【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體涉及一種t7核酸外切酶在消除pcr產物造成的核酸污染中的用途。
技術介紹
1、pcr是一種用于在體外快速擴增特定dna片段的技術，廣泛應用于科研、醫療等多個領域，因此，pcr檢測結果的準確性尤為重要。然而pcr擴增產物形成的氣溶膠污染卻經常發生，并造成假陽性的檢測結果。由于樣品溶液經過多次溫度變化，例如變性、退火和延伸，這種快速加熱和冷的過程使得樣品管內的液體發生熱脹冷縮很可能微量的dna液滴被釋放到空氣中，形成氣溶膠。同時由于實驗操作或實驗環境等眾多因素，也會使樣品dna液滴逸出，進而污染操作環境，最終造成假陽性的檢測結果。由于pcr技術是一種高度敏感的技術，即使是微量的氣溶膠污染也會影響檢測結果。pcr產物以氣溶膠或其他途徑造成的環境污染通常不易被察覺并且可持續存在數月之久，對重大疫病的流行監測形成巨大威脅。因此預防和消除pcr產物造成的核酸污染一直是pcr核酸檢測
的難題。
2、現有技術公開了一種防止pcr產物形成氣溶膠污染的方法，采用低熔點瓊脂糖防止擴增產生大量目標基因片段形成氣溶膠污染，但無法消除已形成的氣溶膠污染對pcr檢測準確性的影響。
技術實現思路
1、因此，本專利技術要解決的技術問題在于克服現有技術中的無法消除pcr產物以氣溶膠或者其他途徑造成的核酸污染，導致pcr檢測結果不準確的缺陷，基于t7核酸外切酶提供了一種t7核酸外切酶在消除pcr產物造成的核酸污染中的用途。
2、一方面，本專利技術提供一種t7核酸外切
3、在其中一些實施例中，pcr反應混合液中t7核酸外切酶的終濃度為0.5-1u/μl。
4、另一方面，本專利技術還提供一種消除pcr產物核酸污染的方法，包括如下步驟，將待測樣品、t7核酸外切酶混合得到混合液，將混合液孵育，所述孵育的溫度為16-50℃。
5、在其中一些實施例中，所述混合液還包括引物、預混液和緩沖液。
6、在其中一些實施例中，所述混合液還包括探針。
7、在其中一些實施例中，以20μl體積計，所述混合液中待測樣品的體積量為0.8μl-1.5μl，引物的體積量為0.8μl-2μl，預混液的體積量為8μl-10μl，緩沖液的體積量為0.1μl-0.5μl，探針的體積量為0.1μl-0.5μl。
8、在其中一些實施例中，所述孵育的時間為2min-5min。
9、在其中一些實施例中，所述混合液中t7核酸外切酶的終濃度為0.5u/μl-1u/μl。
10、另一方面，本專利技術還提供一種消除pcr產物核酸污染的試劑盒，所述試劑盒中包括t7核酸外切酶。
11、在其中一些實施例中，所述t7核酸外切酶的終濃度為0.5u/μl-1u/μl。
12、更進一步的，本專利技術還提供一種pcr檢測方法，其特征在于，包括如下步驟，對dna模板溶液的核酸進行pcr擴增，根據所得擴增結果確定所述待測樣本的核酸中含有目標核酸的情況，其中，所述dna模板溶液包括待測樣品和t7核酸外切酶。
13、本專利技術技術方案，具有如下優點：
14、1.本專利技術提供的一種t7核酸外切酶在消除pcr產物造成的核酸污染中的用途。本專利技術利用t7核酸外切酶對dsdna片段的特異性的酶切活性降解pcr反應液中以氣溶膠或其他途徑污染的pcr產物，但不降解質粒或類似細菌基因組之類的環狀dna的特性，從而達到預防消除pcr產物造成的核酸污染，提高pcr反應檢測結果的準確性的目的。
15、2.本專利技術提供的一種消除pcr產物核酸污染的方法，包括如下步驟，將待測樣品、t7核酸外切酶混合得到混合液，將混合液孵育，所述孵育的溫度為16-50℃。本專利技術通過待測樣品和t7核酸外切酶混合，在16-50℃的環境下孵育即可實現氣溶膠污染的消除，提高pcr反應測定結構的準確性。本專利技術操作簡便，對環境要求低，且不影響后續pcr反應效率以及反應產物，利用pcr反應的變性步驟即可實現t7核酸外切酶的滅活，不會影響后續pcr反應，不需增加額外的操作步驟。
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1.T7核酸外切酶在消除PCR產物造成的核酸污染中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，PCR反應混合液中T7核酸外切酶的終濃度為0.5-1U/μL。
3.一種消除PCR產物核酸污染的方法，其特征在于，包括如下步驟，
4.根據權利要求3所述的消除PCR產物核酸污染的方法，其特征在于，所述混合液還包括引物、預混液和緩沖液。
5.根據權利要求4所述的消除PCR產物核酸污染的方法，其特征在于，所述混合液還包括探針。
6.根據權利要求5所述的消除PCR產物核酸污染的方法，其特征在于，以20μL體積計，所述混合液中待測樣品的體積量為0.8μL-1.5μL，引物的體積量為0.8μL-2μL，預混液的體積量為8μL-10μL，緩沖液的體積量為0.1μL-0.5μL，探針的體積量為0.1μL-0.5μL；和/或，
7.根據權利要求5所述的消除PCR產物核酸污染的方法，其特征在于，所述混合液中T7核酸外切酶的終濃度為0.5U/μL-1U/μL。
8.一種消除PCR產物核酸污染的試劑盒，其特征在于，所述
9.根據權利要求8所述的消除PCR中氣溶膠污染的試劑盒，其特征在于，所述T7核酸外切酶的終濃度為0.5U/μL-1U/μL。
10.一種PCR檢測方法，其特征在于，包括如下步驟，
...【技術特征摘要】
1.t7核酸外切酶在消除pcr產物造成的核酸污染中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，pcr反應混合液中t7核酸外切酶的終濃度為0.5-1u/μl。
3.一種消除pcr產物核酸污染的方法，其特征在于，包括如下步驟，
4.根據權利要求3所述的消除pcr產物核酸污染的方法，其特征在于，所述混合液還包括引物、預混液和緩沖液。
5.根據權利要求4所述的消除pcr產物核酸污染的方法，其特征在于，所述混合液還包括探針。
6.根據權利要求5所述的消除pcr產物核酸污染的方法，其特征在于，以20μl體積計，所述混合液中待測樣品的體積量為0.8μl-...
【專利技術屬性】
技術研發人員：樂敏，王浩，
申請(專利權)人：國科大杭州高等研究院，
類型：發明
國別省市：
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