【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種sers檢測系統及其制備方法和應用，該sers檢測系統可在富血小板血漿中快速檢測巨噬細胞遷移因子，屬于新型納米功能材料制備及sers。
技術介紹
1、骨性關節炎(oa)是一種常見的慢性退行性疾病，通常影響膝關節，導致關節疼痛、僵硬和腫脹。它已成為老年人中最常見的關節疾病之一，并可導致殘疾。最近，生物療法已成為治療老年人肌肉骨骼疾病的一種有前途的方法，富血小板血漿(prp)技術成為促進組織修復和再生的一種重要形式的自生療法。然而，prp的不當制備可能會導致濃縮紅細胞的提取，這可能導致炎癥因子巨噬細胞移動抑制因子(mif)的大量釋放，并加劇疼痛和骨關節炎癥狀。雖然目前已經開發了紅細胞過濾設備，但它們價格昂貴，且不能一次完全過濾血液。此外，傳統技術如聚合酶鏈式反應(pcr)、酶聯免疫吸附試驗(elisa)，則成本較高且分析時間較長，可能會影響prp的療效。
2、表面增強拉曼散射光譜(surface-enhanced?raman?scattering，sers)是一種在分子水平上表征吸附在粗糙貴金屬表面物質的分析技術，主要是納米尺度的粗糙表面所具有的異常光學增強效果，具有靈敏度高、檢測時間短、水干擾小、可直接原位分析、檢測范圍廣等優點，且不需要復雜的前處理過程，在生物醫學、食品安全及環境分析等許多領域引起了學者們的廣泛興趣。近年來，隨著光纖傳感技術的發展和raman光譜儀的小型化，使利用sers技術進行現場快速檢測成為可能，基于sers技術對極小體積樣品檢測有著高靈敏度以及較好的信號光穩定性等優點，使其逐漸
技術實現思路
1、本專利技術的主要目的是：克服現有技術存在的問題，提供一種sers檢測系統的制備方法，所得sers檢測系統能快速、準確地檢測超小體積prp樣品中mif的含量，有助于減輕prp的副作用，提高prp的質量和臨床療效。同時，還提供該sers檢測系統，以及相關的應用。
2、本專利技術解決其技術問題的技術方案如下：
3、一種sers檢測系統的制備方法，包括以下步驟：
4、第一步、將硅片進行預處理后，在含有pda的mif抗體溶液培養，制得pda芯片。
5、第二步、將haucl4溶液分批加入到nabh4溶液中并攪拌，制得金納米顆粒aunps懸液。
6、第三步、將抗壞血酸溶液、硝酸銀溶液、tris-hcl緩沖液、4-氨基苯硫醇溶液、牛血清白蛋白溶液混合后，加入金納米顆粒aunps懸液，反應后制得以au為核且以ag為殼的au-ag納米粒子。
7、第四步、將mif抗體溶液與pda溶液混合后與au-ag納米粒子反應，制得具有pda保護殼且連接有抗體的核殼納米粒子，此即sers傳感器；pda芯片與sers傳感器共同構成sers檢測系統。
8、該制備方法制得的sers檢測系統中，pda芯片可從prp樣品中捕獲mif，sers傳感器可作為探針進行檢測，利用拉曼報告分子的強sers信號對prp中的mif進行定性和定量分析。
9、本專利技術進一步完善的技術方案如下：
10、優選地，第一步的具體過程如下：
11、將硅片在堿性槽中浸泡2～3小時，用去離子水洗凈，然后用食人魚溶液浸泡2～3小時，并用去離子水洗滌；將所得硅片在含有pda的mif抗體溶液中培養1～2小時，制得pda芯片；將pda芯片用去離子水清洗，并在0℃～4℃下儲存備用。
12、更優選地，堿性槽的內含溶液為食人魚溶液；食人魚溶液由98％的濃硫酸和30％的過氧化氫溶液按照體積比3±0.5：1的比例混合而成；含有pda的mif抗體溶液中pda濃度為33±5mm。
13、采用以上優選方案后，可更好地制得pda芯片。其中，采用自組裝多巴胺層進行包裹可提高捕獲抗體的密度并保持其生物活性。
14、優選地，第二步的具體過程如下：
15、將haucl4溶液分批加入到持續攪拌的冰冷的nabh4溶液中進行反應；反應后，將混合物煮沸1～2小時以分解過量的nabh4；將最終體積調節至上述haucl4溶液體積的5±0.5倍；制得金納米顆粒aunps懸液。
16、更優選地，haucl4溶液的濃度為5±0.5×10-3m，nabh4溶液的濃度為2±0.5×10-3m，haucl4溶液與nabh4溶液的體積比為1：3±0.5。
17、采用以上優選方案后，可進一步優化第二步的具體過程。
