本公開屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種修飾的雙鏈寡核苷酸及其綴合物和組合物。本公開提供雙鏈寡核苷酸通過對特定位點的核苷酸進行特定修飾，有效增強了其抑制靶基因表達的活性，在體外和體內(nèi)實驗中均能高效抑制靶基因表達，并且出人意料地，本公開對雙鏈寡核苷酸的修飾能夠通用于針對各種不同靶基因設(shè)計的siRNA，均能有效提高siRNA對靶基因的抑制率。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本公開屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種修飾的雙鏈寡核苷酸及其綴合物和組合物。
技術(shù)介紹
1、rna干擾（rnai）指雙鏈rna經(jīng)由蛋白質(zhì)復(fù)合物dicer切割，與risc形成一種復(fù)合物，該復(fù)合物可識別并降解靶基因的mrna，從而使相應(yīng)的蛋白的表達受到抑制的一種細胞生理機制。該機制已被成功用于疾病治療，此種治療手段稱之為rnai療法。rnai療法可以開發(fā)那些曾被認為“不可成藥”的靶點。利用這類技術(shù)開發(fā)用以治療各種人類疾病的rnai藥物，還需要解決許多問題，其中之一就是解決此類藥物固有的代謝問題。盡管通過已有的化學(xué)修飾和遞送方法，解決了部分rnai藥物的代謝問題，且開發(fā)出6款rnai藥物，但本領(lǐng)域仍需要更多的rnai藥劑以滿足更多的臨床需求。
2、開發(fā)包括sirna在內(nèi)的rnai治療劑的最大障礙包括化合物穩(wěn)定性差、向靶細胞的體內(nèi)遞送效率低以及諸如“脫靶”基因沉默和意外的免疫刺激等副作用。為了解決這些障礙，研究已經(jīng)嘗試了各種寡核苷酸化學(xué)修飾。這些修飾可分為三類，即核糖修飾、核苷酸間鍵修飾和核堿基修飾。不同的修飾可以表現(xiàn)出不同程度的核酸酶抗性和與靶mrna的不同雜交特性，也可能會帶來不可預(yù)測的副作用。平衡雙鏈sirna各種修飾的類型、位置和數(shù)量，在不影響其活性的情況下，最大程度提高其核酸酶抵抗性，同時降低毒副作用是sirna修飾研發(fā)的重要方向。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本公開的目的在于提供一種抑制靶基因表達的活性得到增強的雙鏈寡核苷酸。
2、在一方面，本公開提供一種雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和反義鏈各自包含19-23個核苷酸，所述反義鏈與靶基因表達的mrna至少一部分互補，所述正義鏈和反義鏈至少部分反向互補形成雙鏈區(qū)域，其特征在于，所述正義鏈包括核苷酸序列1，所述核苷酸序列1的長度為至少11個核苷酸，所述正義鏈在所述核苷酸序列1的5’端和/或3’端還可以包括另外的核苷酸序列；所述反義鏈包括核苷酸序列2，所述核苷酸序列2的長度為至少16個核苷酸，所述反義鏈在所述核苷酸序列1的5’端和/或3’端還可以包括另外的核苷酸序列，所述核苷酸序列2按照5’端-3’端方向的第2、4、12、14和16位處的核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸。
3、在另一方面，本公開提供一種寡核苷酸綴合物，其包括前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽以及綴合至所述雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的綴合基團，所述綴合基團包括藥學(xué)上可接受的靶向基團和/或遞送輔助基團，所述綴合基團與所述雙鏈寡核苷酸共價或非共價連接。
4、在又一方面，本公開提供一種組合物，其包括前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、和/或前述的寡核苷酸綴合物，以及任選地藥學(xué)上可接受的載體。
5、在又一方面，本公開提供一種細胞，其包含或者生成前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
6、在又一方面，本公開提供一種試劑盒或藥盒，其包括前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、前述的寡核苷酸綴合物、前述的組合物、和/或前述的細胞，所述雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、所述寡核苷酸綴合物、所述組合物和/或所述細胞被包裝在藥盒、容器、包裝物、分配器、預(yù)填充注射器或小瓶中。
7、在又一方面，本公開提供前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、前述的寡核苷酸綴合物、前述的組合物、前述的細胞和/或前述的試劑盒或藥盒在制備治療病毒性疾病、神經(jīng)肌肉疾病、細菌感染、炎癥和免疫性疾病、代謝類疾病、肝臟疾病、腎臟疾病、心血管疾病、眼科疾病、肺部疾病、腫瘤和罕見病的藥物或藥盒中的應(yīng)用。
8、在又一方面，本公開提供前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、前述的寡核苷酸綴合物、前述的組合物、前述的細胞和/或前述的試劑盒或藥盒在制備用于抑制細胞中靶基因表達的試劑、試劑盒、藥物或藥盒中的用途。
