【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于共價(jià)藥物設(shè)計(jì)，具體涉及一種靶向hces2a的共價(jià)抑制劑、其制備方法及其用途。
技術(shù)介紹
1、伊立替康(irinotecan,cpt-11)是一種抗癌化療藥物，靜脈注射的伊替利康經(jīng)血液進(jìn)入人體后，可經(jīng)肝臟中hces2a轉(zhuǎn)化成為具有抗腫瘤能力的活性代謝產(chǎn)物sn-38(7-乙基-l0-羥基喜樹堿)。然而，由于人體腸道中hces2a表達(dá)造成的嚴(yán)重遲發(fā)性腹瀉，使伊替利康無法通過口服給藥。因此，良好的hces2a抑制劑可以改善伊立替康口服給藥引發(fā)的腸道毒性，減輕腫瘤患者的痛苦。
2、從藥物發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用的角度來看，理想的hces2a抑制劑應(yīng)該具有以下特征：高特異性、強(qiáng)效、低毒性、細(xì)胞通透性(能夠進(jìn)入細(xì)胞并阻斷細(xì)胞內(nèi)hces2a)和可接受的代謝穩(wěn)定性。然而，大多數(shù)報(bào)道的hces2a抑制劑，特別是黃酮類、查爾酮類、三萜類和丹參酮類等具有天然骨架結(jié)構(gòu)的化合物僅僅表現(xiàn)出中等的抑制能力、較差的特異性、低細(xì)胞通透性和不可接受的代謝穩(wěn)定性。
3、共價(jià)抑制劑，也稱不可逆抑制劑，是一類有機(jī)小分子，能與特定的靶蛋白相互作用并形成共價(jià)鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變，從而抑制蛋白質(zhì)的活性。共價(jià)抑制劑具有較高的生化效率、作用較強(qiáng)并且持久的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，其給藥劑量以及給藥頻率與傳統(tǒng)藥物相比較少、藥效學(xué)與藥代動(dòng)力學(xué)分離，游離藥物被迅速清除也能夠長(zhǎng)久維持效力、能夠預(yù)防耐藥性的產(chǎn)生、能夠靶向特定蛋白罕見的、非保守殘基，達(dá)到較高的選擇性。
4、目前，尚未見有關(guān)于靶向hces2a的共價(jià)抑制劑的相關(guān)研究報(bào)道。本專利技術(shù)在前期構(gòu)建的靶向共價(jià)抑制
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)針對(duì)上述問題進(jìn)行，提供了一種靶向hces2a的共價(jià)抑制劑、其制備方法以及在制備hces2a抑制劑中的應(yīng)用。
2、本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下：本專利技術(shù)首次提出利用n-取代的氨基甲酸硫酯作為親電彈頭，采用分子融合技術(shù)，對(duì)非共價(jià)先導(dǎo)化合物b1進(jìn)行了“共價(jià)化”改造，使其與hces2a的催化空腔口袋中絲氨酸殘基ser228共價(jià)偶聯(lián)，改造后的化合物并未改變?cè)肿拥哪负私Y(jié)構(gòu)，結(jié)合方式不會(huì)受到太大影響；且能夠通過共價(jià)作用增加小分子與靶蛋白間的結(jié)合能力，提高抑制活性，相較于非共價(jià)先導(dǎo)化合物b1產(chǎn)生了等同及更優(yōu)的抑制作用效力。
3、本專利技術(shù)所述的化合物的藥物制劑形式為口服制劑，在伊替利康治療腫瘤過程中抑制腸道內(nèi)hces2a活性，降低遲發(fā)性腹瀉的應(yīng)用。
4、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案如下：
5、本專利技術(shù)第一方面，提供了一種靶向hces2a的共價(jià)抑制劑，結(jié)構(gòu)式如下列式i所示：
6、
7、其中，r為ch3或ch2ch3；r'為h，f，cl，br，oh，nh2，och3，ch3或c(ch3)3。
8、優(yōu)選的，上述靶向hces2a的共價(jià)抑制劑中，烯基雙鍵部分為e或z構(gòu)型。
9、進(jìn)一步優(yōu)選，所述靶向hces2a的共價(jià)抑制劑如下任一結(jié)構(gòu)式所示：
10、
11、
12、抑制性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以n-取代的氨基甲酸硫酯作為親電彈頭的化合物均表現(xiàn)出與共價(jià)作用相關(guān)的時(shí)間相關(guān)性抑制作用，且在33分鐘孵育后表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制作用。其中，化合物b7-4-2，b7-13-2，b7-19-1，b7-19-2和b7-20-2對(duì)hces2a蛋白的抑制作用較為突出，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于非共價(jià)先導(dǎo)化合物b1。
13、共價(jià)結(jié)合位點(diǎn)測(cè)定結(jié)果顯示，除化合物b7-19-2的結(jié)合位點(diǎn)為ser368外，其余化合物均能夠共價(jià)修飾hces2a蛋白催化空腔中的絲氨酸殘基ser228，從而抑制hces2a蛋白的催化活性。
14、本專利技術(shù)第二方面，提供了靶向hces2a的共價(jià)抑制劑的制備方法：
15、一、當(dāng)r為甲基時(shí)，共價(jià)抑制劑的反應(yīng)流程如下所示：
16、
17、反應(yīng)主體步驟如下：在堿性條件下將香草醛a與二甲氨基硫代甲酰氯b偶聯(lián)得到中間體c，然后在高溫和微波輻射作用下進(jìn)行重排，得到中間體d，后與二氫茚酮類化合物e發(fā)生羥醛縮合，得到式i中r為ch3時(shí)所述的目標(biāo)產(chǎn)物f。
18、上述反應(yīng)過程中，各步驟的具體合成方法如下：
19、(1)制備中間體c時(shí)，堿選自三乙胺、氫氧化鈉、氫氧化鉀中的任意一種，反應(yīng)溶劑選自四氫呋喃；制備方法如下：將香草醛溶于四氫呋喃，0℃加入2.5eq.的三乙胺，2.5eq.二甲氨基甲酰氯，室溫反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后加等比例水終止反應(yīng)，二氯甲烷萃取母液3次，飽和食鹽水萃取有機(jī)相1次，無水硫酸鈉干燥，抽濾，旋干，經(jīng)柱層析得中間體c；
20、(2)制備中間體d時(shí)，將中間體c溶于二苯醚中，微波輻照220℃，反應(yīng)1～2小時(shí)，經(jīng)柱層析得中間體d；
