【技術實現步驟摘要】
本揭示關于一種經工程改造之外泌體組合物及其用途。
技術介紹
1、外泌體為在大部分真核細胞之內體隔室中產生的膜結合之細胞外囊泡(ev)。外泌體一般具有約40nm至160nm(平均約100nm)直徑之尺寸范圍且來源于內體。其表面由來自供體細胞之細胞膜的脂質雙層組成，且其含有來自產生外泌體之細胞的細胞溶質，且在表面上展現來自親本細胞之膜蛋白。最初認為外泌體為用于移除不需要的蛋白質之機制。
2、仍需要擴展外泌體之應用。
技術實現思路
1、本揭示提供一種新穎外泌體組合物，其包含經工程改造之真菌(尤其酵母)之富集的外泌體群體。
2、因此，本揭示提供一種外泌體組合物，其包含富集的真菌外泌體群體或衍生自富集的外泌體群體之混合物，該等富集的真菌外泌體含有靈芝(ganoderma)免疫調節蛋白、其重組體或其片段。
3、在一些實施例中，靈芝免疫調節蛋白衍生自赤靈芝(ganoderma?lucidum)、松杉靈芝(ganoderma?tsugae)、小孢靈芝(ganoderma?microsporum)或紫靈芝(ganodermasinensis)。在一些其他實施例中，靈芝免疫調節蛋白為衍生自赤靈芝之lz-8、衍生自松杉靈芝之fip-gts、衍生自小孢靈芝之gmi或衍生自紫靈芝之fip-gja。
4、在一些實施例中，靈芝免疫調節蛋白包含seq?id?no:3之氨基酸序列。在一些實施例中，靈芝免疫調節蛋白之重組體包含seq?id?no:4之氨基酸序列。在一些實
5、在一些實施例中，真菌屬于酵母菌科(saccharomycetaceae)或裂殖酵母菌科(schizosaccharomycetaceae)。酵母菌科之實例包括(但不限于)克魯維酵母(kluyveromyces)、塞伯林德納氏酵母(cyberlindnera)、德巴利酵母(debaryomyces)、畢赤酵母(pichia)、酵母菌(saccharomyces)、哈薩克斯坦斯坦酵母(kazachstania)。在另一態樣中，裂殖酵母菌科之實例包括(但不限于)裂殖酵母菌(schizosaccharomyces)。酵母之實例包括(但不限于)馬克斯克魯維酵母(kluyveromyces?marxianus)(亦稱為脆弱酵母菌(saccharomyces?fragilis)、脆弱克魯維酵母(kluyveromyces?fragilis))、乳酸克魯維酵母(kluyveromyces?lactis)(亦稱為乳酸酵母菌(saccharomyces?lactis))、杰丁塞伯林德納氏酵母(cyberlindnera?jadinii)(亦稱為高蛋白假絲酵母(candida?utilis)、杰丁畢赤酵母(pichia?jadinii))、漢遜德巴利酵母(debaryomyces?hansenii)、巴斯德畢赤酵母(pichia?pastoris)、酦酵畢赤酵母(pichia?fermentans)、貝酵母菌(saccharomycesbayanus)、鮑氏酵母菌(saccharomyces?boulardii)、釀酒酵母菌(saccharomycescerevisiae)、弗羅棱酵母菌(saccharomyces?florentinus)、單孢哈薩克斯坦斯坦酵母(kazachstania?unispora)(亦稱為單孢酵母菌(saccharomyces?unisporus))、圖列茨哈薩克斯坦斯坦酵母(kazachstania?turicensis)(亦稱為弗羅棱酵母菌)或粟酒裂殖酵母菌(schizosaccharomyces?pombe)。特定言之，在本揭示之一些實施例中，酵母屬于乳酸克魯維酵母(亦稱為乳酸酵母菌)、巴斯德畢赤酵母、釀酒酵母菌、多形漢遜酵母(hansenulapolymorpha)、粟酒裂殖酵母菌(schizosaccharomyces?pombe)、解脂耶氏酵母(yarrowialipolytica)或黑曲菌(aspergillus?niger)。
6、在本揭示之一些實施例中，外泌體組合物中富集的外泌體之濃度大于約1×1010個外泌體/毫升、約5×1010個外泌體/毫升、約1×1011個外泌體/毫升、約2×1011個外泌體/毫升、約4×1011個外泌體/毫升、約6×1011個外泌體/毫升、約8×1011個外泌體/毫升、約1×1012個外泌體/毫升、約2×1012個外泌體/毫升、約3×1012個外泌體/毫升、約4×1012個外泌體/毫升、約5×1012個外泌體/毫升、約6×1012個外泌體/毫升、約7×1012個外泌體/毫升、約8×1012個外泌體/毫升、約9×1012個外泌體/毫升或約1×1013個外泌體/毫升。在一些其他實施例中，外泌體組合物中富集的外泌體之濃度為約1×1012個外泌體/毫升至2×1012個外泌體/毫升。
