【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物，具體涉及一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal?stem?cells，mscs)是一種多功能干細(xì)胞，經(jīng)特異性誘導(dǎo)后可分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多種細(xì)胞。另外，mscs還可分泌sdf-1(stromal?cell-derived?factor?1，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1)及其受體cxcr4以利于其歸巢、血管內(nèi)皮生長因子(vascular?endothelial?growth?factor，vegf)以促進(jìn)血管形成。
2、近年來，mscs逐漸成為組織工程的研究熱點(diǎn)。目前mscs的移植主要通過聯(lián)合生物材料、基因修飾等以促進(jìn)其定向分化，并且取得了積極的結(jié)果。然而，mscs的移植也存在著一些缺陷，在一定程度上限制了其在組織工程的應(yīng)用，例如，依賴外源性mscs時，靜脈移植時mscs的定向歸巢是保證療效的關(guān)鍵，但目前尚無明確手段可確保mscs完全到達(dá)目標(biāo)區(qū)域；依賴內(nèi)源性mscs時，尚無法有效富集循環(huán)中mscs到達(dá)目標(biāo)區(qū)域。因此，需要一種可以改善這些方案局限性的方法，為優(yōu)化mscs移植治療提供希望。
3、適配體是一種人工合成的小分子單鏈寡核苷酸，通過靜電相互作用、范德華力、氫鍵或通過折疊形成一個特殊的三維空間結(jié)構(gòu)(如發(fā)夾、莖環(huán)及g四連體)與靶標(biāo)緊密連接，其靶標(biāo)多種多樣，如離子、肽類、蛋白質(zhì)、病毒或細(xì)菌、整個細(xì)胞甚至活體動物、其它有機(jī)物或無機(jī)物等。適配體與靶標(biāo)結(jié)合的方式多種多樣，可通過磷酸鈣共沉淀法、胞吞及胞飲等方式進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與細(xì)
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供了一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體及其應(yīng)用，該核酸適配體具有更高的親和力和特異性、無免疫原性而且能夠化學(xué)合成、分子量小，穩(wěn)定，易于標(biāo)記和保存。
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下的技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)的第一目的是提供用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體，所述核酸適配體包括如seq?id?no.1所示的dna片段。
4、進(jìn)一步的，所述核酸適配體還包括在所述的dna片段上結(jié)合生物素、地高辛、熒光物質(zhì)、納米發(fā)光材料或酶標(biāo)記的復(fù)合物。
5、進(jìn)一步的，所述熒光物質(zhì)為fam熒光基團(tuán)或cy5熒光基團(tuán)；和/或，所述納米發(fā)光材料為量子點(diǎn)或上轉(zhuǎn)換納米顆粒；和/或，所述酶標(biāo)記為辣根過氧化物酶或蔗糖酶。
6、本專利技術(shù)的第二目的是提供一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的檢測試劑盒，包含上述的核酸適配體。
7、本專利技術(shù)的第三目的是提供核苷酸序列為seq?id?no.1所示的核酸適配體在制備募集兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8、本專利技術(shù)的第四目的是提供核苷酸序列為seq?id?no.1所示的核酸適配體用于制備識別兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物探針中的應(yīng)用。
9、本專利技術(shù)的第五目的是提供一種包含如權(quán)利要求1所述核酸適配體的3wj?rna納米顆粒，所述3wj?rna納米顆粒為3wj-m4-ckipsirna，其中3wj為核心支架，m4為靶向mscs的靶標(biāo)配體，ckipsirna作為治療劑。
10、進(jìn)一步的，所述3wj?rna納米顆粒還包括熒光示蹤劑，所述熒光示蹤劑為alexa647。
11、進(jìn)一步的，所述3wj?rna納米顆粒促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化。
12、進(jìn)一步的，所述3wj?rna納米顆粒靶向聚集于股骨。
13、與現(xiàn)有技術(shù)比較，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是：
14、(1)本專利技術(shù)篩選得到了特異性結(jié)合兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體，該核酸適配體具有更高的親和力與特異性，免疫原性小，穩(wěn)定性好，能夠體外化學(xué)合成，分子量小，可以對不同部位進(jìn)行修飾和取代，且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，易于保存，便于標(biāo)記。本專利技術(shù)的可識別兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體結(jié)合能力強(qiáng)，利用本專利技術(shù)的核酸適配體對其結(jié)合的靶分子進(jìn)行捕獲，可能得到其靶標(biāo)分子，可以大大促進(jìn)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和富集，在組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。
