【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測，具體為一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系。
技術介紹
1、心臟代謝疾病(心肌梗塞、中風)潛在的致病因素與總甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白膽固醇(hdl-c)以及低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)等脂類分子密切相關。在臨床研究中會重點關注這些生物標志物及分子途徑。血液中脂質的分析有助于了解心臟代謝疾病的風險從而調節飲食中的脂肪。
2、血液中脂質的主要來源是脂肪組織、肝臟和膳食脂質。血液脂類物質不溶于水或微溶于水，血液中除脂肪酸與清蛋白結合外，其余都與載脂蛋白結合成脂蛋白，隨血液循環被轉運到各組織完成其生理和代謝功能。血漿脂蛋白的由于所含脂類成分和蛋白質種類、比例不同，可分為多種類型。
3、臨床實驗室已有多種血漿脂質分析的方法，由于血漿脂質組成多樣、結構復雜，通常需要先提取分離，然后根據其特點、性質和分析目的選擇合適的方法進行分析；其中最經典的是超速離心法，根據血漿中各種脂蛋白的密度差異進行分離；超速離心一般需要較長時間，操作繁瑣且須有超離裝置，不易推廣，得不到廣泛應用；最常用的是電泳法，利用血漿中脂質的遷移率不同進行分析，根據支持介質不同可分為醋酸纖維薄膜脂蛋白電泳、瓊脂糖凝膠脂蛋白電泳和聚丙烯酰胺凝膠脂蛋白電泳；但是傳統電泳方法的緩沖體系緩沖能力有限，對血漿中脂蛋白的分離能力不足，難以區分各個脂蛋白類型，制約了人們血脂精準分析需求的實現；且現有的緩沖體系容易造成電泳凝膠的降解，可儲存時間短，容易造成脂質分析的誤差。
4、因此，本領域迫切需要一種分辨率高、性能好、保存時間長的
技術實現思路
1、針對現有技術的不足，本專利技術提供了一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，解決上述
技術介紹
中提到的問題。
2、為實現以上目的，本專利技術通過以下技術方案予以實現：
3、本專利技術的第一方面，提供一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，包括緩沖物質、穩定物質、防腐劑、增密劑，所述緩沖物質的濃度為0.5m-2m，所述穩定物質的濃度為1％-30％，所述防腐劑的濃度為1‰，所述增密劑的濃度為0.1％-5％。
4、優選的，所述緩沖物質由三羥甲基氨基甲烷、三乙醇胺、4-羥乙基哌嗪乙磺酸、巴比妥鹽緩沖液中的一種或多種組成；
5、所述穩定物質由生物大分子、高分子聚合物中的一種或多種組成，所述穩定物質包括穩定劑，所述穩定劑由蔗糖、海藻糖、聚乙二醇、聚丙二醇中的一種或多種組成；
6、所述防腐劑由疊氮化鈉、proclin?300、5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮中的一種或多種組成；
7、所述增密劑由丙三醇、乙二醇、丙二醇中的一種或多種組成。
8、本專利技術的第二方面，提供第一方面所述的一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系的應用，其特征在于：所述應用選自以下應用中的任一項：
9、a、血漿脂蛋白的分析中的應用；
10、b、凝膠預裝柱制備中的應用。
11、本專利技術的第三方面，提供一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系進行血漿脂蛋白的分析方法，包括以下步驟：
12、a1、樣本采集：采集空腹12h以上的靜脈血，在3h內分離出血清或血漿；并進行及時檢測，若樣品不能及時檢測，則將樣品放置在-70℃以下儲存，取出使用時進行緩慢解凍；
13、a2、預裝柱制備：通過相應方法制備凝膠預裝柱；
14、a3、樣品染色：將采集的樣本與染色液混合均勻，室溫孵育10min后離心取上清液，即為脂質染色后的血漿/血清；
15、a4、電泳分析：在電泳槽的電場作用下，染色后的血漿/血清中的脂蛋白根據顆粒直徑大小依次通過凝膠預裝柱，從而得到脂蛋白分離電泳結果；
16、a5、掃描分析：將脂蛋白分離電泳結果用掃描分析系統掃描得到脂蛋白電泳圖譜，并根據電泳圖譜中光密度值的分布轉化為脂蛋白亞型分布峰圖。
17、本專利技術的第四方面，提供采用一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系制備的凝膠預裝柱：包括以下步驟：
18、b1、將緩沖物質、穩定物質、防腐劑、增密劑按照比例進行混合，從而得到溶液母液；
19、b2、將30％丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶解于超純水中，從而制備得到丙烯酰胺溶液母液；
20、b3、將溶液母液和丙烯酰胺溶液母液按5：8比例混合，而后加入過硫酸銨和四甲基乙二胺后，立即混合均勻，而后分裝進加入底部密封的透明玻璃管內，而后在其上層加入超純水，靜置30min，從而得到長度為4cm-10cm的第一段凝膠柱；
21、b4、待第一段凝膠柱聚合后，除去第一段凝膠柱上層的超純水，而后將溶液母液和丙烯酰胺溶液母液按1：1比例混合，而后加入過硫酸銨和四甲基乙二胺后，立即混合均勻，而后加入第一段凝膠柱的上層，從而得到第二段凝膠柱，第二段凝膠柱的長度為0.3cm-3cm，第二段凝膠柱距透明比例管上沿的距離為2-3cm；在第二段凝膠柱的上層加入超純水靜置30min，得到凝膠預裝柱。
