【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)藥，具體涉及一種針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、腦膠質(zhì)瘤是源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的惡性腫瘤，約占所有中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤的80％。目前，臨床對(duì)于膠質(zhì)瘤的治療原則是通過外科手術(shù)盡可能地切除膠質(zhì)瘤組織后，聯(lián)合替莫唑胺(tmz)進(jìn)行放化療。但由于膠質(zhì)瘤通常向大腦深部以及大腦功能區(qū)域侵襲，手術(shù)可切除范圍有限，并且存在浸潤(rùn)生長(zhǎng)的特性，導(dǎo)致手術(shù)難以完全切除腫瘤細(xì)胞。而由于血腦屏障的存在，很多小分子化療藥物難以到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，目前作為一線用藥的替莫唑胺存在易耐藥的不足。而放射治療存在不耐受性，并且具有短期與長(zhǎng)期的毒性，可能導(dǎo)致放射性腦損傷和聽力損失等副作用。因此，臨床治療方案的局限導(dǎo)致接受治療的膠質(zhì)瘤患者復(fù)發(fā)率極高，即使采取最積極的治療措施，惡性膠質(zhì)瘤患者的中位生存期仍然少于15個(gè)月。而新興免疫腫瘤療法存在費(fèi)用高昂，響應(yīng)率低的局限，導(dǎo)致只有20％的患者能從中受益，最重要的是免疫t淋巴細(xì)胞難以浸潤(rùn)到膠質(zhì)瘤腫瘤微環(huán)境中，使得膠質(zhì)瘤這種“冷腫瘤”對(duì)免疫點(diǎn)檢查抑制劑療法具有天然的低響應(yīng)性。t細(xì)胞免疫反應(yīng)的應(yīng)答與維持需要抗原提呈細(xì)胞與先天固有免疫的激活，通過刺激先天固有免疫系統(tǒng)來增加膠質(zhì)瘤微環(huán)境中細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞的活化、擴(kuò)增與浸潤(rùn)，可能是改善目前腦膠質(zhì)瘤免疫療法的突破口。
2、cgas-sting信號(hào)通路是固有免疫系統(tǒng)的一部分，在感受胞質(zhì)dna和免疫防御方面起著重要的信號(hào)傳遞作用，其激活不僅限于某一種特定的腫瘤類型，而是對(duì)多種腫瘤具有廣譜性的免疫激活作用，并且可以引發(fā)全身性的特異性免疫反
3、本專利技術(shù)探索基于化學(xué)療法、化學(xué)動(dòng)力療法和免疫療法聯(lián)合治療腦膠質(zhì)瘤的新思路，首次將可聯(lián)合化學(xué)動(dòng)力療法與免疫療法的雙重增強(qiáng)劑mno2納米顆粒與鹽酸阿霉素聯(lián)合用于治療腦膠質(zhì)瘤，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，提供了一種極富潛力的臨床治療策略。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于目前臨床治療膠質(zhì)瘤方法的局限以及腦腫瘤遞藥系統(tǒng)的靶向性低，本專利技術(shù)的目的是提供一種針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)。該納米藥物遞送系統(tǒng)具有優(yōu)異的的生物相容性，并且能穿越血腦屏障主動(dòng)靶向于腦膠質(zhì)瘤部位。
2、本專利技術(shù)的另一目的是提供上述細(xì)胞膜仿生共遞送系統(tǒng)的制備方法。
3、本專利技術(shù)的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
4、一種針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，由內(nèi)核和外層組成；內(nèi)核為載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒；外層是維生素d3和中性粒細(xì)胞膜的雜化脂質(zhì)膜；內(nèi)核和外層通過超聲實(shí)現(xiàn)包裹融合，內(nèi)核與外層的重量比例為1:5-10。所述鹽酸阿霉素為小分子拓?fù)洚悩?gòu)酶ⅱ抑制劑。
5、具體地，上述是以聯(lián)合化學(xué)動(dòng)力療法與免疫療法的雙重增強(qiáng)劑mno2納米粒作為載體，搭載傳統(tǒng)化療藥物鹽酸阿霉素得到的載藥納米粒作為內(nèi)核，外層包裹含vd3與中性粒細(xì)胞膜成分的仿生脂質(zhì)膜；所述內(nèi)核載藥納米粒和外層的仿生脂質(zhì)膜通過超聲并共擠出實(shí)現(xiàn)包裹。
6、所述的雙重增強(qiáng)劑mno2納米粒為高錳酸鉀和油酸為原料制備得到的納米粒，該納米粒用于搭載化療藥物鹽酸阿霉素。納米粒外觀似海膽狀，平均粒徑在160nm左右，載藥后粒徑略有增大。
