【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于檢驗分析，具體涉及一種檢測復方磺胺甲噁唑及其代謝物血藥濃度的方法和試劑盒。
技術介紹
1、復方磺胺甲噁唑是治療耶氏肺孢子菌、嗜麥芽窄食單胞菌、諾卡菌感染及類鼻疽根除期的首選藥物。高濃度的甲氧芐啶或磺胺甲噁唑可能導致不良反應，如高血鉀癥、腎損傷或藥物超敏反應。如高劑量的甲氧芐啶可能引起高血鉀癥；監測磺胺甲噁唑水平能改善卡氏肺孢子肺炎患者臨床結局，減少不良反應；磺胺甲噁唑代謝物導致晶體形成，引發梗阻和腎損傷復方磺胺甲噁唑的嚴重皮膚不良反應與特定代謝物4-硝基磺胺甲噁唑相關，但4-硝基磺胺甲噁唑在人血漿中的濃度檢測尚未進行。通過監測血藥濃度，可以及時發現并調整劑量，預防這些反應。另外，復方磺胺甲噁唑存在顯著的個體間差異。為了確保患者獲得有效治療劑量，避免不足或過量，從而提高治療效果，對復方磺胺甲噁唑進行治療藥物監測是有必要的。
2、fatica?e等人報道一種使用超快速固相萃取-串聯質譜法(ultra-fast?solid-phase?extraction-tandem?mass?spectrometry)對血清中的磺胺甲噁唑和甲氧芐啶進行定量的方法(fatica?e,faber?j,gaffron?c,et?al.quantification?of?serumsulfamethoxazole?and?trimethoprim?by?ultra-fast?solid-phase?extraction-tandemmass?spectrometry[j].ther?drug?monit,2020,42(5):7
3、xiangxiangfu等人報道了一種高效液相色譜(hplc)方法，在強化期或根除期同時監測類鼻疽患者血漿中磺胺甲噁唑和甲氧芐啶的濃度(xiangxiang?fu,lili?zhong,rongwang,et?al.exploration?of?a?high-performance?liquid?chromatography?method?forantibiotic?drug?monitoring?in?melioidosis?patients?and?establishment?of?itssampling?procedure[j].results?in?chemistry,2023,6:2211-7156)，該方法色譜柱為acutfexys-c8色譜柱(4.6×250mm，5μm)，流動相a由1000ml超純水和2ml三乙胺組成，使用冰醋酸調節ph至6.0，流動相b為乙腈。該方法采用梯度洗脫，以氨基比林為內標，三氯乙酸為沉淀劑將樣品進行前處理后去上清液上機檢測，流速為1.0ml·min-1，波長為240nm，然后采用所建立的方法測量中國海南地區11例類鼻疽患者的smz和tmp血漿濃度。但是，其同樣存在以下缺點：樣品準備時間較長，需要進行在線固相萃取步驟；只能同時監測甲氧芐啶和磺胺甲噁唑，對于療效和不良反應的所有相關物質不能完全覆蓋；缺乏完整的基質效應和提取回收率的研究可能影響該方法的可靠性和準確性評估；采用hplc(waters?e2695，waters?corporation，usa)儀器進行檢測，總運行時間過長，進樣量過大；血樣和工作液用量大。
4、美羅醫藥科技有限公司報道了一種同時檢測血液中多種抗菌藥物的方法(cn116660413a)，其前處理步驟為：取2ml離心管，依次加入50μl待測血漿樣本、5μl內標工作溶液及200μl5％甲酸-乙腈溶液作為沉淀劑，漩渦震蕩30s混勻，或使用振蕩孵育器以1300r的轉速混合2分鐘，靜置2min左右待溶液分層，壓入譜易快過濾小柱，耗時10s，取10s溶濾液，以90，以0.1％氨水水溶液稀釋，混勻；其檢測條件為：高效液相色譜儀配備三重四級桿檢測器，c18色譜柱，3.0×50mm、2.7um，流動相a：0.1％甲酸+5mm乙酸銨水溶液；流動相b：0.1％甲酸+5mm乙酸銨甲醇溶液，流速0.6ml/min，柱溫35溫，進樣量5μl；流動相梯度為第0-2min，流動相a的體積分數由90％勻速變為5％，流動相b的體積分數由10％勻速變為95％；第2-3min，流動相a的體積分數為5％，流動相b的體積分數為95％；第3-3.1min，流動相a的體積分數由5％勻速變為90％，流動相b的體積分數由95％勻速變為10％；第3.1-4.5min，流動相a的體積分數為90％，流動相b的體積分數為10％。但是，其同樣存在以下缺點：只能同時監測甲氧芐啶和磺胺甲噁唑，對于療效和不良反應的所有相關物質不能完全覆蓋；色譜儀進樣量過大。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種基于高效液相色譜-串聯質譜的方法，用于準確、快速地定量分析甲氧芐啶、磺胺甲噁唑及其代謝物磺胺甲噁唑-n-乙酰基和4-硝基磺胺甲噁唑的含量。
2、本專利技術提供了一種同時檢測血液中復方磺胺甲噁唑及其代謝物血藥濃度的方法，包括：
3、對待測血液樣品進行預處理，得到目標樣品溶液，將其進行液相色譜-質譜檢測，結合標準曲線計算結果；