21、(3)制備目標(biāo)產(chǎn)物f時(shí)，將摩爾比為8:9的中間體d及二氫茚酮類化合物e溶于一定體積醇溶液，緩慢加入體積為醇體積60％、質(zhì)量體積比為20％的強(qiáng)堿水溶液，于室溫反應(yīng)并實(shí)時(shí)檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程；反應(yīng)結(jié)束后，加入等比例水淬滅并調(diào)節(jié)ph至5左右，依次經(jīng)二氯甲烷萃取、飽和食鹽水洗、無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾后，用二氯甲烷/乙酸乙酯體系作為流動(dòng)相進(jìn)行柱層析分離得目標(biāo)產(chǎn)物f。
22、二、當(dāng)r為乙基時(shí)，共價(jià)抑制劑的反應(yīng)流程如下所示：
23、
24、反應(yīng)主體步驟如下：化合物d堿性條件下水解后與n-甲基-n-乙基氨基甲酰氯h偶聯(lián)，得到中間體i，后與二氫茚酮類化合物e發(fā)生羥醛縮合，得到式i中r為ch2ch3時(shí)所述的目標(biāo)產(chǎn)物j。
25、上述反應(yīng)過程中，各步驟的具體合成方法如下：
26、(1)中間體g制備時(shí)，堿選自三乙胺、氫氧化鈉、氫氧化鉀中的任意一種；制備過程如下：將中間體d溶于醇溶液，緩慢加入體積為醇溶液20％、5.0m堿性水溶液，70℃油浴反應(yīng)并檢測(cè)反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸去除溶劑，加等比例水終止反應(yīng)，調(diào)節(jié)ph至3，依次經(jīng)乙酸乙酯萃取母液、飽和食鹽水萃取有機(jī)相、無水硫酸鈉干燥后抽濾，旋干，經(jīng)柱層析得中間體g；
27、(2)中間體i的制備過程如下：將中間體g溶于四氫呋喃，0℃加入2.5eq.三乙胺和2.5eq.n-乙基-n-甲基氨基甲酰氯，室溫反應(yīng)并實(shí)時(shí)檢測(cè)反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后，加等比例水終止反應(yīng)，依次經(jīng)二氯甲烷萃取母液、飽和食鹽水萃取有機(jī)相、無水硫酸鈉干燥后，抽濾，旋干，經(jīng)柱層析得中間體i；
28、(3)制備目標(biāo)產(chǎn)物j時(shí)，將摩爾比為8:9的中間體i及二氫茚酮類化合物e溶于一定體積醇溶液，緩慢加入體積為醇體積60％、質(zhì)量體積比為20％的強(qiáng)堿水溶液，于室溫反應(yīng)并實(shí)時(shí)檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程；反應(yīng)結(jié)束后，加入等比例水淬滅并調(diào)節(jié)ph至5左右，依次經(jīng)二氯甲烷萃取、飽和食鹽本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑，其特征在于：結(jié)構(gòu)式如下式I所示：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑，其特征在于：烯基雙鍵部分為E或Z構(gòu)型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑，其特征在于：所述靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑如下任一結(jié)構(gòu)式所示：
4.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征在于，當(dāng)R為甲基時(shí)，共價(jià)抑制劑的反應(yīng)流程如下所示：
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征在于：
6.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征在于，當(dāng)R為乙基時(shí)，共價(jià)抑制劑的反應(yīng)流程如下所示：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征在于：
8.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑、其同位素標(biāo)記化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備hCES2A抑制劑中的應(yīng)用。
9.一種靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑，其特征在于，包括活性組分以及
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的靶向hCES2A的共價(jià)抑制劑，其特征在于，該抑制劑為口服制劑形式，與伊立替康聯(lián)合使用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向hces2a的共價(jià)抑制劑，其特征在于：結(jié)構(gòu)式如下式i所示：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向hces2a的共價(jià)抑制劑，其特征在于：烯基雙鍵部分為e或z構(gòu)型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向hces2a的共價(jià)抑制劑，其特征在于：所述靶向hces2a的共價(jià)抑制劑如下任一結(jié)構(gòu)式所示：
4.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的靶向hces2a的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征在于，當(dāng)r為甲基時(shí)，共價(jià)抑制劑的反應(yīng)流程如下所示：
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的靶向hces2a的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征在于：
6.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的靶向hces2a的共價(jià)抑制劑的制備方法，其特征...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：葛廣波，趙慶杰，蓋聰昊，胡雪艷，張雅，柴曉云，鄒燕，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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