【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法及應用，屬于綿羊snp分子標記檢測與應用領域。
技術介紹
1、綿羊奶乳蛋白率性狀的優化有助于提高母羊的乳成分，優質的乳汁富含免疫球蛋白和其他營養物質，有助于增強羔羊的免疫力，減少疾病的發生。同時，充足的營養供應也有助于羔羊更好地適應外界環境，從而提高其成活率。此外，乳蛋白率性狀的優化通常與乳腺發育和泌乳性能的改善密切相關。因此，優化乳蛋白率性狀有助于母羊分泌更多的乳汁，滿足羔羊的生長需求。
2、通過遺傳改良手段，如選擇具有優良乳蛋白率性狀的種羊進行繁殖，可以逐步優化綿羊奶的乳蛋白率性狀，提高母羊的泌乳量和乳成分。乳蛋白率性狀作為重要的經濟性狀，在綿羊等家畜中受到廣泛的遺傳研究。例如，β-乳球蛋白（blg）基因、α-乳白蛋白（α-la）基因和酪蛋白（csn）基因等均曾被報道可能調控綿羊乳蛋白率等性狀。與此同時，這些基因的表達同樣也受到多種調控機制的調節，包括激素調控和轉錄因子調控等。
3、綿羊乳蛋白率性狀如同其他經濟性狀一樣，受多個微效多基因調控，難以確定主效基因；但通過鑒定與乳蛋白率性狀緊密連鎖的分子標記，可以實現分子標記輔助選擇，提高育種效率。本專利則公開了綿羊chr1:?g.?61542435位點g>a變異的一種kasp?快速檢測方法及其在綿羊奶乳蛋白率性狀中的分子標記輔助選擇育種應用手段。
技術實現思路
1、本專利技術公開了一種利用?kasp?
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案。
3、一種利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法及應用，其特征在于以綿羊基因組dna為模板，通過特異性kasp引物擴增包含chr1:?g.61542435的g>a變異位點的部分片段，然后鑒定chr1:?g.?61542435的g>a變異位點基因型，其中chr1:?g.?61542435位點的綿羊參考基因組版本為ars-ui_ramb_v3.0。
4、其中所述的特異性kasp引物，其特征在于位點g分型引物fam、位點a分型引物vic序列和通用引物序列如下所示：
5、位點g分型引物fam:
6、5’-gaaggtgaccaagttcatgctaggaattagaactgggagaagagc-3’:
7、位點a分型引物vic:
8、5’-gaaggtcggagtcaacggattaggaattagaactgggagaagagt-3’;
9、通用引物：
10、5’-?tcaggacttccctttctacattcg-3’。
11、反應程序為：94℃預變性15?min；94℃變性20?s，61℃退火1?min共10個循環，每個循環后退火溫度降低0.6℃；94℃變性20?s，55℃退火1?min，共26個循環。
12、所述一種利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法及應用的基因型判定特征在于：根據與kasp引物帶有的接頭序列匹配的不同類型熒光的強度對chr1:?g.?61542435位點的gg、ga、aa三種基因型進行分型。
13、本專利技術進一步公開了利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法在綿羊分子標記輔助選擇育種中的應用，所述chr1:?g.?61542435位點的參考基因組版本為ars-ui_ramb_v3.0。主要是在綿羊奶乳蛋白率性狀分子標記輔助選擇育種中的應用。實驗結果顯示：定位于綿羊參考序列ars-ui_ramb_v3.0，chr1:?g.?61542435位點g>a變異位點的gg基因型可以作為提高綿羊奶乳蛋白率性狀的分子標記。
14、本專利技術公開的利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法及應用與現有技術相比所具有的積極效果在于：
15、（1）通過kasp方法檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性突變，具有更為高效的檢測準確性，位點檢測準確性>99.8%；
16、（2）通過kasp方法檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性突變，具有更低的成本，僅需引物合成費用，無需高昂的位點標記探針費用，且對dna樣本量要求較低。
17、（3）通過kasp方法檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性突變，具有較強的檢測靈活型，可與多個其他突變位點共同檢測，能滿足低、中、高通量個體檢測需求。
18、（4）首次公開了綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性突變與綿羊奶乳蛋白率性狀顯著相關，并指出該位點可用于綿羊奶乳蛋白率性狀分子標記輔助選擇育種中的應用。
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1.一種利用?KASP?快速檢測綿羊Chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法，其特征在于：包括以下步驟：
2.?權利要求1所述一種利用?KASP?快速檢測綿羊Chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法，其特征在于：所述基因型的鑒定具體包括以下步驟:根據與KASP引物帶有的接頭序列匹配的不同類型熒光的強度對Chr1:?g.?61542435位點的GG、GA、AA三種基因型進行分型。
3.?權利要求1所述的利用?KASP?快速檢測綿羊Chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法在綿羊分子標記輔助選擇育種中的應用，所述的應用是指在綿羊奶乳蛋白率性狀的分子標記輔助選擇育種。
4.?權利要求3所述的應用，其特征在于：所述定位于綿羊參考序列ARS-UI_Ramb_v3.0，Chr1:?g.?61542435位點G>A變異位點的GG基因型作為提高綿羊奶乳蛋白率性狀的分子標記。
【技術特征摘要】
1.一種利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法，其特征在于：包括以下步驟：
2.?權利要求1所述一種利用?kasp?快速檢測綿羊chr1:?g.?61542435位點單核苷酸多態性的方法，其特征在于：所述基因型的鑒定具體包括以下步驟:根據與kasp引物帶有的接頭序列匹配的不同類型熒光的強度對chr1:?g.?61542435位點的gg、ga、aa三種基因型進行分型。
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭曉飛，鐘榮珍，房義，張效生，張金龍，郭妍巖，張羽欣，
申請(專利權)人：中國科學院東北地理與農業生態研究所，
類型：發明
國別省市：
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