【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及抗體制備，尤其涉及一種光棘球海膽巨噬細(xì)胞遷移抑制因子多克隆抗體、抗原蛋白及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(macrophage?migration?inhibitory?factor,mif)是一種具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、腫瘤發(fā)生等密切相關(guān)，以獨(dú)特的三聚體結(jié)構(gòu)存在，這種結(jié)構(gòu)賦予了它強(qiáng)大的生物活性和穩(wěn)定性。通過自分泌或旁分泌的途徑對(duì)細(xì)胞和微環(huán)境進(jìn)行調(diào)節(jié)，作為信號(hào)分子與細(xì)胞膜上不同的受體結(jié)合，從而在不同的細(xì)胞中發(fā)揮相應(yīng)的作用。
2、在高等脊椎動(dòng)物中，巨噬細(xì)胞遷移抑制因子的功能及相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制已有較為成熟的研究。但是，對(duì)于較為原始的生物類群，如海膽，關(guān)于mif的研究則顯得相對(duì)匱乏。特別是針對(duì)光棘球海膽關(guān)于其mif蛋白的基礎(chǔ)研究，尤其是mif抗體制備方面的探索，至今仍為空白。因此，制備針對(duì)光棘球海膽mif的多克隆抗體，無疑將填補(bǔ)這一領(lǐng)域的空白。這樣的抗體不僅能夠作為特異性的探針，用于追蹤和鑒定光棘球海膽體內(nèi)mif的表達(dá)與分布，還能為深入研究mif在光棘球海膽生長發(fā)育、免疫應(yīng)答、疾病抵抗等方面的作用機(jī)制提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)支持。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種光棘球海膽巨噬細(xì)胞遷移抑制因子mif多克隆抗體、抗原蛋白及其制備方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中缺少光棘球海膽mif抗體的問題。
2、作為首要目的，本專利技術(shù)保護(hù)一種光棘球海膽巨噬細(xì)胞遷移抑制因子mif抗原蛋白，所述抗原蛋白的氨基酸序列如seq?id?no
3、同時(shí)，本專利技術(shù)還請(qǐng)求保護(hù)一種編碼光棘球海膽mif抗原蛋白的編碼基因，所述基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
4、本專利技術(shù)還提供了一種光棘球海膽mif抗原蛋白的重組表達(dá)載體，包括上述基因和初始載體pcoldⅱ，所述基因插入初始載體的ndei和hindiii酶切位點(diǎn)之間。
5、本專利技術(shù)還提供了一種光棘球海膽mif抗原蛋白的制備方法，包含如下步驟：
6、將所述的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行篩選，得到含有重組質(zhì)粒的菌株。
7、將上述菌株接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行生長及誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白，收集菌體并裂解細(xì)胞使得目的蛋白釋放。
8、使用鎳離子親和純化柱子對(duì)蛋白混合液進(jìn)行純化，得到純化后的蛋白用bsa灰度分析法測定濃度。
9、本專利技術(shù)還提供了一種光棘球海膽mif多克隆抗體，所述多克隆抗體是以上述抗原蛋白免疫小鼠后得到。
10、本專利技術(shù)還提供了一種光棘球海膽mif基因編碼區(qū)全序列，如seqid?no.3所示。
11、本專利技術(shù)還提供了一種擴(kuò)增上述mif基因編碼區(qū)全序列的引物對(duì)，所述引物對(duì)的序列如seq?id?no.4～5所示。
12、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果在于以下幾點(diǎn)：
13、(1)本專利技術(shù)成功研制并分離純化出一種源自光棘球海膽的巨噬細(xì)胞遷移抑制因子抗原蛋白。該蛋白展現(xiàn)出卓越的免疫原性特性，通過將其免疫小鼠，我們成功地誘導(dǎo)產(chǎn)生了針對(duì)光棘球海膽mif的高特異性多克隆抗體。mif多克隆抗體在蛋白質(zhì)水平上為深入探究海膽mif的生物學(xué)功能與作用機(jī)制提供了寶貴的研究工具，極大地促進(jìn)了相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)展。
14、(2)本專利技術(shù)還成功克隆并鑒定了編碼上述光棘球海膽mif抗原蛋白的基因序列，進(jìn)一步構(gòu)建了相應(yīng)的重組表達(dá)載體系統(tǒng)。該系統(tǒng)能夠高效、穩(wěn)定地表達(dá)并純化出光棘球海膽mif抗原蛋白，為大量制備該蛋白以滿足科研及潛在應(yīng)用需求奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
15、(3)尤為重要的是，本專利技術(shù)還首次解析并獲得了光棘球海膽mif基因完整的編碼區(qū)序列，并設(shè)計(jì)合成了一對(duì)特異性引物對(duì)，用于高效擴(kuò)增該mif基因的完整編碼區(qū)。這一研究不僅填補(bǔ)了海膽mif基因序列信息方面的空白，更為后續(xù)開展海膽mif基因功能解析和表達(dá)調(diào)控機(jī)制探索提供了不可或缺的關(guān)鍵資源。
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1.一種光棘球海膽巨噬細(xì)胞遷移抑制因子MIF抗原蛋白，其特征在于，所述抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；或
2.一種基因，其特征在于，所述基因是權(quán)利要求1所述的光棘球海膽MIF抗原蛋白的編碼基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
3.一種光棘球海膽MIF抗原蛋白的重組表達(dá)載體，其特征在于，包括權(quán)利要求2所述基因和初始載體pColdⅡ，所述基因插入初始載體的NdeI和HindIII酶切位點(diǎn)之間。
4.權(quán)利要求1所述一種光棘球海膽MIF抗原蛋白的制備方法，其特征在于，包含如下步驟：
5.一種光棘球海膽MIF多克隆抗體，其特征在于，所述多克隆抗體是權(quán)利要求1所述抗原蛋白免疫小鼠后得到。
6.光棘球海膽MIF基因編碼區(qū)全序列，其特征在于，具有如SEQ?ID?NO.3所示序列。
7.一種擴(kuò)增權(quán)利要求6所述光棘球海膽MIF基因編碼區(qū)全序列的引物對(duì)，所述引物對(duì)的序列如SEQ?ID?NO.4～5所示。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種光棘球海膽巨噬細(xì)胞遷移抑制因子mif抗原蛋白，其特征在于，所述抗原蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；或
2.一種基因，其特征在于，所述基因是權(quán)利要求1所述的光棘球海膽mif抗原蛋白的編碼基因，所述基因的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
3.一種光棘球海膽mif抗原蛋白的重組表達(dá)載體，其特征在于，包括權(quán)利要求2所述基因和初始載體pcoldⅱ，所述基因插入初始載體的ndei和hindiii酶切位點(diǎn)之間...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王晗，張津華，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：大連工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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