【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本申請涉及分析化學領(lǐng)域，尤其涉及一種高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針及其制備方法、使用其檢測同型半胱氨酸及對同型半胱氨酸成像的方法。
技術(shù)介紹
1、同型半胱氨酸(homocysteine,hcy)作為甲硫氨酸循環(huán)和半胱氨酸合成過程中的關(guān)鍵中間體，甲基化/轉(zhuǎn)硫代謝異常均會導致hcy含量的升高，造成高同型半胱氨酸血癥。血清總hcy水平直接反映了機體甲基化和轉(zhuǎn)硫代謝的狀態(tài)，過高的hcy(>15μm)會損傷細胞、組織、器官，是許多慢性疾病發(fā)生的獨立危險因素或重要危險因素(diabetesandvasculardisease?research2007,4,143-149)，已成為繼高血壓、高血脂和高血糖之后最準確的獨立健康指標(international?journal?ofmolecular?sciences?2016,17,1733)。在多種流行病學和臨床相關(guān)性分析中，升高的血清總hcy水平與心血管疾病、阿爾茲海默癥、癡呆、帕金森病、妊娠綜合征、習慣性流產(chǎn)、骨質(zhì)疏松、癌癥等重大疾病密切相關(guān)(food?science&nutrition2020,8,4696-4707；metabolites,2021,11,37)，同型半胱氨酸作為慢性炎癥的一個重要指標，其升高的水平通過炎癥機制促使結(jié)直腸癌的發(fā)生或進展(autoimmunity?reviews,2007,503–509)。在炎癥性腸病患者中，同型半胱氨酸水平升高的現(xiàn)象十分常見，并與結(jié)直腸癌密切相關(guān)。同時，血清同型半胱氨酸水平也是膳食引發(fā)炎癥的有效標志之
2、目前，已經(jīng)開發(fā)了多種方法來檢測hcy和粘度，例如液相色譜-質(zhì)譜法(lcms)、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法(gcms)和熒光光譜法。在這些檢測方法中，熒光探針分析由于具有快速響應(yīng)和高靈敏度的能力，以及空間分辨率和令人滿意的生物相容性而普遍受到青睞(angew.chem.int.ed.2017,56,16611–16615；anal.chem.2016,76,166–181)。已經(jīng)報道了一些用于檢測hcy的熒光探針(angew.chem.int.ed.2018,57,4991；analyst,2022,147,2470)，但是很難比率檢測同型半胱氨酸。并且同型半胱氨酸和半胱氨酸結(jié)構(gòu)相似，難以區(qū)分，因此，對于高選擇性比率檢測而無其他物質(zhì)的干擾，尤其困難，是目前研究的難題之一。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本申請的目的在于提供一種高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針及其制備方法、使用其檢測同型半胱氨酸及對同型半胱氨酸成像的方法，以解決上述問題。
2、為實現(xiàn)以上目的，本申請采用以下技術(shù)方案：
3、一種高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針，所述比率熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：
4、
5、本申請還提供一種所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，包括：
6、將11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h,5h,11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羧酸加入無水二氯甲烷中，再加入4-二甲氨基吡啶，攪拌后加入1-boc-哌嗪和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽進行第一反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后進行第一分離純化得到4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h，5h，11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯；
7、將所述4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h，5h，11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯加入無水二氯甲烷中，然后再加入三氟乙酸進行第二反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后去除溶劑，進行第二分離純化得到4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h，5h，11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-鎓2,2,2-三氟乙酸鹽；
8、將(e)-2-(2-(4-(丁硫基)-7-(二乙基氨基)-6-硝基-2-氧代-2h-色烯-3-基)-1-氰基乙烯基)苯并[d]噻唑-6-羧酸加入無水二氯甲烷中，再加入4-二甲氨基吡啶，進行第三反應(yīng)后加入所述4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h，5h，11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-鎓2,2,2-三氟乙酸鹽，攪拌后再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽進行第四反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后去除溶劑，進行第三分離純化得到所述比率熒光探針。