18、優選地，第三步的具體過程如下：
19、采用抗壞血酸溶液、硝酸銀溶液、ph8.0?tris-hcl緩沖液、4-氨基苯硫醇和牛血清白蛋白溶液混合均勻后，加入第二步制得的金納米顆粒aunps懸液；反應30～60min后，以5800～6500rpm離心15～30min，用ph8.0?tris-hcl緩沖液重新懸浮沉淀；制得以au為核且以ag為殼的au-ag納米粒子。
20、更優選地，抗壞血酸溶液的濃度為0.1±0.01m，硝酸銀溶液的濃度為0.096±0.005mm，ph8.0?tris-hcl緩沖液的濃度為1±0.1m，4-氨基苯硫醇的濃度為9.6±0.5mm，牛血清白蛋白溶液的質量濃度為1±0.1％；抗壞血酸溶液、硝酸銀溶液、ph8.0?tris-hcl緩沖液、4-氨基苯硫醇溶液、牛血清白蛋白溶液、金納米顆粒aunps懸液的體積比為0.2±0.05：0.05±0.01：1±0.1：1±0.1：2±0.2：6±0.5。
21、采用以上優選方案后，可進一步優化第三步的具體過程。
22、優選地，第四步的具體過程如下：
23、將mif抗體溶液與pda溶液混合均勻，加入第三步制得的au-ag納米粒子反應1～2h，制得sers傳感器；離心后重懸，冷藏0℃～4℃保存。
24、更優選地，mif抗體溶液的濃度為15±0.5μg/ml，pda溶液的濃度為5～20mg/ml；mif抗體溶液與pda溶液的體積比為1±0.1：1。
25、采用以上優選方案后，可進一步優化第四步的具體過程。其中，將au-ag納米粒子成功連接到抗體上后，即成功地制得帶有sers標簽的傳感器；通過制作一定厚度的pda保本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種SERS檢測系統的制備方法，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種SERS檢測系統的制備方法，其特征是，第一步的具體過程如下：
3.根據權利要求2所述的一種SERS檢測系統的制備方法，其特征是，第一步中，所述堿性槽的內含溶液為食人魚溶液；所述食人魚溶液由98％的濃硫酸和30％的過氧化氫溶液按照體積比3±0.5：1的比例混合而成；所述含有PDA的MIF抗體溶液中PDA濃度為33±5mM。
4.根據權利要求2所述的一種SERS檢測系統的制備方法，其特征是，第二步的具體過程如下：
5.根據權利要求4所述的一種SERS檢測系統的制備方法，其特征是，第二步中，所述HAuCl4溶液的濃度為5±0.5×10-3M，所述NaBH4溶液的濃度為2±0.5×10-3M，所述HAuCl4溶液與NaBH4溶液的體積比為1：3±0.5。
6.根據權利要求4所述的一種SERS檢測系統的制備方法，其特征是，第三步的具體過程如下：
7.根據權利要求6所述的一種SERS檢測系統的制備方法，其特征是，第四步的具體過程如下：
...【技術特征摘要】
1.一種sers檢測系統的制備方法，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種sers檢測系統的制備方法，其特征是，第一步的具體過程如下：
3.根據權利要求2所述的一種sers檢測系統的制備方法，其特征是，第一步中，所述堿性槽的內含溶液為食人魚溶液；所述食人魚溶液由98％的濃硫酸和30％的過氧化氫溶液按照體積比3±0.5：1的比例混合而成；所述含有pda的mif抗體溶液中pda濃度為33±5mm。
4.根據權利要求2所述的一種sers檢測系統的制備方法，其特征是，第二步的具體過程如下：
5.根據權利要求4所述的一種sers檢測系統的制備方法，其特征是，第二步中，所述haucl4溶液的濃度為5±0.5×10-3m，所述nabh4溶液的濃度為2±0.5×10-3m，所述haucl4溶液與nabh4溶液的體積比為1：3±0.5。
6.根據權利要求4所述的一種sers檢測系統的制備方法，其...
【專利技術屬性】
技術研發人員：方俊杰，曹玥，陳峰，朱哲，蔡凌晨，劉慶雨，丁妍，
申請(專利權)人：南京醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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