【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物工程和生物治療領(lǐng)域，具體涉及一種靶向polo樣激酶3（plk3）的人源化單克隆抗體及其在抗人類免疫缺陷病毒感染及抗腫瘤免疫中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、艾滋病（acquired?immunodeficiency?syndrome，aids）一直是我國(guó)乃至世界性的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，至今無(wú)有效治愈策略，抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法雖可抑制體內(nèi)人類免疫缺陷病毒（human?immunodeficiency?virus，hiv）復(fù)制，使血漿病毒載量降至檢測(cè)限以下，但無(wú)法清除潛伏在hiv儲(chǔ)存庫(kù)細(xì)胞內(nèi)的整合病毒。一旦停藥，病毒便迅速?gòu)膬?chǔ)存庫(kù)釋放并在體內(nèi)傳播，病毒載量迅速反彈至治療前水平，故感染者需終身服藥。病毒儲(chǔ)存庫(kù)的存在是艾滋病無(wú)法治愈的根本原因。因此，迫切需要建立精準(zhǔn)檢測(cè)儲(chǔ)存庫(kù)大小及安全有效的清除儲(chǔ)存庫(kù)的方法。
2、惡性腫瘤是世界范圍內(nèi)的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，也是造成全球疾病負(fù)擔(dān)的首要因素。我國(guó)癌癥新發(fā)病例和死亡人數(shù)位列全球第一，目前我國(guó)惡性腫瘤負(fù)擔(dān)日益增重。惡性腫瘤的治療方法主要包括：手術(shù)治療、放化療、激素治療和靶向治療等，但常伴有嚴(yán)重副作用，對(duì)中晚期患者效果不佳。免疫治療作為一種新興的治療手段，已成為多種腫瘤的重要治療方式。然而目前的免疫檢查點(diǎn)阻斷療法和細(xì)胞治療療法存在應(yīng)答率低和操作復(fù)雜不易廣泛推廣等限制。因此，迫切需要研發(fā)新的治療策略用于抗腫瘤免疫治療，這對(duì)延長(zhǎng)患者的生存期及改善患者預(yù)后具有重要意義。
3、抗體具有明確且高特異性的靶向識(shí)別并結(jié)合抗原的能力，在基礎(chǔ)研究和臨床治療中發(fā)揮了越來(lái)越重要的作用，廣泛應(yīng)用
4、腫瘤免疫治療主要包括藥物免疫治療和細(xì)胞免疫治療兩大類。第一類藥物免疫治療是通過(guò)抑制腫瘤免疫負(fù)調(diào)控受體，如pd-1等，pd-1單抗能夠解除對(duì)t細(xì)胞的免疫抑制，重新激活t細(xì)胞并增強(qiáng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的攻擊能力。這類藥物已在多種惡性腫瘤（如黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、腎細(xì)胞癌等）中展示了顯著的療效。但pd-1單抗只在部分患者中展示了顯著療效，仍有相當(dāng)一部分患者對(duì)pd-1單抗治療無(wú)顯著反應(yīng)，并且隨著治療的進(jìn)行，腫瘤細(xì)胞可能會(huì)通過(guò)各種機(jī)制逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，導(dǎo)致耐藥性問(wèn)題，因此亟需尋找新的免疫檢查點(diǎn)并研發(fā)其人源化單克隆抗體作為治療性藥物。第二類細(xì)胞免疫治療是通過(guò)篩選和擴(kuò)增具有高效識(shí)別腫瘤活性的免疫細(xì)胞，通過(guò)在體外培養(yǎng)和激活大量效應(yīng)細(xì)胞，恢復(fù)免疫系統(tǒng)的抗腫瘤功能，發(fā)揮良好的抗腫瘤效果。近年來(lái)，針對(duì)實(shí)體瘤的細(xì)胞免疫治療的臨床研究也越來(lái)越多，一些細(xì)胞療法在國(guó)外更是因良好的療效和安全性被批準(zhǔn)用于臨床，這將為腫瘤患者帶來(lái)新希望。nk細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，具有天然的殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的能力。作為細(xì)胞治療的一種，nk細(xì)胞能夠通過(guò)多種機(jī)制（如釋放穿孔素和顆粒酶、表達(dá)死亡受體配體）直接殺傷腫瘤細(xì)胞。此外，nk細(xì)胞還通過(guò)分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞的功能，從而間接增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)。近年來(lái)，因其迅速、強(qiáng)效的抗腫瘤作用，nk細(xì)胞治療成為腫瘤免疫治療的重要研究方向。而腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制因素可能抑制nk細(xì)胞的免疫功能，使其難以有效發(fā)揮抗腫瘤作用。因此，新的免疫檢查點(diǎn)人源化單抗聯(lián)合nk細(xì)胞治療惡性腫瘤將提高腫瘤免疫治療的有效性。
5、除了pd-1/pd-l1通路外，還有其他的免疫檢查點(diǎn)影響免疫細(xì)胞的殺傷效果。我們鑒定出一個(gè)新的免疫檢查點(diǎn)plk3，使用其人源化單克隆抗體阻斷其通路可顯著增強(qiáng)nk細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的效果。plk3單抗聯(lián)合nk細(xì)胞治療惡性腫瘤可顯著提高治療的應(yīng)答率和免疫治療療效，取得更好的臨床治療效果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本專利技術(shù)提供了一種人源化plk3單克隆抗體及其應(yīng)用，可實(shí)現(xiàn)治療艾滋病的功能、增強(qiáng)ctl對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷的功能以及與nk細(xì)胞聯(lián)合用于治療惡性腫瘤的新策略。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供以下技術(shù)方案。
3、本專利技術(shù)公開了一種人源化plk3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，其特征在于：所述重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:1所示，所述輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?id?no:2所示。
4、本專利技術(shù)還公開了一種人源化plk3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，其特征在于：所述重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:3所示，所述輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?id?no:4所示。
5、本專利技術(shù)還公開了一種上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體在制備檢測(cè)hiv病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
6、本專利技術(shù)還公開了一種上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體在制備治療hiv病毒的藥物中的應(yīng)用。
7、本專利技術(shù)還公開了一種上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體在制備防治hiv病毒感染研究試劑中的應(yīng)用。