9、優(yōu)選地，所述(e)-2-(2-(4-(丁硫基)-7-(二乙基氨基)-6-硝基-2-氧代-2h-鉻烯-3-基)-1-氰基乙烯基)苯并[d]噻唑-6-羧酸和所述4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h，5h，11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-鎓2,2,2-三氟乙酸摩爾比為1:1。
10、優(yōu)選地，所述第一反應(yīng)、所述第二反應(yīng)、所述第三反應(yīng)、所述第四反應(yīng)均在常溫下進行。
11、優(yōu)選地，所述第一分離純化、所述第二分離純化、所述第三分離純化均采用柱層析進行。
12、本申請還提供一種使用所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針檢測同型半胱氨酸的方法，包括：
13、將所述比率熒光探針用溶劑溶解后與含同型半胱氨酸體系進行反應(yīng)，測量650nm紅色熒光強度和505nm綠色熒光強度，計算所述650nm紅色熒光強度和所述505nm綠色熒光強度的比值，進而得到所述含同型半胱氨酸體系中的同型半胱氨酸的含量。
14、優(yōu)選地，所述溶劑為二甲基亞砜和pbs的混合溶液。
15、優(yōu)選地，所述混合溶液中，所述二甲基亞砜和所述pbs的體積比為5：5。
16、優(yōu)選地，所述測量在450nm的激發(fā)波長條件下進行。
17、本申請還提供一種使用所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針對同型半胱氨酸成像的方法，包括：
18、在含有同型半胱氨酸的細胞、組織或活體中加入所述比率熒光探針，然后進行培養(yǎng)；
19、在共聚焦熒光顯微鏡下照相，分別用490-550nm的綠色通道和580-700nm的近紅外熒光通本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針，其特征在于，所述比率熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：
2.一種權(quán)利要求1所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，包括：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述(E)-2-(2-(4-(丁硫基)-7-(二乙基氨基)-6-硝基-2-氧代-2H-鉻烯-3-基)-1-氰基乙烯基)苯并[d]噻唑-6-羧酸和所述4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1H，5H，11H-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-鎓2,2,2-三氟乙酸摩爾比為1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述第一反應(yīng)、所述第二反應(yīng)、所述第三反應(yīng)、所述第四反應(yīng)均在常溫下進行。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述第一分離純化、所述第二分離
6.一種使用權(quán)利要求1所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針檢測同型半胱氨酸的方法，其特征在于，包括：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針檢測同型半胱氨酸的方法，其特征在于，所述溶劑為二甲基亞砜和PBS的混合溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的使用所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針檢測同型半胱氨酸的方法，其特征在于，所述混合溶液中，所述二甲基亞砜和所述PBS的體積比為5：5。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項所述的使用所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針檢測同型半胱氨酸的方法，其特征在于，所述測量在450nm的激發(fā)波長條件下進行。
10.一種使用權(quán)利要求1所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針對同型半胱氨酸成像的方法，其特征在于，包括：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針，其特征在于，所述比率熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：
2.一種權(quán)利要求1所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，包括：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述(e)-2-(2-(4-(丁硫基)-7-(二乙基氨基)-6-硝基-2-氧代-2h-鉻烯-3-基)-1-氰基乙烯基)苯并[d]噻唑-6-羧酸和所述4-(11-氧代-2,3,6,7-四氫-1h，5h，11h-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-羰基)哌嗪-1-鎓2,2,2-三氟乙酸摩爾比為1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光探針的制備方法，其特征在于，所述第一反應(yīng)、所述第二反應(yīng)、所述第三反應(yīng)、所述第四反應(yīng)均在常溫下進行。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項所述的高選擇性檢測結(jié)直腸癌標志物同型半胱氨酸的比率熒光...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周慧俊，王建華，李婷，劉英，楊曉琳，劉武，白飛，尹鵬，劉典，
申請(專利權(quán))人：湖南省腫瘤醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。