7、在本揭示之一些實施例中，外泌體組合物包含具有約150nm至約250nm、約155nm至約245nm、約160nm至約240nm、約165nm至約235nm、約170nm至約230nm、約175nm至約225nm、約180nm至約220nm、約185nm至約215nm、約190nm至約210nm、約195nm至約205nm或約200nm之平均粒徑的富集的外泌體群體。
8、在本揭示之一些實施例中，其中真菌經編碼靈芝免疫調節蛋白、其重組體或其片段之核苷酸工程改造。
9、在本揭示之一些實施例中，用條件培養基培養真菌。條件培養基之實例包括(但不限于)bmgy培養基。
10、在本揭示之一些實施例中，外泌體組合物藉由過濾獲得。過濾之實例包括(但不限于)微過濾、超過濾及奈米過濾。特定言之，外泌體組合物藉由進行至少一個切向流過濾(tff)之步驟獲得。tff之實例包括(但不限于)使用具有約0.8μm至約8μm之孔徑的tff膜進行至少一個tff之步驟，或使用具有約10kda至約100kda之截留分子量的tff膜進行至少一個tff之步驟。在本揭示之一些實施例中，外泌體組合物藉由使用具有約0.22μm至約0.45μm之孔徑的膜進行深度過濾而獲得。在一些其他實施例中，外泌體組合物藉由以下獲得：使用具有約0.8μm至約8μm之孔徑的tff膜進行tff；使用具有約10kda至約100kda之截留分子量的tff膜進行tff，及使用具有約0.22μm至約0.45μm之孔徑的膜進行深度過濾。
11、在另一態樣中，本揭示提供一種用于產生如本文所揭示之外泌體組合物的方法，其包含培養真菌及獲得富集的外泌體群體。
12、在另一態樣中，本揭示提供一種用于治療及/或預防有需要之個體中之氧化應激相關疾病的方法，其包含向個體投與如本文所揭示之外泌體組合物。
13、在另一態樣中，本揭示提供一種用于治療及/或預防有需要之個體中之炎癥的方法，其包含向個體投與如本文所揭示本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種外泌體組合物，其包含富集的真菌外泌體群體或衍生自該富集的外泌體群體之混合物，該等富集的真菌外泌體含有靈芝(Ganoderma)免疫調節蛋白、其重組體或其片段。
2.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白為衍生自赤靈芝(Ganoderma?lucidum)之LZ-8、衍生自松杉靈芝(Ganoderma?tsugae)之FIP-gts、衍生自小孢靈芝(Ganoderma?microsporum)之GMI或衍生自紫靈芝(Ganoderma?sinensis)之FIP-gja。
3.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白包含SEQ?ID?NO:3之氨基酸序列。
4.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白之重組體包含SEQ?IDNO:4之氨基酸序列。
5.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白之片段包含選自由SEQID?NO:1至2組成之群的氨基酸序列。
6.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該真菌屬于馬克斯克魯維酵母(Kluyveromyces?marxi
7.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物中該等富集的外泌體之濃度大于約1×1010個外泌體/毫升。
8.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物包含具有約150nm至約250nm之平均粒徑的富集的外泌體群體。
9.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該真菌經編碼該靈芝免疫調節蛋白、其重組體或其片段之核苷酸工程改造。
10.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物藉由微過濾、超過濾及奈米過濾獲得。
11.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物藉由進行至少一個切向流過濾(TFF)步驟獲得。
