【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種基于過程能力評價的水產品組織中地西泮及其代謝物殘留量的檢測方法，屬于分析檢測。
技術介紹
1、地西泮(diazepam，dzp)，是一種具有鎮定、抗驚厥、催眠作用的苯二氮卓類鎮靜劑藥物，又叫安定，漁業生產養殖業中非法用于水產品養殖、捕撈和運輸環節的抗應激藥。地西泮在體內主要代謝為奧沙西泮、替馬西泮、硝西泮、硝甲西泮、去甲地西泮、7-氨基硝西泮、7-氨基甲硝西泮，代謝周期比較長，長時間在體內殘留蓄積容易引起神經系統危害對人體健康及生態環境產生一定的威脅。地西泮被列為禁用獸藥，規定地西泮不得在動物性食品中檢出。地西泮及其代謝物的殘留問題受到了廣泛關注，亟待研究解決。
2、目前地西泮的檢測方法主要為液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜串聯質譜法、氣相色譜串聯質譜法、分光光度法、分子印跡法、薄層色譜法和免疫層析法等。目前針對地西泮類鎮靜劑主要研究報道前處理過程較繁瑣，檢測時間較長，且主要為地西泮原藥的檢測，關于其代謝物同時檢測的報道較少，且對水產品主要組織中原藥及其代謝產物的檢測關注不足，影響水產養殖業中地西泮及代謝產物的污染溯源和監管生產，亟需建立相關可靠的檢測方法。
技術實現思路
1、專利技術目的：本專利技術目的是提供一種基于過程能力評價的水產品組織中地西泮及其代謝物殘留量的檢測方法。
2、技術方案：本專利技術的所述一種基于過程能力評價的水產品組織中地西泮及其代謝物殘留量的檢測方法，包括以下步驟：
3、(1)樣品前處理：以超聲萃取方式提
4、(2)利用液相色譜串聯質譜法進行檢測；
5、(3)利用內標法或外標法進行定量。
6、進一步地，水產品組織為水產品的肌肉、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、膽囊、生殖腺、血漿、腸或鰓中一種或幾種。
7、進一步地，地西代謝物為替馬西泮、硝西泮、去甲西泮、7-氨基甲硝西泮、7-氨基硝西泮、奧沙西泮、硝甲西泮中的一種或幾種。
8、進一步地，步驟(1)中，樣品前處理包括以下步驟：
9、(a1)將水產品組織加入乙酸乙酯中，渦旋，超聲萃取，離心，收集上清液；
10、(a2)將步驟(a1)中離心后的沉淀再加入乙酸乙酯中，重復步驟(a1)，收集上清液，與步驟(a1)收集的上清液合并；
11、(a3)用氮氣將上清液吹至近干，用甲醇溶液復溶，渦旋，超聲處理，加入凈化材料進行分散固相萃取，離心，上清液中加入正己烷渦旋，冷凍，離心，取下層溶液過濾；
12、或者，
13、(b1)將水產品組織加入混合標準內標溶液，渦旋，靜置，加入乙酸乙酯中，渦旋，超聲提取，離心，收集上清液；
14、(b2)將步驟(b1)中離心后的沉淀再加入乙酸乙酯中，渦旋，超聲萃取，離心，收集上清液，與步驟(b1)收集的上清液合并；
15、(b3)用氮氣將上清液吹至近干，用甲醇溶液復溶，渦旋，超聲處理，加入凈化材料進行分散固相萃取，離心，上清液中加入正己烷渦旋，冷凍，離心，取下層溶液過濾。
16、更進一步地，甲醇溶液的體積濃度為10％。如果不是此濃度在進行分析檢測時保留時間會漂移，發生溶劑效應。
17、更進一步地，凈化材料為混合凈化材料，其中nh2基spe散裝吸附劑：纖維素粉質量比為1～2：1～2.
18、更進一步地，水產品組織與凈化材料的質量比為2000：5～30.
