【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥，具體涉及一種由d-苦杏仁苷制備d-野黑櫻苷的方法。
技術介紹
1、苦杏仁苷由一分子的苯乙醇腈和兩分子葡萄糖組成是一種氰苷類化合物，廣泛存在于薔薇科植物山杏、桃的干燥成熟種子，目前對苦杏仁苷的研究和報道大多都集中在d-苦杏仁苷?？嘈尤受赵隗w內主要的代謝產物為野黑櫻苷，其化學組成為一分子苯乙醇腈和一分子葡萄糖，也存在一對手性異構體。本專利技術通過響應面優化實驗設計由d-苦杏仁苷制備出d-野黑櫻苷。本專利技術解決了d-野黑櫻苷對照品難以獲取的問題，為含苦杏仁苷的藥材及復方制劑的質量標準的優化提供了一定的參考，為苦杏仁苷異構體的生物活性及藥理毒性的研究提供了一定的基礎。
技術實現思路
1、基于此，本專利技術提供了一種由d-苦杏仁苷制備d-野黑櫻苷的方法，該方法包括如下步驟：
2、(1)配制d-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液；以及
3、(2)將該d-苦杏仁苷溶液和該β-葡萄糖苷酶溶液混合，在一定條件下進行酶促反應，得到含有d-野黑櫻苷的反應液。
4、進一步地，該方法進一步包括如下步驟：
5、(3)向該含有d-野黑櫻苷的反應液中加入第一溶劑以中止反應，干燥，得到干燥物；
6、(4)向該干燥物中加入第一溶劑復溶，加入硅膠粉末，攪拌，得到待洗脫物；
7、(5)將該待洗脫物使用硅膠柱進行梯度洗脫，收集含有d-野黑櫻苷的洗脫液，干燥，得到d-野黑櫻苷粗制品；
8、(6)將該d-野黑櫻苷粗制品使用第
9、(7)將該d-野黑櫻苷的水溶液干燥，得到d-野黑櫻苷。
10、進一步地，該第一溶劑為醇，例如甲醇。
11、進一步地，在步驟(1)中，該配制d-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液的方法包括稱取適量d-苦杏仁苷粉末和β-葡萄糖苷酶粉末，分別于容器中定容，得到d-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液。
12、進一步地，該容器為容量瓶。
13、進一步地，該d-苦杏仁苷溶液的濃度為0.2～2.0mg/ml，例如0.5～1.5mg/ml，例如約1mg/ml。
14、進一步地，該β-葡萄糖苷酶溶液的濃度為0.05～2.0unit/ml，例如0.1～1.0unit/ml，例如約0.52unit/ml或約0.5unit/ml。
15、進一步地，在步驟(2)中，該酶促反應在水浴下進行。
16、進一步地，該酶促反應的溫度為30～50℃，例如約41.2℃或約40℃。
17、進一步地，該酶促反應的時間為5～20min，例如約7.33min或約7min。
18、進一步地，在步驟(3)中，該第一溶劑與該d-苦杏仁苷溶液的體積(ml/ml)之比值為3～5，例如約3.63。
19、進一步地，在步驟(3)中，該干燥為旋轉蒸發干燥。
20、進一步地，在步驟(4)中，該第一溶劑的體積為1～10ml，例如約5ml。
21、進一步地，在步驟(4)中，該硅膠粉末為100～200目硅膠粉末。
22、進一步地，在步驟(4)中，該硅膠粉末的質量為5～15g，例如約10g。
23、進一步地，在步驟(5)中，該硅膠柱使用200～300目硅膠粉末進行裝填。
24、進一步地，在步驟(5)中，該硅膠粉末的質量為40～60g，例如約50g。
25、進一步地，步驟(4)的硅膠粉末與步驟(5)的硅膠粉末的質量之比值為0.1～0.5，例如約0.2。
26、進一步地，該梯度洗脫按如下程序進行：(a)乙酸乙酯：石油醚(1：1)，約3倍柱體積；(b)乙酸乙酯：石油醚(2：5)，約5倍柱體積；(c)乙酸乙酯，約10倍柱體積；(d)乙酸乙酯：甲醇(10：1)，約5倍柱體積；以及(e)乙酸乙酯：甲醇(10：3)，約5倍柱體積。
27、進一步地，該洗脫液的檢測方法為薄層色譜法。
28、進一步地，該薄層色譜法的展開劑為乙酸乙酯和甲醇。
29、進一步地，該乙酸乙酯和該甲醇的體積之比為(4～6)：(1～3)，例如約5：約2。
30、進一步地，該干燥為揮發干燥或者旋轉蒸發干燥。
31、進一步地，在步驟(6)中，該純化為制備液相純化。
32、進一步地，該制備液相純化的色譜條件為：采用capcell?pak?c18-aq色譜柱，流動相a為水，流動相b為甲醇，流速為10～20ml/min。
33、進一步地，該色譜柱的規格：柱長250mm，內徑10mm，粒徑5μm。
34、進一步地，該水為純水。
