【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種功能性脂質體及其制備方法和應用，具體涉及線粒體遞送槲皮素的ros敏感型脂質體納米粒的制備及應用，屬于脂質體。
技術介紹
1、細顆粒物(pm2.5)因其對健康的不利影響而成為主要的公共健康問題。由其誘發的疾病和導致死亡的人數逐年增多。越來越多的證據表明，pm2.5對慢性阻塞性肺病、哮喘和特發性肺纖維化等呼吸系統疾病發展有著重要影響，pm2.5沉積在肺組織，可引起肺組織和細胞的病理性損傷，特別是造成線粒體結構與功能的異常改變。研究已經證明，線粒體是pm2.5的主要目標，pm2.5以劑量依賴的方式導致細胞中的nox4/nrf2氧化還原失衡以引發氧化應激促使線粒體ros生成明顯增加，膜電位下降，顯著升高線粒體裂變蛋白cyto-c、aif和drp1的水平，并抑制線粒體代謝蛋白sirt3的表達，造成線粒體損傷；同時，pm2.5可促進自噬蛋白lc3-ii、atg3的表達，抑制p62、mtor的表達水平，導致線粒體空泡化，線粒體結構被破壞；pm2.5暴露還會導致線粒體融合蛋白mfn2的水平下降，裂變蛋白fis1的水平增加，atp的水平下降，增加線粒體通透性轉變孔隙開口來破壞線粒體穩態。
2、槲皮素是一種重要的黃酮類化合物，廣泛存在于多種植物中。槲皮素具有良好的抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、抗炎癥、抗菌等作用。槲皮素可不依賴于其清除自由基的特性而發揮治療md的作用。槲皮素可顯著降低外界刺激誘導的mtros水平，抑制drp1的表達和線粒體去極化，恢復δψm，減輕mtdna的損傷，改善線粒體形態和數量，還可抑制重金屬離子誘
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種用于線粒體遞送槲皮素的ros敏感型脂質體納米粒(qu@nps)的制備及應用。
2、本專利技術是通過如下技術方案實現的：
3、一種qu@nps的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4、第1步、合成ros敏感鍵
5、ros響應元件tk-cooh，合成tk-cooh的步驟如下：
6、(1)將適量3-巰基丙酸緩慢滴入裝有過量的無水丙酮的圓底燒瓶中，并置于冰水浴中；
7、(2)向上述圓底燒瓶中緩慢滴加適量三氟乙酸，并置于磁力攪拌機上，在恢復室溫后繼續攪拌反應12h；
8、(3)反應結束后將混合物置于冰上至完全結晶以淬滅反應，過濾得到沉淀，用冷的正己烷和冰水洗滌，干燥，得到tk-cooh；
9、第2步、合成線粒體靶向、ros敏感的脂質體
10、線粒體靶向、ros敏感的脂質體為dtpt，合成dtpt的步驟如下：
11、均勻，將混合物置于干燥的圓底燒瓶中，并向圓底燒瓶中加入氯仿/dmf混合溶劑，得到混合溶液，隨后置于磁力攪拌機上，室溫反應24h，反應結束后于冰水浴停止反應，使用旋轉蒸發器除去溶劑得到固體，洗滌，并使用透析袋在去離子水中透析24h，干燥，得到dspe-tk-cooh；
12、(2)將tpp-cooh、peg2000、dmap和edci按照摩爾比1～1.2:1:3～6:1～3混合均勻，將混合物置于干燥的圓底燒瓶中，并向圓底燒瓶中加入氯仿，得到混合溶液，隨后置于磁力攪拌機上，室溫反應24h，反應結束后于冰水浴停止反應，使用旋轉蒸發器除去溶劑得到固體，洗滌，并使用透析袋在去離子水中透析24h，干燥，得到peg2000-tpp；
13、(3)將前兩步制備得到的dspe-tk-cooh、peg2000-tpp和dmap、edci按照摩爾比1～1.2:1～1.2:3～6:1～3混合均勻，將混合物置于干燥的圓底燒瓶中，并向圓底燒瓶中加入氯仿/dmf混合溶劑，得到混合溶液，隨后置于磁力攪拌機上，室溫反應24h，反應結束后于冰水浴停止反應，使用旋轉蒸發器除去溶劑得到固體，洗滌，并使用透析袋在去離子水中透析24h，干燥，得到dtpt；
14、第3步、制備qu@nps
15、制備qu@nps的具體步驟如下：
16、將槲皮素、大豆卵磷脂、膽固醇、dtpt按照質量比1～1.5:8～24:4～12:4～12置于干燥的圓底燒瓶中，并加入一定量的氯仿/乙醇混合溶劑，充分混勻后旋轉蒸發2h，徹底蒸干溶劑，冷卻至室溫，加入去離子水水合，并加入適量全氟溴辛烷，水和完全后使用細胞破碎儀進行超聲剪切處理，將較大顆粒破碎為小納米粒，最終得到線粒體遞送槲皮素的ros敏感型脂質體納米粒。
17、前述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第1步中，3-巰基丙酸和無水丙酮的摩爾比為1:2。
