【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子免疫學領域，尤其涉及一種泛腫瘤抗原抗體d2及其應用。
技術介紹
1、免疫球蛋白超家族（igsf）由至少一個具有免疫球蛋白結構域的蛋白質組成，在細胞間通訊中起重要作用。cd147，也稱為basigin或emmprin，是一種高度糖基化的單次跨膜蛋白，相對分子質量為50kda-60kda，屬于免疫球蛋白超家族。cd147分子屬于單次跨膜糖蛋白，基因定位于19p13.3處，由10個跨度約為12?kb的外顯子組成。從克隆的cdna序列得知cd147分子的mrna長度大約1.7?kb，n端起始之前有約115個核苷酸為非編碼區，編碼區編碼269個氨基酸，21個氨基酸為信號肽，中間185個氨基酸構成胞外結構域，從206-229共24個氨基酸為跨膜區。
2、cd147幾乎在各種腫瘤細胞中均有表達，在多種惡性腫瘤中均呈現高水平表達，在腫瘤的發生發展中起著重要作用。cd147通過誘導基質金屬蛋白（mmps）的產生，促進腫瘤生長、浸潤和轉移。腫瘤的發生發展是一個動態過程，涉及腫瘤微環境（tm）中不同細胞和非細胞成分之間的相互作用。惡性腫瘤細胞的浸潤和轉移需要跨越基底膜和組織間隙，而cd147的高表達可使mmps的表達和活性增加，從而降解基底膜，破壞組織的機械屏障，促進腫瘤的浸潤及轉移。cd147也可通過與α3β1、α6β1形成復合物，參與細胞與基質的黏附，促進惡性腫瘤細胞的擴散轉移。此外，cd147的胞內c端結構的改變，影響細胞內骨架蛋白的聚集和解聚，參與細胞的運動及偽足的形成，促進腫瘤細胞的轉移。
3、cn
4、普通抗體的研究載體以小鼠、兔子為主，而在駱駝科和軟骨魚綱動物血液中存在一種缺失輕鏈的特殊抗體，即重鏈抗體。與普通抗體相比，它只包含一個重鏈可變區（vhh）和兩個常規的ch2與ch3區。克隆其可變區，可以得到只由重鏈可變區組成的單域抗體（又稱納米抗體），具有分子量小、組織穿透力強、穩定性高、免疫原性低等優點。與普通抗體相比，單域抗體擁有諸多優勢：一是體積小，是普通抗體的十分之一，這使得它能夠滲透到組織和細胞內部，特別是能夠穿透血腦屏障。二是穩定性強，單域抗體在極端的溫度和ph值條件下都能保持穩定性，在高達90℃的高溫下仍能保持生物活性。三是結構簡單，單域抗體更容易進行改造，如人源化、多價性構建等，且生產成本低，適合大規模生產。四是高特異性，羊駝的免疫系統能夠產生對特定抗原有高度特異性和親和力的抗體，且對人的免疫原性弱，引起免疫反應的風險較低。
5、cd147在腫瘤細胞的生長、浸潤和轉移具有重要作用，且在各種腫瘤細胞均有表達，如骨癌、卵巢癌、乳腺癌、口腔癌、胃癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、腎癌、白血病、結直腸癌、膠質母細胞瘤、黑色素瘤、食管癌、肝癌、胰腺癌、膽管癌和鼻咽癌等（cd147?is?apromising?target?of?tumor?progression?and?a?prognostic?biomarker，《cancers(basel)》，2019?nov?16;11(11):1803），由此可見cd147是一個合適的治療靶點。針對cd147的臨床前和臨床研究都發現，靶向cd147的抗體藥物和工程化免疫細胞藥物都可以有效殺傷多種腫瘤細胞（包括肝癌、肺癌、宮頸癌、胰腺癌等）（cd147:?an?integral?andpotential?molecule?to?abrogate?hallmarks?of?cancer，《front?oncol》，2023?nov?7;13:1238051）。同時羊駝抗體相比于普通抗體具有諸多優勢，所以應用相關技術制備cd147的羊駝抗體，做成抗體藥物或細胞藥物，可用于癌癥的治療。
6、綜上所述，如何提供一種具有高特異性和高親和力的抗cd147單域抗體，并將其應用于制備以cd147為靶點的嵌合抗原受體細胞通過adcc作用增強nk細胞殺傷腫瘤細胞的能力，已成為目前本領域亟待解決的問題之一。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術提供了一種泛腫瘤抗原抗體d2及其應用，本專利技術使用cd147蛋白免疫羊駝，通過血清效價檢測、酵母文庫構建，酵母文庫篩選和單克隆抗體挑取等步驟，獲得了一種與cd147親和力強的單域抗體，并將該單域抗體序列克隆至嵌合抗原受體表達載體中，構建以cd147單域抗體為抗原結合域的嵌合抗原受體t細胞，腫瘤殺傷效果好。
2、為達此目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供了一種泛腫瘤抗原抗體d2，所述泛腫瘤抗原抗體d2的cdr1的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述泛腫瘤抗原抗體d2的cdr2的氨基酸序列如seq?idno.2所示，所述泛腫瘤抗原抗體d2的cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
4、seq?id?no.1：ggifstsa。
5、seq?id?no.2：inwsgiat。
6、seq?id?no.3：aahsgakwlrppsydy。
7、優選地，所述泛腫瘤抗原抗體d2的重鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no.4所示。
