【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于化學合成與分析，具體涉及一種基于l/j-cds的比率熒光探針及其制備方法，并以該熒光探針作為檢測試劑用于鹽酸西替利嗪的可視化檢測和定量檢測。
技術介紹
1、鹽酸西替利嗪(ctz)是一種非甾體抗炎藥，通過與h1受體相互作用，并抑制組胺分子的釋放來緩解過敏反應，也可用于治療慢性蕁麻疹。但是過量的鹽酸西替利嗪會導致人體產生嗜睡、頭痛、認知遲鈍等不良癥狀。此外，通過不同的水循環途徑反復進入環境中的鹽酸西替利嗪還是一種持久性的有機污染物，它會誘導水生生物反應，導致水生生態失衡，包括細胞水平的損傷，氧化應激過程中酶活性改變和免疫毒性增強。
2、目前，已有包括液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳和電化學傳感器等儀器技術用于鹽酸西替利嗪的檢測。然而，這些方法在分析過程中存在預處理時間較長、要求較高的技術技能、設備需專人操作維護、測試成本較高等不足，限制了其在快速痕量檢測方面的應用。因此具有成本效益、快速響應、簡單便攜且能在各種環境下進行原位監測等優勢的熒光探針成為了實現實時樣品分析的候選者。
3、碳點(cds)是平均直徑小于10nm的獨特零維發光納米材料，具有突出的生物相容性、光電特性、輻照穩定性、來源廣泛和低毒性等優點，已廣泛應用于多個領域。雜原子摻雜是調控cds本征性質的有效方法，氮摻雜可以改善cds的光致發光性能，比如提高量子產率、鈍化表面改善自猝滅效應。
4、盡管已經有極少發表的論文，報道了單發射cds熒光納米材料作為探針應用于鹽酸西替利嗪的分析檢測，但是這些極少數論文都是基
技術實現思路
1、本專利技術針對上述現有技術的不足，提供一種基于l/j-cds的比率熒光探針的制備及其對鹽酸西替利嗪檢測的應用。
2、本專利技術作為探針體系核心的快速視覺比率熒光探針，是通過整合設計的l-cds和j-cds來實現選擇性定量檢測鹽酸西替利嗪，重現性好，線性范圍寬，可實現基于紫外燈下的肉眼和智能手機輔助的視覺定性檢測。鹽酸西替利嗪的加入導致l-cds在445nm處的藍色發射熒光猝滅，而j-cds作為參考信號，其在578nm處的橘色熒光發射幾乎沒有變化，從而使探針檢測體系產生從淡紫色到橙色的明顯的比率顏色變化，通過同一激發波長下的兩個發射峰的強度比值進行交叉參照校正，達到減小誤差和提高準確度的效果。該比率熒光探針檢測體系為構建針對微量藥物殘留檢測的可視化和定量體系提供了一種新的方法。
3、本專利技術的目的通過下述技術方案實現：
4、第一方面，本專利技術提供一種基于l/j-cds的比率熒光探針的制備方法，所述方法包括如下步驟：
5、(1)l-cds的合成：將1.50g檸檬酸鈉和0.78g丙烯酰胺氮摻雜劑分散在30ml去離子水中，超聲10min至完全溶解，所得混合物轉移至50ml特氟龍反應釜中，然后在200℃條件下反應3h，自然冷卻至室溫后，將產物透過濾膜以除去較大顆粒，最終將獲得的溶液用去離子水稀釋10～1000倍并保存在4℃的條件下，所得溶液即為氮摻雜的l-cds溶液；
6、(2)j-cds的合成：將0.75g羅丹明b超聲分散在30ml去離子水中，所得溶液轉移到50ml特氟龍反應釜中，160℃下處理2h，自然冷卻至室溫后，將得到的產物以10000rpm離心10min，經過透析純化以及冷凍干燥后，將所得粉末分散到20l去離子水中并保存在4℃的條件下，所得溶液即為j-cds溶液；
7、(3)l/j-cds比率熒光探針的制備：將步驟(1)獲得的l-cds溶液與步驟(2)獲得的j-cds溶液以體積比為2：3～5：3充分混合，即獲得l/j-cds比率熒光探針。
8、步驟(1)中，所述濾膜為0.22μm的水系微孔濾膜。
9、優選地，最終獲得的溶液用去離子水稀釋的倍數為100倍。
10、步驟(2)中，所述的透析純化為經0.22μm水系微孔濾膜過濾和截留分子量1000da的透析袋透析純化。
11、優選地，步驟(3)中，l-cds溶液與j-cds溶液的體積比為1：1。
12、第二方面，本專利技術提供一種基于l/j-cds的比率熒光探針，所述比率熒光探針上述方法制備得到，所述比率熒光探針由發射藍色熒光的l-cds和發射橘色熒光的j-cds的復合體系構成
13、第三方面，本專利技術提供基于l/j-cds的比率熒光探針在制備檢測試劑中的應用，其特征在于，所述檢測試劑用于鹽酸西替利嗪的可視化檢測或定量檢測。
14、本專利技術可視化檢測和定量檢測鹽酸西替利嗪殘留的核心是設計的l/j-cds的比率熒光探針檢測體系。鹽酸西替利嗪引入l/j-cds的比率熒光檢測體系導致l-cds在445nm處的藍色發射熒光猝滅，而j-cds作為參考信號，其在578nm處的橘色熒光發射幾乎沒有變化，從而使探針檢測體系產生從淡紫色到橙色的明顯的比率顏色變化，從而實現了比率熒光探針檢測體系對于鹽酸西替利嗪的可視化檢測，通過比率熒光體系中熒光變化程度來檢測樣品中鹽酸西替利嗪的含量。
15、一種基于l/j-cds比率熒光探針對鹽酸西替利嗪殘留的可視化檢測方法：將所述比率熒光探針取0.6ml作為檢測試劑滴入5ml的塑料離心管(ep管)中，加入1mlpbs緩沖溶液，再加入2.4ml鹽酸西替利嗪待測溶液，在20～65℃的水浴溫度條件下混合孵育0～15min，在紫外燈下可觀察到明顯的熒光顏色變化，實現對鹽酸西替利嗪待測溶液的可視化檢測；
16、所述緩沖溶液濃度為10mm；
17、所述緩沖溶液的ph范圍為3～9，優選為3；
18、優選地，水浴溫度參數為25℃；