4、其中，待測物包括甲氧芐啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲噁唑-n-乙酰基、4-硝基磺胺甲噁唑。
5、在一個實施方案中，所述對待測血液樣品進行預處理，包括向待測血液樣品中加入沉淀劑和內標混合工作液，旋渦振蕩，取混合溶液通過oasis?prime?hlb固相萃取柱凈化，收集流出液，與超純水混合后于離心管中渦旋，得到目標樣品溶液。
6、在一個實施方案中，所述血液樣品是人血液樣品。
7、在一個實施方案中，所述血液樣品是血漿。
8、在一個實施方案中，所述沉淀劑是甲醇。
9、在一個實施方案中，沉淀劑與血漿的體積比為5～15：1，優選為7～9：1，更優選為8：1。
10、在一個實施方案中，所述內標是甲氧芐啶-d9、磺胺甲噁唑-d4、磺胺甲噁唑-n-乙酰基-d4、4-硝基磺胺甲噁唑-d4。
11、在一個實施方案中，所述內標混合工作液的溶劑是甲醇。
12、在一個實施方案中，所述內標混合工作液的濃度是1～3μg/ml，優選為2μg/ml。
13、在一個實施方案中，所述內標混合工作液與血液樣品的體積比為0.5～2：1，優選為1：1。
14、在一個本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種同時檢測血液中復方磺胺甲噁唑及其代謝物血藥濃度的方法，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對待測血液樣品進行預處理，包括向待測血液樣品中加入沉淀劑和內標混合工作液，旋渦振蕩，取混合溶液通過Oasis?PRiMEHLB固相萃取柱凈化，收集流出液，與超純水混合后于離心管中渦旋，得到目標樣品溶液。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述沉淀劑是甲醇；在一個實施方案中，沉淀劑與血漿的體積比為5～15：1，優選為7～9：1，更優選為8：1。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述內標是甲氧芐啶-D9、磺胺甲噁唑-D4、磺胺甲噁唑-N-乙酰基-D4、4-硝基磺胺甲噁唑-D4；所述內標混合工作液的溶劑是甲醇；所述內標混合工作液的濃度是1～3μg/mL，優選為2μg/mL；所述內標混合工作液與血液樣品的體積比為0.5～2：1，優選為1：1。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準曲線通過如下方法繪制：
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，空白血液樣品與混合標準曲線工作液的體積比
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色譜中，流動相包括流動相A和流動相B，流動相A為甲酸水溶液，所述流動相B為乙腈。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，液相色譜采用等度洗脫程序，流動相A為30～50％，流動相B為50～70％；優選的，流動相A為40％，流動相B為60％。
9.根據權利要求1-8任一項所述的方法在臨床上復方磺胺甲噁唑及其代謝物血藥濃度檢測中的應用；其中，待測物包括甲氧芐啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲噁唑-N-乙酰基、4-硝基磺胺甲噁唑。
10.一種同時檢測血液中復方磺胺甲噁唑及其代謝物血藥濃度的測試盒，所述試劑盒組成包括：Oasis?PRiME?HLB固相萃取柱、內標混合工作液、沉淀劑、超純水、流動相A、流動相B；
...【技術特征摘要】
1.一種同時檢測血液中復方磺胺甲噁唑及其代謝物血藥濃度的方法，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對待測血液樣品進行預處理，包括向待測血液樣品中加入沉淀劑和內標混合工作液，旋渦振蕩，取混合溶液通過oasis?primehlb固相萃取柱凈化，收集流出液，與超純水混合后于離心管中渦旋，得到目標樣品溶液。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述沉淀劑是甲醇；在一個實施方案中，沉淀劑與血漿的體積比為5～15：1，優選為7～9：1，更優選為8：1。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述內標是甲氧芐啶-d9、磺胺甲噁唑-d4、磺胺甲噁唑-n-乙酰基-d4、4-硝基磺胺甲噁唑-d4；所述內標混合工作液的溶劑是甲醇；所述內標混合工作液的濃度是1～3μg/ml，優選為2μg/ml；所述內標混合工作液與血液樣品的體積比為0.5～2：1，優選為1：1。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王敏，鐘莉莉，陳君，符香香，梅蒙玉，鄧陽，
申請(專利權)人：海南省人民醫院，
類型：發明
國別省市：
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