【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)藥檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中有關(guān)物質(zhì)的方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、佐劑指可以增強(qiáng)特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性，如百日咳桿菌、抗酸桿菌(結(jié)核分枝桿菌)以及革蘭陰性桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁佐劑、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。最常用的有弗氏佐劑、氫氧化鋁佐劑、脂質(zhì)體等。脂質(zhì)體(liposome)是目前轉(zhuǎn)運(yùn)各種抗原進(jìn)入細(xì)胞的最有效的載體之一。
2、用作疫苗佐劑系統(tǒng)的脂質(zhì)體一般含有磷脂、膽固醇和免疫刺激劑等。脂質(zhì)體是人工合成的具有單層或多層單位膜樣結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)小囊，具有佐劑兼載體效應(yīng)。脂質(zhì)體作為疫苗佐劑可同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫。磷脂是脂質(zhì)體的重要組成部分，是構(gòu)成雙分子層的重要材料。用于疫苗佐劑系統(tǒng)的磷脂主要有陽離子磷脂和中性磷脂等。陽離子磷脂常用的有dotap(2,3-dioleoyl-trimethylammonium?propane?chloride，(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化銨)、dda(dioctadecyl?dimethyl?ammonium?chloride，雙十八烷基二甲基氯化銨)等；中性磷脂常用的有dopc(dioleoylphosphatidylcholine，二油酰基卵磷脂)、dmpc(dimyristoylphosphatidylcholine，二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿)和dmpg(dimyristoylphosphatidylglycerole，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油)等。溶血磷脂(lysophosp
3、elsd檢測(cè)器作為一種通用性檢測(cè)器，已被廣泛應(yīng)用到藥品檢測(cè)領(lǐng)域。應(yīng)用elsd法測(cè)定小分子化藥脂質(zhì)體藥物中的溶血磷脂酰膽堿已有不少研究。目前，少有文獻(xiàn)報(bào)道疫苗這類生物制品中脂質(zhì)體佐劑有關(guān)物質(zhì)(溶血磷脂、油酸、酮膽固醇等)的分析方法；特別是抗原與脂質(zhì)體佐劑在同一溶液中時(shí)，檢測(cè)難度更大；同時(shí)能夠?qū)⑷苎字漠悩?gòu)體實(shí)現(xiàn)有效分離。現(xiàn)有技術(shù)的方法并不能同時(shí)測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中各組分的有關(guān)物質(zhì)。
4、鑒于此，特提出本專利技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中有關(guān)物質(zhì)的方法及其應(yīng)用。
2、本專利技術(shù)是這樣實(shí)現(xiàn)的：
3、第一方面，本專利技術(shù)實(shí)施例提供了一種測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中的目標(biāo)物質(zhì)的方法，其包括：采用高效液相色譜法檢測(cè)待測(cè)樣本中的所述目標(biāo)物質(zhì)；所述色譜法包括采用流動(dòng)相a和流動(dòng)相b進(jìn)行梯度洗脫，所述流動(dòng)相a包括含三氟乙酸的水溶液；所述流動(dòng)相b包括含三氟乙酸的甲醇和乙腈的混和溶液；所述色譜的洗脫條件如下：從0至20～30min，所述流動(dòng)相a的體積百分比從15％～25％降至0～10％，所述流動(dòng)相b的體積百分比從75％～85％增至90％～100％；從20～30min至30～40min，所述流動(dòng)相a的體積百分比維持在0～10％，所述流動(dòng)相b的體積百分比維持在90％～100％；所述目標(biāo)物質(zhì)包括：所述脂質(zhì)體佐劑的組分和/或組分的降解產(chǎn)物和/或代謝產(chǎn)物。
4、第二方面，本專利技術(shù)實(shí)施例提供了試劑組合在制備測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中的目標(biāo)物質(zhì)的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述試劑組合包括用于實(shí)現(xiàn)如前述實(shí)施例所述的方法的試劑；所述目標(biāo)物質(zhì)包括：所述脂質(zhì)體佐劑的組分和/或組分的代謝物。
5、第三方面，本專利技術(shù)實(shí)施例提供了一種測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中的目標(biāo)物質(zhì)的產(chǎn)品，其包括：用于實(shí)現(xiàn)如前述實(shí)施例所述的方法的試劑。
6、第四方面，本專利技術(shù)實(shí)施例提供了如前述實(shí)施例所述的方法在檢測(cè)脂質(zhì)體佐劑的質(zhì)量評(píng)估或檢測(cè)脂質(zhì)體佐劑的有效性、安全性和/或穩(wěn)定性中的應(yīng)用。
7、本專利技術(shù)具有以下有益效果：
8、本專利技術(shù)提供了一種能夠同時(shí)檢測(cè)脂質(zhì)體佐劑中目標(biāo)物質(zhì)的方法，所述目標(biāo)物質(zhì)包括陽離子磷脂dotap、中性磷脂dopc、膽固醇以及它們的有關(guān)物質(zhì)，該有關(guān)物質(zhì)主要包括溶血磷脂(lyso-dotap的2個(gè)異構(gòu)體、lyso-dopc的2個(gè)異構(gòu)體)、油酸和酮膽固醇，分離效果好，為脂質(zhì)體佐劑的有效性、安全性和穩(wěn)定性評(píng)估提供了新的途徑。
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1.一種測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中的目標(biāo)物質(zhì)的方法，其特征在于，其包括：采用高效液相色譜法檢測(cè)待測(cè)樣本中的所述目標(biāo)物質(zhì)；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相A中的三氟乙酸在水溶液中的體積分?jǐn)?shù)為0.05％～0.15％；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的流速為0.5～1.5mL/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜采用的色譜柱包括反相色譜柱，所述反相色譜柱包括C8和C18中的任意一種；所述色譜柱的規(guī)格為柱長(zhǎng)50～250mm×內(nèi)徑2.1～4.6mm，填料粒度為1.7～10μm；
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述檢測(cè)前，所述方法還包括：取脂質(zhì)體佐劑樣品溶液，稀釋后離心，取上清液作為待測(cè)樣本；
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述組分包括：陽離子磷脂DOTAP、中性磷脂DOPC和膽固醇中的至少一種；
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述檢測(cè)采用的檢測(cè)器包括ELSD檢測(cè)器。
8.試劑組合在制備測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中
9.如權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)所述的方法在檢測(cè)脂質(zhì)體佐劑的質(zhì)量評(píng)估或檢測(cè)脂質(zhì)體佐劑的有效性、安全性和/或穩(wěn)定性中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種測(cè)定脂質(zhì)體佐劑中的目標(biāo)物質(zhì)的方法，其特征在于，其包括：采用高效液相色譜法檢測(cè)待測(cè)樣本中的所述目標(biāo)物質(zhì)；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相a中的三氟乙酸在水溶液中的體積分?jǐn)?shù)為0.05％～0.15％；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的流速為0.5～1.5ml/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜采用的色譜柱包括反相色譜柱，所述反相色譜柱包括c8和c18中的任意一種；所述色譜柱的規(guī)格為柱長(zhǎng)50～250mm×內(nèi)徑2.1～4.6mm，填料粒度為1.7～10μm；
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述檢測(cè)前，所述...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：桂江洋，張歡，章偉平，胡業(yè)勤，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：成都邁科康生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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