12.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物藉由使用具有約0.8μm至約8μm之孔徑的TFF膜進行至少一個TFF步驟而獲得。
13.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物藉由使用具有約10kDa至約100kDa之截留分子量的TFF膜進行至少一個TFF步驟而獲得。
14.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物藉由使用具有約0.22μm至約0.45μm之孔徑的膜進行深度過濾而獲得。
15.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該外泌體組合物藉由以下獲得：使用具有約0.8μm至約8μm之孔徑的TFF膜進行TFF；使用具有約10kDa至約100kDa之截留分子量的TFF膜進行TFF，及使用具有約0.22μm至約0.45μm之孔徑的膜進行深度過濾。
16.一種如權利要求1所述的外泌體組合物的用途，其用于制造用于治療及/或預防有需要之個體中之氧化應激相關疾病的藥物。
17.一種如權利要求1所述的外泌體組合物的用途，其用于制造用于治療及/或預防有需要之個體中之炎癥的藥物。
18.一種如權利要求1所述的外泌體組合物的用途，其用于制造用于治療及/或預防有需要之個體中之神經病癥的藥物...
【技術特征摘要】
1.一種外泌體組合物，其包含富集的真菌外泌體群體或衍生自該富集的外泌體群體之混合物，該等富集的真菌外泌體含有靈芝(ganoderma)免疫調節蛋白、其重組體或其片段。
2.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白為衍生自赤靈芝(ganoderma?lucidum)之lz-8、衍生自松杉靈芝(ganoderma?tsugae)之fip-gts、衍生自小孢靈芝(ganoderma?microsporum)之gmi或衍生自紫靈芝(ganoderma?sinensis)之fip-gja。
3.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白包含seq?id?no:3之氨基酸序列。
4.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白之重組體包含seq?idno:4之氨基酸序列。
5.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該靈芝免疫調節蛋白之片段包含選自由seqid?no:1至2組成之群的氨基酸序列。
6.如權利要求1所述的外泌體組合物，其中該真菌屬于馬克斯克魯維酵母(kluyveromyces?marxianus)(亦稱為脆弱酵母菌(saccharomyces?fragilis)、脆弱克魯維酵母(kluyveromyces?fragilis))、乳酸克魯維酵母(kluyveromyceslactis)(亦稱為乳酸酵母菌(saccharomyceslactis))、杰丁塞伯林德納氏酵母(cyberlindnera?jadinii)(亦稱為高蛋白假絲酵母(candida?utilis)、杰丁畢赤酵母(pichia?jadinii))、漢遜德巴利酵母(debaryomyces?hansenii)、巴斯德畢赤酵母(pichia?pastoris)、酦酵畢赤酵母(pichiafermentans)、貝酵母菌(saccharomyces?bayanus)、鮑氏酵母菌(saccharomycesboulardii)、釀酒酵母菌(saccharomyces?cerevisiae)、弗羅棱酵母菌(saccharomycesflorentinus)、單孢哈薩克斯坦斯坦酵母(kazachstania?unispora)(亦稱為單孢酵母菌(saccharomyces?unisporus))、圖列茨哈薩克斯坦斯坦酵母(kazachstaniaturicensis)(亦稱為弗羅棱酵母菌)、多形漢遜酵母(hansenulapolymorpha)、粟酒裂殖酵母菌(schizosaccharomyces?pombe)、解脂耶氏酵母(yarrowialipolytica)或黑曲菌(aspergillus...
【專利技術屬性】
技術研發人員：許瑞祥，傅煦媛，
申請(專利權)人：蘑法生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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