35、進一步地，該甲醇為色譜甲醇。
36、進一步地，該純水和該色譜甲醇的體積之比為(10～30)：(70～90)，例如約20：約80。
37、進一步地，該流速為14～18ml/min，例如約16ml/min。
38、進一步地，該檢測為使用紫外二極管陣列檢測器進行檢測。
39、進一步地，該干燥為旋轉蒸發干燥。
40、進一步地，在步驟(7)中，該干燥為冷凍干燥。
41、進一步地，該冷凍干燥的溫度為-20℃。
42、根據本專利技術的另一個方面，提供了一種上述方法制備得到的含有d-野黑櫻苷的溶液，或者d-野黑櫻苷。
43、本專利技術的有益效果：
44、本專利技術的一種由d-苦杏仁苷制備d-野黑櫻苷的方法所涉及的反應為生物所酶催化的反應，其中酶用量濃度、反應的時間、反應的溫度、ph等都會是影響目標化合物產率的重要因素，對該反應進行綜合分析后發現box-behnken統計學分析方法對此類多元函數的分析具有一定的指導意義。
45、d-苦杏仁苷自然界中廣泛存在，在止咳平喘、抗炎鎮痛、肝腎纖維化等多方面均具有一定的藥理活性，其在體內的主要活性代謝產物為d-野黑櫻苷。本專利技術通過對制備方法的優化最終制備純化出了d-野黑櫻苷純度≥98％，并通過色譜法、核磁共振波譜法對異構體進行鑒別。通過本實驗的研究為d-野黑櫻苷的藥理藥效活性和毒性、藥物代謝動力學等方面的研究提供了一定的可能性，也為含有苦杏仁苷的藥材及制劑的質量標準方面的研究提供了一定的參考意義。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種由D-苦杏仁苷制備D-野黑櫻苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法進一步包括如下步驟：
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一溶劑為醇，例如甲醇。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述配制D-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液的方法包括稱取適量D-苦杏仁苷粉末和β-葡萄糖苷酶粉末，分別于容器中定容，得到D-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液；
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述酶促反應在水浴下進行；
6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述第一溶劑與所述D-苦杏仁苷溶液的體積(ml/ml)之比值為3～5，例如約3.63；
7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在步驟(4)中，所述第一溶劑的體積為1～10ml，例如約5ml；
8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(6)中，所述純化為制備液相純化；
9.根據權利要求2所述的方法
10.一種通過權利要求1至9中任一項所述的方法制備得到的含有D-野黑櫻苷的溶液，或者D-野黑櫻苷。
...【技術特征摘要】
1.一種由d-苦杏仁苷制備d-野黑櫻苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法進一步包括如下步驟：
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一溶劑為醇，例如甲醇。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述配制d-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液的方法包括稱取適量d-苦杏仁苷粉末和β-葡萄糖苷酶粉末，分別于容器中定容，得到d-苦杏仁苷溶液和β-葡萄糖苷酶溶液；
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述酶促反應在水浴下進行；...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王長虹，劉偉，程雪梅，劉平，劉文康，
申請(專利權)人：上海中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。