8、seq?id?no.4：evqlvesggglvqpggslrlscaasggifstsamawfrqapgkerefvaainwsgiattygdsvkgrftisrddtkktlylqmnnlkpedaavyycaahsgakwlrppsydywgqgtqvtvss。
9、第二方面，本專利技術提供了一種核酸分子，所述核酸分子編碼第一方面所述的泛腫瘤抗原抗體d2。
10、第三方面，本專利技術提供了一種重鏈抗體，所述重鏈抗體包括第一方面所述的泛腫瘤抗原抗體d2和ig?fc。
11、優選地，所述ig?fc包括igg1、igg2、igg3或igg4的fc段中的任意一種。
12、優選地，所述igg1的fc段氨基酸序列包括seq?id?no.5所示的序列。
13、seq?id?no.5：epkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk。
14、優選地，所述重鏈抗體的氨基酸序列包括seq?id?no本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種泛腫瘤抗原抗體D2，其特征在于，所述泛腫瘤抗原抗體D2的CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述泛腫瘤抗原抗體D2的CDR2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，所述泛腫瘤抗原抗體D2的CDR3的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
2.根據權利要求1所述的泛腫瘤抗原抗體D2，其特征在于，所述泛腫瘤抗原抗體D2的重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。
3.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體D2。
4.一種重鏈抗體，其特征在于，所述重鏈抗體包括權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體D2和Ig?Fc；
5.一種嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括信號肽、抗原結合結構域、鉸鏈區、跨膜結構域和信號轉導結構域，所述抗原結合結構域包括權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體D2。
6.根據權利要求5所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述信號肽包括CD8、GM-CSF、CD4、CD28、CD137、IgG、IgE、TCRα或TCRβ蛋白的信號肽中的任意
7.根據權利要求5所述的嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.12所示。
8.一種嵌合抗原受體免疫細胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體免疫細胞表達權利要求5~7任一項所述的嵌合抗原受體；
9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體D2或權利要求8所述的嵌合抗原受體免疫細胞，所述藥物組合物還包括自然殺傷細胞。
10.如權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體D2、權利要求3所述的核酸分子、權利要求4所述的重鏈抗體、權利要求5~7任一項所述的嵌合抗原受體、權利要求8所述的嵌合抗原受體免疫細胞或權利要求9所述的藥物組合物中的任意一種在制備殺傷CD147陽性腫瘤細胞的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種泛腫瘤抗原抗體d2，其特征在于，所述泛腫瘤抗原抗體d2的cdr1的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述泛腫瘤抗原抗體d2的cdr2的氨基酸序列如seq?id?no.2所示，所述泛腫瘤抗原抗體d2的cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
2.根據權利要求1所述的泛腫瘤抗原抗體d2，其特征在于，所述泛腫瘤抗原抗體d2的重鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no.4所示。
3.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體d2。
4.一種重鏈抗體，其特征在于，所述重鏈抗體包括權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體d2和ig?fc；
5.一種嵌合抗原受體，其特征在于，所述嵌合抗原受體包括信號肽、抗原結合結構域、鉸鏈區、跨膜結構域和信號轉導結構域，所述抗原結合結構域包括權利要求1或2所述的泛腫瘤抗原抗體d2。
6.根據權利要求5所述的嵌合...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃智宏，張曦，韓德平，讓·保羅·羅歇·蒂埃里，
申請(專利權)人：百吉生物醫藥廣州股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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