～16h后制得Fe3O4@SiO2磁性納米粒子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述Na2SiO3溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述Fe3O4磁性納米粒子包括以下制備步驟：將FeCl3·6H2O加入至FeCl3·6H2O質(zhì)量30～35倍的乙二醇中，攪拌30～35min，之后加入無水乙酸鈉和聚乙二醇，繼續(xù)攪拌30～35min，攪拌完畢后，在溫度為200～210℃條件下反應(yīng)48～50h，反應(yīng)完畢通過磁力分離，并將分離產(chǎn)物采用無水乙醇和去離子水分別清洗3～5次后，在溫度為55～65℃條件下，真空干燥24～26h后制得Fe3O4磁性納米粒子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述無水乙酸鈉為FeCl3·6H2O質(zhì)量2.5～2.8倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述聚乙二醇為FeCl3·6H2O質(zhì)量0.7～0.75倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述正硅酸乙酯溶液是將正硅酸乙酯和正庚烷按照體積比1：4，混合配制而成。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述氫氧化鈉、N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺、過硫酸銨、甲基丙烯酸甲酯和乙烯基吡啶之間質(zhì)量比為0.28～0.3：0.22～0.24：0.8～0.9：1：0.8～0.9。
9.StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒的提取方法，其特征在于：采用權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的StarPure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒進(jìn)行提取，包括如下步驟：
...【技術(shù)特征摘要】
1.starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，包括懸浮液、裂解液、結(jié)合液、洗滌液和洗脫液，其特征在于，還包括改性共聚磁珠混懸液，所述改性共聚磁珠混懸液為改性共聚磁珠與異丙醇按照質(zhì)量比1：10～20混合配置而成；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述fe3o4@sio2磁性納米粒子包括以下制備步驟：將fe3o4磁性納米粒子加入至fe3o4磁性納米粒子質(zhì)量180～200倍的去離子水中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，攪拌10～20min，攪拌均勻后，升溫至75～85℃，之后以10ml/h的速度勻速滴加fe3o4磁性納米粒子質(zhì)量20～22倍的na2sio3溶液，并采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36～38％的鹽酸溶液調(diào)整ph至6～6.5，滴加完畢后攪拌反應(yīng)3～3.5h，攪拌完畢后通過磁力分離，并將分離產(chǎn)物采用無水乙醇和去離子水分別清洗3～5次后，在溫度為55～65℃條件下，真空干燥14～16h后制得fe3o4@sio2磁性納米粒子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述na2sio3溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12～14％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的starpure無內(nèi)毒素超純質(zhì)粒大提試劑盒，其特征在于，所述fe3o4磁性納米粒子包括以下制備步驟：將fecl3·6h2o加入至fecl3·6h2o質(zhì)量30～35倍的乙二...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李君，余少平，
申請(專利權(quán))人：康潤景星蘇州生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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