19、優選地，孵育時間參數為1min；
20、在紫外光源下利用軟件獲取熒光圖像和rgb值，通過建立r與g的比值與鹽酸西替利嗪濃度的關系圖，輔助可視化檢測。
21、一種基于l/j-cds比率熒光探針對鹽酸西替利嗪殘留的定量檢測的方法，包括：
22、將l/j-cds比率熒光探針取0.6ml滴入5ml的塑料離心管(ep管)中，加入1mlpbs緩沖溶液，再加入2.4ml鹽酸西替利嗪待測溶液，在20～65℃的水浴溫度條件下混合孵育0～15min，用355nm的激發波長記錄溶液在380～680nm范圍內的熒光發射光譜，通過建立熒光發射峰強度比值的變化與鹽酸西替利嗪濃度之間的線性關系，實現對鹽酸西替利嗪待測溶液的定量檢測；
23、所述緩沖溶液濃度為10mm；
24、所述緩沖溶液的ph范圍為3～9，優選為3；
25、優選地，水浴溫度參數為25℃；
26、優選地，孵育時間參數為1min。
27、所述熒光強度比值為(i445/i578)0/(i445/i578)，具體的，(i445/i578)為加入不本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種基于L/J-CDs的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的基于L/J-CDs的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述濾膜為0.22μm的水系微孔濾膜。
3.根據權利要求1所述的基于L/J-CDs的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述稀釋倍數為100倍。
4.根據權利要求1所述的基于L/J-CDs的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述透析純化為經0.22μm微孔濾膜過濾和截留分子量1000Da的透析袋透析純化。
5.根據權利要求1所述的基于L/J-CDs的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(3)中L-CDs溶液與J-CDs溶液的體積比為1：1。
6.一種基于L/J-CDs的比率熒光探針，其特征在于，所述比率熒光探針采用權利要求1-5任一項所述方法制備得到，所述比率熒光探針由發射藍色熒光的L-CDs和發射橘色熒光的J-CDs的復合體系構成。
7.權利要求6所述的基于L/J-CDs的比率熒光探針在制備檢測試劑中
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述應用包括如下步驟：將所述比率熒光探針作為檢測試劑取0.6mL滴入5mL的塑料離心管中，加入1mLPBS緩沖溶液，再加入2.4mL鹽酸西替利嗪待測溶液，在20～65℃的水浴溫度條件下混合孵育0～15min，在紫外燈下可觀察到明顯的熒光顏色變化，實現對鹽酸西替利嗪待測溶液的可視化檢測。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，在紫外光源下利用軟件獲取熒光圖像和RGB值，通過建立R與G的比值與鹽酸西替利嗪濃度的關系圖，輔助可視化檢測。
10.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，將所述比率熒光探針作為檢測試劑取0.6mL滴入5mL的塑料離心管中，加入1mLPBS緩沖溶液，再加入2.4mL鹽酸西替利嗪待測溶液，在20～65℃的水浴溫度條件下混合孵育0～15min，用355nm的激發波長記錄溶液在380～680nm范圍內的熒光發射光譜，通過建立熒光發射峰強度比值的變化與鹽酸西替利嗪濃度之間的關系，實現對鹽酸西替利嗪待測溶液的定量檢測。
...【技術特征摘要】
1.一種基于l/j-cds的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的基于l/j-cds的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述濾膜為0.22μm的水系微孔濾膜。
3.根據權利要求1所述的基于l/j-cds的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述稀釋倍數為100倍。
4.根據權利要求1所述的基于l/j-cds的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述透析純化為經0.22μm微孔濾膜過濾和截留分子量1000da的透析袋透析純化。
5.根據權利要求1所述的基于l/j-cds的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(3)中l-cds溶液與j-cds溶液的體積比為1：1。
6.一種基于l/j-cds的比率熒光探針，其特征在于，所述比率熒光探針采用權利要求1-5任一項所述方法制備得到，所述比率熒光探針由發射藍色熒光的l-cds和發射橘色熒光的j-cds的復合體系構成。
7.權利要求6所述的基于l/j-cds的比率熒光探針在制備檢測試劑中...
【專利技術屬性】
技術研發人員：杜迎翔，黎志翔，杜帥靖，李娟弟，陳晶晶，
申請(專利權)人：中國藥科大學，
類型：發明
國別省市：
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