【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及腫瘤藥物，尤其涉及一種巨噬細胞靶向型納米原位腫瘤疫苗及其應用。
技術介紹
1、腫瘤作為一種惡性疾病，嚴重危害人類健康，縮短人類壽命。腫瘤臨床正在經歷一場革命，免疫治療取得的突破性成果改變了癌癥治療的格局與未來。目前，腫瘤免疫治療主要分為主動免疫治療與被動免疫治療兩類。相較于以car-t、抗體及細胞因子療法等為代表的被動免疫，以治療性納米腫瘤疫苗為代表的主動免疫不僅可以更有效地殺傷原發腫瘤及轉移瘤，還可以更充分地激活長期抗腫瘤免疫，且不良反應率更低。治療性納米腫瘤疫苗通常由納米載體、腫瘤抗原及免疫激動劑共同組成，尋找合適的免疫激動劑對于治療性納米腫瘤疫苗的療效至關重要。黃芪多糖（astragalus?polysaccharides，aps）是由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等多種酸性多糖組成的親水性大分子混合物，因其具有強大的提高免疫力、抗腫瘤、抗氧化、抗菌等作用，所以被作為免疫增強劑廣泛應用于臨床抗癌治療。目前有許多研究人員借助納米載體較強的細胞穿透和靶向能力、高效的藥代動力學、良好的生物相容性等優勢，與aps的免疫增強特性結合，制備出一種很有前途的新型抗腫瘤免疫治療藥物，即納米黃芪多糖，常使用的制備納米黃芪多糖的方法包括：微流控法制備包載ova蛋白的黃芪多糖納米疫苗；通過雙重乳化法使用plga-peg-cooh包裹aps形成納米顆粒；使用溶劑熱法制備超順磁氧化鐵納米粒包載的aps納米粒；離子交聯原理制備殼聚糖包載的aps納米粒；通過薄膜分散-微孔濾膜擠壓法制備aps脂質體；或利用aps自組裝形成的特性形成具有多孔結構和
2、然而目前制備的納米aps缺乏對目標細胞的靶向功能，在納米aps進入體內后，對腫瘤細胞的殺傷效果以及對免疫細胞的增效功能較弱，在體內實驗中往往需要大劑量并長期用藥。由于缺乏細胞靶向性，高劑量的藥物進入體內會大量被非目的正常細胞攝取，從而引起對機體的嚴重不良反應。
3、目前，治療性納米腫瘤疫苗要取得很好的治療效果，除了其需要有效的免疫佐劑外，大量且種類豐富的腫瘤特異性抗原也是必不可少的，現有自體納米腫瘤疫苗結合腫瘤抗原主要有兩種方式：一種是需在體外制備抗原后再輸入患者體內，這種方式制備效率低，價格高昂，負載腫瘤抗原有限，精確性和普及性都難以保證；另一種方式是聯合腫瘤消融等局部治療，通過局部治療破壞腫瘤，才能使納米腫瘤疫苗在體內獲取足夠的腫瘤抗原并遞送給免疫細胞，由于技術手段繁瑣、設備昂貴、治療亦花費不菲，且對患者各項身體機能有一定要求，這種組合治療模式無疑抬高了未來臨床轉化的門檻，降低了醫療新技術的可及性和可獲益性。所以，治療性納米腫瘤疫苗的設計和制備工藝仍需改進，目前的研發重點是設計一種多功能納米腫瘤疫苗兼在體內局部腫瘤區域破壞腫瘤產生抗原、吸附腫瘤抗原、靶向免疫細胞、激活全身特異性抗腫瘤免疫于一體，并進一步提升療效、制備效率和普及性，這是其能進入臨床應用的關鍵。
技術實現思路
1、為了解決現有技術存在的問題，本專利技術提供一種巨噬細胞靶向型納米原位腫瘤疫苗及其應用。
2、目前自體納米腫瘤疫苗多集中于增強機體適應性抗腫瘤免疫而忽視固有免疫的巨大抑瘤效應，本專利技術在研究過程中發現，腫瘤組織存在的dc和t細胞數量少且多處于抑制狀態，腫瘤相關巨噬細胞（tumor?associated?macrophages，tams）則為腫瘤微環境中占比最高的固有免疫細胞，最高可占實體瘤總體積的50%。而先天固有免疫反應（髓系的各種細胞，包括單核細胞、巨噬細胞、多形核細胞、肥大細胞和自然殺傷細胞等）對于t細胞的發育、激活和功能維持有著顯著的作用。以巨噬細胞為代表的固有免疫細胞作為機體第一道防線，通過檢測腫瘤的分子改變，首先啟動自身的保護反應，并通過自身的抗原呈遞功能橋接固有免疫和適應性免疫，這是引發腫瘤特異性t細胞功能的關鍵。
3、目前，實現主動靶向巨噬細胞的常規技術是用一種試劑（如配體、抗體和肽）裝飾納米粒子的表面，這種試劑可以選擇性地相互作用并被某些組織中的特定細胞類型識別。但是現有的這些方式工藝過程繁瑣，價格昂貴，不利于臨床普及，因而本專利技術轉向研究巨噬細胞膜表面包含的受體。巨噬細胞膜表面包含許多受體，這些受體決定巨噬細胞活性，包括生長、分化、激活、識別、內吞作用、遷移和分泌。本專利技術最終聚焦于在腫瘤微環境中豐度較高的，且在m2型巨噬細胞上呈高表達的受體中的甘露糖受體，甘露糖（mannose）是其天然配體。本專利技術將氨基-聚乙二醇-甘露糖修飾于聚乳酸-羥基乙酸共聚物（poly(lactic-co-glycolic?acid)，plga）表面，有效提高plga納米顆粒對腫瘤組織中tams的靶向能力。具體為利用plga表面的羧基能與氨基-聚乙二醇-甘露糖（nh2-peg-man）末端的氨基通過脫水縮合形成肽鍵的原理，使plga表面修飾氨基-聚乙二醇-甘露糖，獲得具有巨噬細胞靶向能力的plga納米黃芪多糖原位腫瘤疫苗（aps@plga-man，apm），apm可以促進巨噬細胞對aps的攝取，增強巨噬細胞向m1極化并殺傷腫瘤的能力。