7、mno2納米粒一方面通過耗竭谷胱甘肽與增加腫瘤區(qū)域羥基自由基來增強(qiáng)化學(xué)動(dòng)力療法療效，另一方面通過激活cgas-sting通路參與腫瘤免疫療法。同時(shí)遞送系統(tǒng)包載的鹽酸阿霉素與維生素d3在膠質(zhì)瘤區(qū)域有效釋放，協(xié)同激活并放大cgas-sting通路，最大程度提高療效，降低毒副作用。
8、優(yōu)選地，所述mno2納米粒的制備方法包括以下步驟：將高錳酸鉀溶于超純水中，逐滴滴入油酸，使油酸與高錳酸鉀與摩爾質(zhì)量比為1:5，將溶液在200rpm條件下攪拌至棕黑色，16000r/min離心30min，將棕褐色沉淀分散于水中，得到mno2納米粒。
9、所述的載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒包括以下步驟：將制備的mno2納米粒和鹽酸阿霉素按質(zhì)量比為1:1溶于5ml超純水，室溫下避光在200rpm條件下攪拌2h后，16000r/min離心30min，紅色上清液為游離的未載入的鹽酸阿霉素溶液，棕褐色沉淀為載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒(mno2-dox納米粒)。
10、所述的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)是將含維生素d3脂質(zhì)膜(vd@mno2-dox納米粒)和中性粒細(xì)胞膜的超聲融合。具體包括以下步驟：先將中性粒細(xì)胞膜經(jīng)超聲波細(xì)胞破碎儀冰浴超聲，功率設(shè)置500w，每次超聲10s，重復(fù)5次，功率設(shè)置500w，每次超聲5s，重復(fù)5次，即得納米級(jí)中性粒細(xì)胞膜；然后將含維生素d3脂質(zhì)膜(vd@mno2-dox納米粒)與中性粒細(xì)胞膜混合，冰浴超聲，功率500w，每次超聲10s，重復(fù)5次，超聲過程中含vd3脂質(zhì)膜的磷脂雙分子層與中性粒細(xì)胞膜進(jìn)行融合，超聲后液體通過200nm聚碳酸酯膜擠出，16000r/min離心30min收取沉淀物，即為多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)(ned@mno2-dox)。
11、上述含維生素d3脂質(zhì)膜制備包括以下步驟：將氫化大豆卵磷脂、膽固醇、維生素d3按質(zhì)量比為4:1:1溶于無水乙醇中，水浴超聲使其完全溶解作為油相，含有載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒(mno2-dox)的pbs緩沖液作為水相。采用乙醇注入法將含有磷脂成分的油相緩緩滴入水相中，200rpm攪拌2h后并通過200nm聚碳酸酯膜擠出，得到均勻分散的納米粒為vd@mno2-dox。
12、所述的中性粒細(xì)胞膜可以為現(xiàn)有技術(shù)常規(guī)提取或保存的中性粒細(xì)胞膜或者小鼠中性粒細(xì)胞經(jīng)反復(fù)凍融提取法破膜，離心，再超聲處理得到的均勻的中性粒細(xì)胞膜。
13、上述中性粒細(xì)胞可通過常規(guī)途徑獲得或者具體包括以下步驟：對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射100μl脂多糖(給藥劑量1mg?lps?kg-1)，以激活小鼠體內(nèi)中性本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于，由內(nèi)核和外層組成；內(nèi)核為載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒，外層是含維生素D3和中性粒細(xì)胞膜的仿生脂質(zhì)膜；內(nèi)核和外層通過超聲實(shí)現(xiàn)包裹融合，內(nèi)核與外層的重量比例為1:5-10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于所述的載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒的制備步驟如下：將二氧化錳納米粒和鹽酸阿霉素按質(zhì)量比為1:1溶于5mL超純水，室溫下避光在200rpm條件下攪拌2h后，16000r/min離心30min，獲得棕褐色沉淀為載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于：所述的二氧化錳納米粒為以高錳酸鉀和油酸為原料制備得到的納米粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于：所述二氧化錳納米粒的制備方法包括以下步驟：將高錳酸鉀溶于超純水中，逐滴滴入油酸，使油酸與高錳酸鉀與摩爾質(zhì)量比為1:5，將溶液在200rpm條件下攪拌至棕黑色，16000r/min離心3
