【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及農業生物，更具體的說是涉及一種提高玉米單倍體加倍幼芽成活率的方法。
技術介紹
1、單倍體育種技術在玉米遺傳改良中具有重要意義。dh系培育過程中成功恢復d0代幼苗的生長活力是最關鍵因素。然而單倍體通過化學方法加倍后通常成活率較低，這給單倍體育種工作帶來了很大的挑戰。由于d0代幼苗從一開始就很弱，任何類型的壓力都會導致d0代幼苗成活率降低。目前，常用的單倍體加倍方法主要采用秋水仙素處理等化學加倍方法，但這些方法在提高幼苗成活率方面仍存在一定的局限性。普遍存在以下一點或多點問題：(1)單倍體籽粒在發芽過程中由于受到細菌感染發生霉變或腐爛，導致幼芽死亡；(2)發芽時間控制不佳導致胚芽鞘過長、芽活力降低，在切芽過程中芽折損率大大增加導致幼苗死亡；(3)切芽后直接浸泡在秋水仙素和dmso溶液中，芽傷口未得到緩沖和適應，使其切口處細胞受損嚴重，成活率也大大降低；(4)化學藥劑秋水仙素和dmso配制過程中大多采用自來水，溫度較低影響幼苗成活率；(5)秋水仙素和dmso濃度過高導致細胞生存能力下降，也會影響其他正常生理代謝；(6)加倍后藥劑沖洗不到位藥劑殘留或沖洗水溫過低導致幼芽生長發育受影響；(7)移栽至育苗缽煉苗后再移栽至田間，兩次移栽增加了幼芽和幼苗損傷率，不利于根系生長降低幼苗成活率。基于此，迫切需要一種創新、有效方法來提高單倍體加倍后幼苗的成活率。
2、因此，提供一種提高玉米單倍體加倍幼芽成活率的方法是本領域技術人員亟需解決的問題。
技術實現思路
1、有鑒于此，本
2、為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、一種提高玉米單倍體加倍幼芽成活率的方法，具體步驟如下：
4、(1)將從準單倍體籽粒中篩選出的單倍體籽粒浸泡在濃度為0.3％的高錳酸鉀溶液中15分鐘(可有效殺滅種子表面的病菌和蟲卵)，然后用清水沖洗干凈，再進行發芽；發芽盤和發芽紙及發芽覆蓋毛巾均需要提前用3％次氯酸鈉溶液進行消毒；
5、(2)發芽室溫度控制在25-28℃，濕度控制在70％，發芽前2天光照時間8-10小時/天，光照強度3000lx，溫度控制在28℃；2天后光照時長設置為6-8小時/天，光照強度設置為3000lx，溫度設置為25℃；避免芽生長過快過長錯過幼芽最佳活力期；
6、(3)胚芽鞘長約2cm的幼苗最適合秋水仙素和dmso處理，此時幼芽活力最強；在秋水仙素和dmso處理前，用固定在手術刀刀片架上的無菌刀片在芽組織的尖端約1cm處切割，此時胚芽鞘長度最佳，切割后也不易折斷；
7、(4)將切割后的幼芽放在紗網袋中并掛好標簽，在常溫ddh2o中浸泡2個小時，使切芽的傷口得到一定程度的緩沖和適應，減少因直接接觸秋水仙素和dmso溶液可能帶來的過度刺激和傷害；然后轉移至濃度為0.06％秋水仙素和0.6％dmso的水溶液中進行染色體加倍，時間為7小時；
8、(5)將浸泡后的幼芽在提前制備的常溫ddh2o中沖洗3次去除殘留秋水仙素和dmso溶液，每次沖洗10-15分鐘；沖洗后用2％次氯酸鈉溶液進行沖洗消毒；
9、(6)將沖洗后的幼芽置于稀釋至500-1000倍的生根粉溶液中浸泡2小時，浸泡后常溫ddh2o中沖洗1次去除生根粉溶液，沖洗5分鐘；
10、(7)對沖洗后的準二倍體幼芽直接移栽至田間，無需經過復雜繁瑣的煉苗過程，同時減少移栽次數降低幼芽損傷率和死亡率。
11、經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本專利技術公開提供了一種提高玉米單倍體加倍幼芽成活率的方法，具有以下有益效果：
12、(1)顯著提高單倍體幼苗的成活率；通過發芽前消毒和優化化學藥劑的處理濃度，能夠有效地提高幼芽的成活率。
13、(2)顯著降低殘留秋水仙素和dmso溶液對幼苗的過度加倍傷害進而再次提高幼芽成活率；通過優化單倍體加倍程序，設定加倍后沖洗為3次，且使用常溫ddh2o水沖洗，能夠有效地減少水溫過低和水質不凈對幼芽的傷害，進而提高幼芽的成活率。
14、(3)提高玉米單倍體育種效率；高成活率的幼芽為后續的育種工作提供了更多的選擇和可能性，能夠顯著縮短育種周期，提高育種效率。
15、(4)直接移栽至田間減少二次煉苗移苗過程中的損傷進一步提升幼苗成活率。
16、(5)操作簡便，程序簡便、大大降低成本；本專利技術的化學加倍方法操作相對簡單，不需要復雜的設備和技術，優化了程序降低了生產成本，適合大規模應用于玉米單倍體育種。
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1.一種提高玉米單倍體加倍幼芽成活率的方法，其特征在于，具體步驟如下：
【技術特征摘要】
1.一種提高玉米單倍體加倍幼芽成活率...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周德龍，路明，高婷婷，孟令聰，盧實，周旭東，張志軍，陳鴿，王敏，邢躍先，馬英杰，黃威，劉文國，
申請(專利權)人：吉林省農業科學院中國農業科技東北創新中心，
類型：發明
國別省市：
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