22、本專利技術的第五方面，提供一種血漿脂質的染色液，血漿脂質的染色液的制備方法包括以下步驟：
23、s1、取2g蘇丹黑b染料，溶于第一溶劑；
24、s2、而后再加入二甲基亞砜，混合均勻后加熱至50℃，攪拌30min后用0.22μm的濾膜過濾；
25、s3、而后避光保存，從而得到染色液。
26、優選的，所述第一溶劑為乙醇、乙二醇、丙二醇、異丙醇、丙酮溶劑中的一種或多種，所述第一溶劑占總染色液的體積比為90％-95％，所述二甲基亞砜占總染色液的體積比為1％-10％。
27、本專利技術的第六方面，提供第五方面所述的一種血漿脂質的染色液在血漿脂蛋白的分析中的應用。
28、本專利技術的第七方面，提供一種血漿脂質的染色液在血漿脂蛋白的分析中的使用方法，包括以下步驟：
29、c1、取100μl樣本與10μl染色液混合均勻；
30、c2、室溫孵育10min后離心取上清液，從而得到染色后的樣本
31、本專利技術的第八方面，提供一種凝膠預裝柱進行血漿脂蛋白分析的方法，包括以下步驟：
32、d1、將制備好的凝膠預裝柱垂直固定在電泳槽中，使第二段電泳凝膠柱方向向上并位于電泳槽的負極端；
33、d2、而后向電泳槽的正負極槽中緩慢加入電泳緩沖液，且負極槽中的電泳緩沖液淹沒至凝膠預裝柱的上端；
34、d3、而后吸取染色后的樣本，緩慢加入凝膠預裝柱中第二段凝膠的上方，而后裝配好電泳槽，接通電源進行電泳；
35、d4、在電泳結束后取下凝膠預裝柱，依次放入掃描分析系統平臺上進行掃描，得到血漿脂蛋白電泳圖譜，并轉化為脂蛋白亞型分布峰圖，從而完成分析。
36、本專利技術提供了一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系。具備以下有益效果：
37、1、本專利技術通過緩沖體系中緩沖物質的添加起到穩定凝膠ph的作用，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，包括緩沖物質、穩定物質、防腐劑、增密劑，其特征在于：所述緩沖物質的濃度為0.5M-2M，所述穩定物質的濃度為1％-30％，所述防腐劑的濃度為1‰，所述增密劑的濃度為0.1％-5％。
2.根據權利要求1所述的一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，其特征在于：所述緩沖物質由三羥甲基氨基甲烷、三乙醇胺、4-羥乙基哌嗪乙磺酸、巴比妥鹽緩沖液中的一種或多種組成；
3.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系的應用，其特征在于：所述應用選自以下應用中的任一項：
4.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系進行血漿脂蛋白的分析方法，其特征在于：根據權利要求1-3任一項所述的一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，包括以下步驟：
5.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系制備的凝膠預裝柱：其特征在于：采用權利要求1-3任一項所述的一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，包括以下步驟：
6.一種血漿脂質的染色液，其特征在于：血漿脂質的染色液的制備方法包括以下步驟：
7.根據權利要求7所述的一種血漿脂質的染色液，其特征在于：所述
8.如權利要求6或7所述的一種血漿脂質的染色液在血漿脂蛋白的分析中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，包括一種血漿脂質的染色液在血漿脂蛋白的分析中的使用方法，其特征在于：包括以下步驟：
10.一種凝膠預裝柱進行血漿脂蛋白分析的方法，其特征在于：包括以下步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，包括緩沖物質、穩定物質、防腐劑、增密劑，其特征在于：所述緩沖物質的濃度為0.5m-2m，所述穩定物質的濃度為1％-30％，所述防腐劑的濃度為1‰，所述增密劑的濃度為0.1％-5％。
2.根據權利要求1所述的一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，其特征在于：所述緩沖物質由三羥甲基氨基甲烷、三乙醇胺、4-羥乙基哌嗪乙磺酸、巴比妥鹽緩沖液中的一種或多種組成；
3.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系的應用，其特征在于：所述應用選自以下應用中的任一項：
4.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系進行血漿脂蛋白的分析方法，其特征在于：根據權利要求1-3任一項所述的一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系，包括以下步驟：
5.一種改良的血漿脂質分析用緩沖體系制備的凝膠...
【專利技術屬性】
技術研發人員：姜自運，陳煜，宋斌斌，張佳佳，
申請(專利權)人：安徽昊拓生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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