19、更進一步地，超聲萃取的時間為10min以上。
20、更進一步地，冷凍的溫度為低于-18℃，冷凍的時間為20min以上。
21、進一步地，步驟(2)中，液相色譜分析的條件如下：色譜柱為kinetex?sb-c18(50mm×2.1mm，1.7μm)色譜柱；流動相a為5mmol/l甲酸銨水溶液，流動相b為甲醇溶液；梯度洗脫程序為：0～1min，10％?b，1～2min，10％→50％?b，2～6min，50％→95％b，8.0～8.1min，95％→10％?b；8.1～10min，10％?b；流動相的流速為0.3ml/min；柱溫為40℃；進樣體積為3μl。
22、進一步地，步驟(2)中，質譜分析的條件如下：掃描模式：esi+；監測方式：mrm；離子源溫度：550℃；噴霧電壓：5500v；碰撞氣：n2；碰撞氣壓力：379kpa；氣簾氣壓力：241kpa；輔助氣壓力：414kpa。
23、進一步地，其余質譜條件見下表：
24、
25、
26、注：*定量離子。
27、進一步地，步驟(3)中，利用內標法進行定量使用的內標物為地西泮-d5、奧沙西泮-d5、替馬西泮-d5、硝西泮-d5和/或7-氨基硝西泮-d5。
28、進一步地，步驟(3)中，利用外標法進行定量使用的外標物為地西泮、奧沙西泮、替馬西泮、硝西泮、去甲西泮、硝甲西泮、7-氨基硝西泮和/或7-氨基甲硝西泮。
29、進一步地，步驟(3)中，利用外標法進行定量時，采用響應曲面法進行優化。
30、一種基于過程能力評價本專利技術所述檢測方法的方法，利用過程能力評價法對權利要求1所述檢測方法的實用性進行評價。
31、進一步地，方法過程能力評價包括如下步驟：
32、以8種目標化合物的回收率為過程能力評價對象，以各目標化合物回收率60％～120％的正確度要求為方法預期用途要求，以480％～960％為方法整體預期用途要求；以回收率100％為各目標化合物方法期望目標，以800％為方法整體期望目標。以按照公式計算采用過程能力指數評價方法等級、評價方法的各目標化合物和整體檢測能力水平，以確定檢測方法過程是否能夠滿足預期的檢測用途要求。
33、更進一步地，8種目標化合物為地西泮、奧沙西泮、替馬西泮、硝西泮、去甲西泮、硝甲西泮、7-氨基硝西泮和7-氨基甲硝西泮。
34、本專利技術基于過程能力評價將地西泮及其代謝物殘留量的檢測方法作為一種特殊的產品，對多元質量特性參數采用響應曲面法進行設計優化，以超聲萃取方式提取水產品心臟、肝臟、脾臟、腎臟、膽囊、生殖腺、可食肌肉、血漿、腸、鰓組織中地西泮及其代謝物，分散固相萃取為主要凈化手段，通過優化前處理過程中提取和凈化方法、質譜及色譜檢測條件，消除基質效應影響，提高檢測效率和結果的準確性，利用液相色譜串聯質譜法結合外標法或內標法建立水產品主要組織中地西泮及代謝產物簡便快捷、高效靈敏同時檢測的方法，并采用過程能力評價法對方法的各目標化合物和整體檢測能力的實用性進行評價，為水產養殖業相關監管部門提供理論依據及技術支撐，為相關標準完善提供數據參考。
35、有益效果：與現有技術相比，本專利技術具有如下顯著優點：
36、本專利技術以水產品的心臟、肝臟、脾臟、腎臟、膽囊、生殖腺、可食肌肉、血漿、腸、鰓10種組織為檢測對象，系統性地研究了不同本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種基于過程能力評價的水產品組織中地西泮及其代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，水產品組織為水產品的肌肉、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、膽囊、生殖腺、血漿、腸或鰓中一種或幾種。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，地西代謝物為替馬西泮、硝西泮去甲西泮、7-氨基甲硝西泮、7-氨基硝西泮，奧沙西泮、硝甲西泮中的一種或幾種。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，樣品前處理包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，凈化材料為混合凈化材料，其中，NH2基SPE散裝吸附劑：纖維素粉質量比為1～2：1～2，水產品組織與凈化材料的質量比為2000：5～30，超聲萃取的時間為10min以上，冷凍的溫度為低于-18℃，冷凍的時間為20min以上。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，液相色譜分析的條件如下：色譜柱為Kinetex?SB-C18(50mm×2.1mm，1.7μm)色譜柱；流動相A為5mmol
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，質譜分析的條件如下：掃描模式：ESI+；監測方式：MRM；離子源溫度：550℃；噴霧電壓：5500V；碰撞氣：N2；碰撞氣壓力：379kPa；氣簾氣壓力：241kPa；輔助氣壓力：414kPa。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，利用內標法進行定量使用的內標物為地西泮-D5、奧沙西泮-D5、替馬西泮-D5、硝西泮-D5和/或7-氨基硝西泮-D5，利用外標法進行定量使用的外標物為地西泮、奧沙西泮、替馬西泮、硝西泮、去甲西泮、硝甲西泮、7-氨基硝西泮和/或7-氨基甲硝西泮。
9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，利用外標法進行定量時，采用響應曲面法進行優化。
10.一種基于過程能力評價權利要求1所述檢測方法的方法，其特征在于，利用過程能力評價法對權利要求1所述檢測方法的實用性進行評價。
...【技術特征摘要】
1.一種基于過程能力評價的水產品組織中地西泮及其代謝物殘留量的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，水產品組織為水產品的肌肉、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、膽囊、生殖腺、血漿、腸或鰓中一種或幾種。
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，地西代謝物為替馬西泮、硝西泮去甲西泮、7-氨基甲硝西泮、7-氨基硝西泮，奧沙西泮、硝甲西泮中的一種或幾種。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，樣品前處理包括以下步驟：
5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，凈化材料為混合凈化材料，其中，nh2基spe散裝吸附劑：纖維素粉質量比為1～2：1～2，水產品組織與凈化材料的質量比為2000：5～30，超聲萃取的時間為10min以上，冷凍的溫度為低于-18℃，冷凍的時間為20min以上。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，液相色譜分析的條件如下：色譜柱為kinetex?sb-c18(50mm×2.1mm，1.7μm)色譜柱；流動相a為5mmol/l甲酸銨水溶液，流動相b為甲醇溶液；梯度洗脫程序為：0～1min...
【專利技術屬性】
技術研發人員：范宏，張惠峰，孟繁磊，譚莉，段丹丹，張慧，郝麗珊，宋志峰，
申請(專利權)人：吉林省農業科學院中國農業科技東北創新中心，
類型：發明
國別省市：
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