18、前述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第1步中，三氟乙酸與3-巰基丙酸的摩爾比為1:2～10。
19、前述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第2步中，氯仿與dmf的比例為9:1，v/v。
20、前述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第2步中，溶劑與混合物的比例為1:9，g/ml。
21、前述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第3步中，氯仿與乙醇的比例為8:2，v/v。
22、前述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第3步中，混合物與溶劑的比例為1:3，mg/ml。
23、一種qu@nps的制備方法，其特征在于，由前述方法制備而來，該線粒體遞送槲皮素的ros敏感型脂質體納米粒主要應用于治療pm2.5誘導的線粒體功能障礙。
24、本專利技術有益之處在于：
25、(1)本專利技術使用合成的功能性脂質體、大豆卵磷脂和膽固醇按適當的比例作為脂質體外殼，有效實現了親脂性藥物槲皮素的載藥，改善了槲皮素的溶解性和生物利用度；
26、(2)本專利技術以親脂性材料包裹槲皮素，提高了細胞膜的穿透能力，延長槲皮素代謝時間，降低直接給藥的峰谷現象；
27、(3)本專利技術通過引入線粒體靶向基團tpp-cooh和ros敏感基團tk-cooh，使槲皮素選擇性的富集于線粒體內部，可選擇性的控制槲皮素在ros環境下的釋放，增強槲皮素抗線粒體功能障礙的能力，降低槲皮素的給藥劑量，消除全身給藥的毒副作用；
28、(4)本專利技術制備的qu@nps可有效進入線粒體內部，抑制pm2.5誘導的ros水平升高和線粒體膜電位降低。
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1.一種用于線粒體遞送槲皮素的ROS敏感型脂質體納米粒(Qu@NPs)的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種Qu@NPs的制備方法，其特征在于，第1步中，3-巰基丙酸和無水丙酮的摩爾比為1:2。
3.根據權利要求1所述的一種Qu@NPs的制備方法，其特征在于，第1步中，三氟乙酸與3-巰基丙酸的摩爾比為1:2～10。
4.根據權利要求1所述的一種Qu@NPs的制備方法，其特征在于，第2步中，氯仿與DMF的比例為9:1，v/v。
5.根據權利要求1所述的一種Qu@NPs的制備方法，其特征在于，第2步中，溶劑與混合物的比例為1:9，g/ml。
6.根據權利要求1所述的一種Qu@NPs的制備方法，其特征在于，第3步中，氯仿與乙醇的比例為8:2，v/v。
7.根據權利要求1所述的一種Qu@NPs的制備方法，其特征在于，第3步中，混合物與溶劑的比例為1:3，mg/ml。
8.一種Qu@NPs，其特征在于，由權利要求1至7任意一項所述方法制備而來。
9.權利要求8所述的
10.Qu@NPs的制備方法，其特征在于，由權利要求1所述方法制備而來。
...【技術特征摘要】
1.一種用于線粒體遞送槲皮素的ros敏感型脂質體納米粒(qu@nps)的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第1步中，3-巰基丙酸和無水丙酮的摩爾比為1:2。
3.根據權利要求1所述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第1步中，三氟乙酸與3-巰基丙酸的摩爾比為1:2～10。
4.根據權利要求1所述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于，第2步中，氯仿與dmf的比例為9:1，v/v。
5.根據權利要求1所述的一種qu@nps的制備方法，其特征在于...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅晶，張華，王朝平，熊耀坤，羅俊輝，段芳梅，查文菁，
申請(專利權)人：江西中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：
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