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的新型多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于所述的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)的制備方法包括以下步驟：先將中性粒細(xì)胞膜經(jīng)超聲波細(xì)胞破碎儀冰浴超聲，功率設(shè)置500W，每次超聲10s，重復(fù)5次，功率設(shè)置500W，每次超聲5s，重復(fù)5次，即得納米級(jí)中性粒細(xì)胞膜；將含維生素D3脂質(zhì)膜與中性粒細(xì)胞膜混合，冰浴超聲，功率500W，每次超聲10s，重復(fù)5次，超聲后液體通過200nm聚碳酸酯膜擠出，16000r/min離心30min收取沉淀物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的新型多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于所述的含維生素D3脂質(zhì)膜制備包括以下步驟：將氫化大豆卵磷脂、膽固醇、維生素D3按質(zhì)量比為4:1:1溶于無水乙醇中，水浴超聲使其完全溶解作為油相，含有載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒的PBS緩沖液作為水相，采用乙醇注入法將含有磷脂成分的油相緩緩滴入水相中，200rpm攪拌2h后并通過200nm聚碳酸酯膜擠出，得到均勻分散的納米粒。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的新型多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于：所述中性粒細(xì)胞膜的提取具體包括以下步驟：加入1mL?PBS懸浮和分散的中性粒細(xì)胞，并進(jìn)行3次凍融循環(huán)：首先在-80℃下冷凍30min，然后在室溫下再解凍30min，如此重復(fù)三次；收集上述破碎后細(xì)胞膜懸液，置于冰上探頭超聲5次，功率設(shè)置500W，每次超聲5s，重復(fù)3次，使細(xì)胞充分裂解去核，在4℃，1000g條件下離心5min，棄掉沉淀下的細(xì)胞核，收集上清于新的離心管中。在4℃，20000g條件下離心30min，棄去上清，所得沉淀即沉淀即為中性粒細(xì)胞膜。
8.一種權(quán)利要求1所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的新型多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，將MnO2納米粒作為載體，搭載鹽酸阿霉素制備得到載藥納米粒，再以載藥納米粒作為內(nèi)核，通過超聲實(shí)現(xiàn)外層包裹融合含維生素D3和中性粒細(xì)胞膜的仿生脂質(zhì)膜；所述載藥納米粒與仿生脂質(zhì)膜的重量比例為1:5-10。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于，由內(nèi)核和外層組成；內(nèi)核為載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒，外層是含維生素d3和中性粒細(xì)胞膜的仿生脂質(zhì)膜；內(nèi)核和外層通過超聲實(shí)現(xiàn)包裹融合，內(nèi)核與外層的重量比例為1:5-10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于所述的載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒的制備步驟如下：將二氧化錳納米粒和鹽酸阿霉素按質(zhì)量比為1:1溶于5ml超純水，室溫下避光在200rpm條件下攪拌2h后，16000r/min離心30min，獲得棕褐色沉淀為載鹽酸阿霉素的二氧化錳納米粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于：所述的二氧化錳納米粒為以高錳酸鉀和油酸為原料制備得到的納米粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于：所述二氧化錳納米粒的制備方法包括以下步驟：將高錳酸鉀溶于超純水中，逐滴滴入油酸，使油酸與高錳酸鉀與摩爾質(zhì)量比為1:5，將溶液在200rpm條件下攪拌至棕黑色，16000r/min離心30min，將棕褐色沉淀分散于水中，得到二氧化錳納米粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的的針對(duì)腦膠質(zhì)瘤的新型多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)，其特征在于所述的多模態(tài)腦靶向智能納米藥物系統(tǒng)的制備方法包括以下步驟：先將中性粒細(xì)胞膜經(jīng)超聲波細(xì)胞破碎儀冰浴超聲，功率設(shè)置500w，每次超聲10s，重復(fù)5次，功率設(shè)置500w，每次超聲5s，重復(fù)5次，即得納米級(jí)中性粒細(xì)胞膜；將含維生素d3脂質(zhì)膜與中性粒細(xì)胞膜混合，冰浴超聲，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：呂偉，辛洪亮，何煒崇，楊芳，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江陰市人民醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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