9、在又一方面，本公開提供一種抑制細胞中靶基因表達的方法，其包括使前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、前述的寡核苷酸綴合物、前述的組合物、和/或前述的細胞與所述細胞接觸。
10、在又一方面，本公開提供一種治療或預(yù)防個體的疾病或病癥的方法，其中，所述方法包括向所述個體施用有效量的前述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、前述的寡核苷酸綴合物、前述的組合物、和/或前述的細胞，以抑制引起所述個體的疾病的基因的表達。
11、本公開的雙鏈寡核苷酸通過對特定位點的核苷酸進行特定修飾，有效增強了其抑制靶基因表達的活性，在體外和體內(nèi)實驗中均能高效抑制靶基因表達，并且未發(fā)現(xiàn)毒副作用，出人意料地，本公開對雙鏈寡核苷酸的修飾能夠通用于針對各種不同靶基因設(shè)計的sirna，均能有效提高sirna對靶基因的抑制率。
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【技術(shù)保護點】
1.一種雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和反義鏈各自包含19-23個核苷酸，所述反義鏈與靶基因表達的mRNA至少一部分互補，所述正義鏈和反義鏈至少部分反向互補形成雙鏈區(qū)域，其特征在于，所述正義鏈包括核苷酸序列1，所述核苷酸序列1的長度為至少11個核苷酸，所述正義鏈在所述核苷酸序列1的5’端和/或3’端還可以包括另外的核苷酸序列；所述反義鏈包括核苷酸序列2，所述核苷酸序列2的長度為至少16個核苷酸，所述反義鏈在所述核苷酸序列1的5’端和/或3’端還可以包括另外的核苷酸序列，所述核苷酸序列2按照5’端-3’端方向的第2、4、12、14和16位處的核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈與反義鏈基本上反向互補、實質(zhì)上反向互補或完全反向互補。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈包含19、20或21個核苷酸，所述反義鏈包含19、20、21、22或23個核苷酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈包含19個核苷酸，所述反義鏈包含21個核苷酸。</p>5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈中的核苷酸各自獨立地均為修飾的核苷酸，所述修飾的核苷酸選自2′-氟修飾的核苷酸、2′-O-甲基修飾的核苷酸、2′-O-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2′-O-烷基修飾的核苷酸、2′-O-烯丙基修飾的核苷酸、二環(huán)核酸(BNA)、脫氧核糖核苷酸、2′-氨基修飾的核苷酸、無堿基核苷酸、反向無堿基核苷酸和反向脫氧核糖核苷酸中至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈的5’端和/或3’端包含無堿基核苷酸、反向無堿基核苷酸和反向脫氧核糖核苷酸中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈的5’端和/或3’端各自獨立地包含0-3個硫代磷酸酯鍵。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述硫代磷酸酯鍵存在于5’末端起的第1個核苷酸和第2個核苷酸之間、第2個核苷酸和第3個核苷酸之間、第3個核苷酸和第4個核苷酸之間；和/或3’末端起的第1個核苷酸和第2個核苷酸之間、第2個核苷酸和第3個核苷酸之間、第3個核苷酸和第4個核苷酸之間。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈5’末端起的第1個核苷酸和第2個核苷酸之間、第2個核苷酸和第3個核苷酸之間存在2個硫代磷酸酯鍵；
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈在所述核苷酸序列1按照5’端-3’端方向的第5、7和9位處的核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈中的核苷酸除為2’-氟修飾的核苷酸外，其余均為非氟代修飾的核苷酸。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈中的核苷酸除為2’-氟修飾的核苷酸外，其余均為2′-O-甲基修飾的核苷酸。
13.一種寡核苷酸綴合物，所述寡核苷酸綴合物包括權(quán)利要求1-12任一項所述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽以及綴合至所述雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的綴合基團，所述綴合基團包括藥學(xué)上可接受的靶向基團和/或遞送輔助基團，所述綴合基團與所述雙鏈寡核苷酸共價或非共價連接。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的寡核苷酸綴合物，其中，所述綴合基團與所述雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽通過接頭共價或非共價連接。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的寡核苷酸綴合物，其中所述靶向基團和/或遞送輔助基團包括蛋白質(zhì)、碳水化合物或脂質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包括天然蛋白質(zhì)、合成多聚氨基酸和/或抗體；所述碳水化合物包括右旋糖酐、普魯蘭、甲殼素、殼聚糖、菊粉、環(huán)糊精、氨基糖和/或透明質(zhì)酸；所述脂質(zhì)包括脂肪酸、固醇和/或磷脂。