4、在apm促進腫瘤相關巨噬細胞極化并殺傷腫瘤后，apm的骨架材料plga還可以通過疏水作用吸附腫瘤細胞死亡后產生的腫瘤蛋白質抗原，apm可以精確將腫瘤抗原遞送給巨噬細胞，激活其抗原提呈的性能，活化腫瘤區域的th1及cd8+t細胞，激活抗腫瘤適應性免疫反應，產生強大且持久的抗腫瘤免疫反應。
5、此外，本專利技術在研究中還發現，本專利技術提供的納米顆粒還明顯促進了panoptosis的發生（目前尚未有關于在激活m1巨噬細胞極化的同時導致腫瘤發生panoptosis的研究報道），引發了腫瘤多模式死亡。在釋放出大量高免疫原性腫瘤抗原的同時，將腫瘤抗原吸附、富集，并靶向遞送給巨噬細胞，經其抗原提呈功能有效激活特異性抗腫瘤免疫，從而發揮強大持久的抗癌效用。在此基礎上，可以進一步聯合現有免疫治療，減輕微環境免疫抑制，取得更好的療效。
6、第一方面，本專利技術提供一種腫瘤疫苗，包括：納米顆粒；
7、所述納米顆粒包括：黃芪多糖和plga復合體，以及氨基-聚乙二醇甘露糖；所述氨基-聚乙二醇甘露糖修飾于所述plga表面；所述氨基-聚乙二醇甘露糖、黃芪多糖和plga的質量比為1:（1~5）:（10~20）。
8、進一步地，所述氨基-聚乙二醇甘露糖、黃芪多糖和plga的質量比為1:（1.5~3）:（12~16）。
9、進一步地，所述黃芪多糖和plga復合體為aps@plga納米顆粒，所述aps@plga納米顆粒通過雙重乳化法制備得到。
10、進一步地，所述雙重乳化法包括：以pva溶液為外水相，以溶解于有機溶劑中的plga為有機相，以aps溶液為內水相；
11、混合所述內水相和所述有機相，在冰水浴中超聲獲得初乳；在室溫攪拌條件下混合本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種腫瘤疫苗，其特征在于，包括：納米顆粒；
2.根據權利要求1所述的腫瘤疫苗，其特征在于，所述氨基-聚乙二醇甘露糖、黃芪多糖和PLGA的質量比為1:（1.5~3）:（12~16）。
3.根據權利要求1?或2所述的腫瘤疫苗，其特征在于，所述黃芪多糖和PLGA復合體為APS@PLGA納米顆粒，所述APS@PLGA納米顆粒通過雙重乳化法制備得到。
4.根據權利要求3所述的腫瘤疫苗，其特征在于，所述雙重乳化法包括：以PVA溶液為外水相，以溶解于有機溶劑中的PLGA為有機相，以APS溶液為內水相；
5.權利要求1-4任一項所述腫瘤疫苗的制備方法，其特征在于，包括：
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述過濾為通過0.2~0.3μm濾膜過濾；和/或，所述離心為在冷PBS中以18000~22000g的條件離心35分鐘以上。
7.一種抗腫瘤藥物，其特征在于，包括權利要求1-4任一項述及的納米顆粒。
8.根據權利要求7所述的抗腫瘤藥物，其特征在于，還包括：免疫檢查點抑制劑。
9.權利要求
10.權利要求1-4任一項述及的納米顆粒在制備用于預防或治療癌癥的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種腫瘤疫苗，其特征在于，包括：納米顆粒；
2.根據權利要求1所述的腫瘤疫苗，其特征在于，所述氨基-聚乙二醇甘露糖、黃芪多糖和plga的質量比為1:（1.5~3）:（12~16）。
3.根據權利要求1?或2所述的腫瘤疫苗，其特征在于，所述黃芪多糖和plga復合體為aps@plga納米顆粒，所述aps@plga納米顆粒通過雙重乳化法制備得到。
4.根據權利要求3所述的腫瘤疫苗，其特征在于，所述雙重乳化法包括：以pva溶液為外水相，以溶解于有機溶劑中的plga為有機相，以aps溶液為內水相；
5.權利要求1-4任一項所述腫瘤疫苗的制備...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周天，饒偉，張弛，胡凱文，
申請(專利權)人：北京中醫藥大學東方醫院，
類型：發明
國別省市：
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