15、(2)本專利技術(shù)提供的核酸適配體識別的是活細(xì)胞，可以用于募集兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，為兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的有效分離和富集提供了新思路，為后續(xù)組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供了堅實的基礎(chǔ)。
16、(3)本專利技術(shù)提供的核酸適配體識別的是活細(xì)胞，可以用于識別兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物探針，能夠?qū)⑿》肿影邢蜻f送至該核酸適配體識別的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中，為解決目前msc臨床應(yīng)用中的部分問題開辟新的途徑。
17、(4)本專利技術(shù)提供了一種含有用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體的檢測試劑盒，由于核酸適配體的合成成本較抗體制備成本低，且周期短，重現(xiàn)性好，采用本專利技術(shù)的核酸適配體進(jìn)行兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的檢測時，操作更為簡單、迅速。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體包括如SEQ?ID?NO.1所示的DNA片段。
2.如權(quán)利要求1所述的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體還包括在所述的DNA片段上結(jié)合生物素、地高辛、熒光物質(zhì)、納米發(fā)光材料或酶標(biāo)記的復(fù)合物。
3.如權(quán)利要求2所述的核酸適配體，其特征在于，所述熒光物質(zhì)為FAM熒光基團(tuán)或Cy5熒光基團(tuán)；和/或，所述納米發(fā)光材料為量子點(diǎn)或上轉(zhuǎn)換納米顆粒；和/或，所述酶標(biāo)記為辣根過氧化物酶或蔗糖酶。
4.一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的檢測試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-3中任一項所述的核酸適配體。
5.核苷酸序列如權(quán)利要求1中SEQ?ID?NO.1所示的核酸適配體在制備募集兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)品中的應(yīng)用。
6.核苷酸序列如權(quán)利要求1中SEQ?ID?NO.1所示的核酸適配體用于制備識別兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物探針中的應(yīng)用。
7.一種包含如權(quán)利要求1所述核酸適配體的3WJ?RNA納米顆粒，其特征在于，所述3WJRNA納米顆粒為3WJ-M4-CkipsiR
8.如權(quán)利要求7所述的3WJ?RNA納米顆粒，其特征在于，所述3WJ?RNA納米顆粒還包括熒光示蹤劑，所述熒光示蹤劑為Alexa647。
9.如權(quán)利要求7或8所述的3WJ?RNA納米顆粒，其特征在于，所述3WJ?RNA納米顆粒促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化。
10.如權(quán)利要求7或8所述的3WJ?RNA納米顆粒，其特征在于，所述3WJ?RNA納米顆粒靶向聚集于股骨。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體包括如seq?id?no.1所示的dna片段。
2.如權(quán)利要求1所述的核酸適配體，其特征在于，所述核酸適配體還包括在所述的dna片段上結(jié)合生物素、地高辛、熒光物質(zhì)、納米發(fā)光材料或酶標(biāo)記的復(fù)合物。
3.如權(quán)利要求2所述的核酸適配體，其特征在于，所述熒光物質(zhì)為fam熒光基團(tuán)或cy5熒光基團(tuán)；和/或，所述納米發(fā)光材料為量子點(diǎn)或上轉(zhuǎn)換納米顆粒；和/或，所述酶標(biāo)記為辣根過氧化物酶或蔗糖酶。
4.一種用于檢測兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的檢測試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-3中任一項所述的核酸適配體。
5.核苷酸序列如權(quán)利要求1中seq?id?no.1所示的核酸適配體在制備募集兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)品中的應(yīng)用。
6.核...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李章華，劉想忠，徐亮亮，楊翼，許海甲，唐錫杰，
申請(專利權(quán))人：武漢市第三醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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