16.一種組合物，其包括權(quán)利要求1-12任一項所述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、和/或權(quán)利要求13-15任一項所述的寡核苷酸綴合物，以及任選地藥學(xué)上可接受的載體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其還包含一種或多種另外的治療組分。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的組合物，其中，所述組合物被配制用于經(jīng)眼的、陰道的、直腸的、鼻內(nèi)的、經(jīng)皮的、皮下給藥、靜脈滴注、動脈內(nèi)的、經(jīng)淋巴的、支氣管內(nèi)的、胸膜內(nèi)的、腹膜內(nèi)、腦脊髓或者肌肉內(nèi)的注射、肺部、鞘內(nèi)的或心室內(nèi)的給予。
19.一種細胞，其包含或者生成權(quán)利要求1-12任一項所述的雙鏈寡核苷酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和反義鏈各自包含19-23個核苷酸，所述反義鏈與靶基因表達的mrna至少一部分互補，所述正義鏈和反義鏈至少部分反向互補形成雙鏈區(qū)域，其特征在于，所述正義鏈包括核苷酸序列1，所述核苷酸序列1的長度為至少11個核苷酸，所述正義鏈在所述核苷酸序列1的5’端和/或3’端還可以包括另外的核苷酸序列；所述反義鏈包括核苷酸序列2，所述核苷酸序列2的長度為至少16個核苷酸，所述反義鏈在所述核苷酸序列1的5’端和/或3’端還可以包括另外的核苷酸序列，所述核苷酸序列2按照5’端-3’端方向的第2、4、12、14和16位處的核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈與反義鏈基本上反向互補、實質(zhì)上反向互補或完全反向互補。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈包含19、20或21個核苷酸，所述反義鏈包含19、20、21、22或23個核苷酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈包含19個核苷酸，所述反義鏈包含21個核苷酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈中的核苷酸各自獨立地均為修飾的核苷酸，所述修飾的核苷酸選自2′-氟修飾的核苷酸、2′-o-甲基修飾的核苷酸、2′-o-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2′-o-烷基修飾的核苷酸、2′-o-烯丙基修飾的核苷酸、二環(huán)核酸(bna)、脫氧核糖核苷酸、2′-氨基修飾的核苷酸、無堿基核苷酸、反向無堿基核苷酸和反向脫氧核糖核苷酸中至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈的5’端和/或3’端包含無堿基核苷酸、反向無堿基核苷酸和反向脫氧核糖核苷酸中的至少一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈的5’端和/或3’端各自獨立地包含0-3個硫代磷酸酯鍵。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述硫代磷酸酯鍵存在于5’末端起的第1個核苷酸和第2個核苷酸之間、第2個核苷酸和第3個核苷酸之間、第3個核苷酸和第4個核苷酸之間；和/或3’末端起的第1個核苷酸和第2個核苷酸之間、第2個核苷酸和第3個核苷酸之間、第3個核苷酸和第4個核苷酸之間。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈5’末端起的第1個核苷酸和第2個核苷酸之間、第2個核苷酸和第3個核苷酸之間存在2個硫代磷酸酯鍵；
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈在所述核苷酸序列1按照5’端-3’端方向的第5、7和9位處的核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的雙鏈寡核苷酸，其中，所述正義鏈和/或反義鏈中的核苷酸除為2’-氟修飾的核苷酸外，其余均為非氟代修飾的核苷酸。
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：高杰，王浩軍，鄭文芝，李嘉怡，
申請(專利權(quán))人：北京安龍生物醫(yī)藥有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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