8、本專利技術(shù)還公開了一種腫瘤藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑包含上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體或上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體與細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞聯(lián)合。
9、本專利技術(shù)還公開了一種細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞殺傷能力增敏劑，其特征在于，包含上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體。
10、本專利技術(shù)還公開了一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括上述任一項(xiàng)所述的plk3單克隆抗體、nk細(xì)胞和化療藥物。
11、本專利技術(shù)還公開了一種nk細(xì)胞免疫療法增敏劑，其特征在于，所述增敏劑包含上述任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體。
12、本專利技術(shù)還公開了上述所述的腫瘤藥物制劑或上述所述的細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞殺傷能力增敏劑或上述所述的藥物組合物或上述所述的nk細(xì)胞免疫療法增敏劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
13、與現(xiàn)有技術(shù)比，本專利技術(shù)的有益效果如下。
14、本專利技術(shù)首次構(gòu)建了人源化plk3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，能夠?qū)崿F(xiàn)hiv儲(chǔ)存庫(kù)的檢測(cè)和清除，能夠減少抗體的異源性，提高腫瘤治療應(yīng)答率，有利于臨床應(yīng)用。
15、既往的hiv儲(chǔ)存庫(kù)檢測(cè)方法需在體外強(qiáng)烈激活細(xì)胞，導(dǎo)致被感染細(xì)胞的生理（靜息）特征改變，且由于不能區(qū)分前病毒是否完整而高估儲(chǔ)存庫(kù)大小，檢測(cè)結(jié)果不夠真實(shí)準(zhǔn)確、無(wú)法應(yīng)用于臨床。本專利技術(shù)通過(guò)人源化plk3單克隆抗體抑制或清除plk3蛋白的活性，實(shí)現(xiàn)不激活儲(chǔ)存庫(kù)細(xì)胞，即維持儲(chǔ)存庫(kù)細(xì)胞生理狀態(tài)的情況下促發(fā)細(xì)胞釋放大量子代病毒，從而在生理狀態(tài)下檢測(cè)到病毒，并被免疫系統(tǒng)或抗病毒藥物清除被感染的細(xì)胞，可應(yīng)用于臨床。
16、本專利技術(shù)應(yīng)用人源化plk3單克隆抗體能促進(jìn)ctl對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫殺傷，聯(lián)合其他抗腫瘤藥物使用效果更佳，解決了現(xiàn)有免疫療法存在的多種瓶頸問(wèn)題，包括：免疫抑制、pd-1抗體類藥物應(yīng)答率低、免疫耐受等，為抗腫本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種人源化PLK3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，其特征在于：所述重鏈可變區(qū)VH的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，所述輕鏈可變區(qū)VL的氨基酸序列如SEQ?IDNO:2所示。
2.一種人源化PLK3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，其特征在于：所述重鏈可變區(qū)VH的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示，所述輕鏈可變區(qū)VL的氨基酸序列如SEQ?IDNO:4所示。
3.一種如權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化PLK3單克隆抗體在制備檢測(cè)HIV病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
4.一種如權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化PLK3單克隆抗體在制備治療HIV病毒的藥物中的應(yīng)用。
5.一種如權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化PLK3單克隆抗體在制備防治HIV病毒感染研究試劑中的應(yīng)用。
6.一種腫瘤藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑包含權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化PLK3單克隆抗體或權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化PLK3單克隆抗體與細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞聯(lián)合。
7.一種細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞殺傷能力增敏劑，其特征在于，
8.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述的PLK3單克隆抗體、NK細(xì)胞和化療藥物。
9.一種NK細(xì)胞免疫療法增敏劑，其特征在于，所述增敏劑包含權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化PLK3單克隆抗體。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的腫瘤藥物制劑或權(quán)利要求7所述的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞殺傷能力增敏劑或權(quán)利要求8所述的藥物組合物或權(quán)利要求9所述的NK細(xì)胞免疫療法增敏劑在制備用于治療惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種人源化plk3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，其特征在于：所述重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:1所示，所述輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?idno:2所示。
2.一種人源化plk3單克隆抗體，包括重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)，其特征在于：所述重鏈可變區(qū)vh的氨基酸序列如seq?id?no:3所示，所述輕鏈可變區(qū)vl的氨基酸序列如seq?idno:4所示。
3.一種如權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體在制備檢測(cè)hiv病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
4.一種如權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體在制備治療hiv病毒的藥物中的應(yīng)用。
5.一種如權(quán)利要求1-2任意一項(xiàng)所述人源化plk3單克隆抗體在制備防治hiv病毒感染研究試劑中的應(yīng)用。
6.一種腫...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梁國(guó)新，尚紅，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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