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    一種鑒定小麥粒重的KASP分子標記及應用制造技術
    
                            
    技術編號：44368633 閱讀：3 留言：0更新日期：2025-02-25 09:47
    
                        
    
                        
    
                            
                            本發明專利技術涉及基因工程技術領域，公開了一種鑒定小麥粒重的KASP分子標記及應用。本發明專利技術的SNP位點位于小麥2A染色體第153452675?bp處，多態性是G/A。本發明專利技術通過千粒重的表型差異分析和外顯子捕獲分析得到一個和植物的千粒重相關的SNP位點，并針對該SNP位點設計相應的KASP引物組合。本發明專利技術提供的KASP引物組合可以準確、快速地鑒定小麥的千粒重大小，在植物高產的育種中具有重要意義。
    
                            
                            
    


    
                            

                            
    【技術實現步驟摘要】
    
                                
    本專利技術涉及基因工程，具體地說，涉及一種鑒定小麥粒重的kasp分子標記及應用。

    技術介紹
    1、小麥（
              triticum?aestivuml.）種植面積廣、產量高，是現有重要的糧食作物之一。千粒重決定小麥的株型和抗倒伏性，是影響產量的重要性狀。
          
    2、外顯子捕獲測序是一種用于提取并測序基因組中的外顯子（所有外顯子的集合），并在單個生物體樣本中獲得外顯子變異的方法。該方法使得研究能夠快速聚焦于基因組中最有可能影響表型變異的部分。kasp?(kompetitive?allele?specific?pcr，競爭性等位基因特異性pcr)，是基于snp位點開發的分子標記，具有高度穩定性、準確性和低成本等特點，已經被廣泛應用于高通量snp分型，尤其在樣本量大snp位點少時，kasp的應用更為顯著。
    3、小麥?(
              triticum?aestivuml.)?是世界上最重要的糧食作物之一，在我國更是僅次于水稻的第二大口糧作物。提升小麥產量越來越成為小麥前沿領域研究的焦點。
          

    技術實現思路
    1、本專利技術的目的是提供一種鑒定小麥粒重的kasp分子標記及應用。
    2、為了實現本專利技術目的，第一方面，本專利技術提供一種鑒定小麥粒重的kasp分子標記，其為與植物千粒重相關的snp分子標記，所述分子標記含有小麥2a染色體第153452675?bp處的多態性為g/a的核苷酸序列。</p>
    3、進一步地，所述分子標記所含多態性位點的基因型為aa相較于基因型為gg的植物，具備更高的千粒重。
    4、第二方面，本專利技術提供用于擴增所述分子標記的kasp引物組合，包括如seq?idno:1所示的正向引物1（aggagcgcaagctggagaccgg）、如seq?id?no:2所示的正向引物2（aggagcgcaagctggagaccga）和如seq?id?no:3所示的反向引物（cttgctcttgtgtcgcgcccgt）。
    5、進一步地，所述kasp引物組合中正向引物1、正向引物2的5′端還可以連接熒光標記序列，例如fam?(gaaggtgaccaagttcatgct)或hex?(gaaggtcggagtcaacggatt）。
    6、在本專利技術一個具體實施方式中，所述kasp引物組合如下：
    7、153452675-f1：5’-gaaggtgaccaagttcatgctaggagcgcaagctggagaccgg-3’；（seqid?no:4）
    8、153452675-f2：5’-gaaggtcggagtcaacggattaggagcgcaagctggagaccga-3’；（seqid?no:5）
    9、153452675-r：5’-cttgctcttgtgtcgcgcccgt-3’（seq?id?no:3）。
    10、第三方面，本專利技術提供還提供含有所述引物組合的檢測試劑或試劑盒。
    11、第四方面，本專利技術提供一種鑒定植物千粒重（高低、大小）的方法，包括：以待測植物樣品的dna為模板，采用所述kasp引物組合或所述檢測試劑或試劑盒進行pcr擴增，根據擴增結果判斷所述待測植物樣品的千粒重。
    12、優選地，以總體系10?μl計，pcr擴增采用的體系包括：2×kasp?mix?4~6?μl、引物混合物0.12~0.16?μl、dna模板25~35?ng，余量為水。
    13、所述引物混合物以100?μl計，包括：100?μm正向引物1?10~14?μl，100?μm正向引物2?10~14?μl，100?μm反向引物28~32?μl，余量為水。
    14、優選地，pcr擴增采用的反應程序為：95℃?8~12?min；95℃?15~25?s，61℃?60?s，8~12個循環，每個循環退火溫度降低0.5℃~0.7℃；95℃?15~25?s，55℃?35~45?s，32~36個循環；25℃?10~20?min。
    15、進一步地，根據擴增結果判斷所述待測植物樣品的千粒重包括：對擴增產物中所述分子標記所含多態性位點的基因型進行分析，基因型為aa相較于基因型為gg的植物，具備更高的千粒重。
    16、進一步地，所述植物為小麥。
    17、第五方面，本專利技術提供所述分子標記、所述分子標記組合或所述檢測試劑或試劑盒的以下任一應用：
    18、（1）用于小麥千粒重的鑒定、選育及改良；
    19、（2）用于小麥千粒重性狀的早期預測；
    20、（3）用于小麥分子標記輔助育種；
    21、（4）用于篩選或培育高產植物。
    22、借由上述技術方案，本專利技術至少具有下列優點及有益效果：
    23、（一）本專利技術通過千粒重的表型差異分析和外顯子捕獲測序技術分析得到一個基因的snp位點，該snp位點和植物的千粒重這一表型密切相關，通過對該snp位點的多態性進行檢測可準確、快速地鑒定植物是否具備高千粒重，針對該位點的標記具有遺傳穩定性好、分辨率高、適合高通量檢測應用等優點。
    24、（二）本專利技術提供的snp位點以及相應的kasp引物組合不僅可以用于植物千粒重高低的鑒定，還能夠用于提高植物品種的選擇效率，縮短育種周期，加快高產量植物的領域具有重要應用價值。
    本文檔來自技高網...
                            
    
                            
    【技術保護點】
    
                                
    1.一種鑒定小麥粒重的KASP分子標記，其特征在于，其為與植物千粒重相關的SNP分子標記，所述分子標記含有小麥2A染色體第153452675?bp處的多態性為G/A的核苷酸序列。
    2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，所述分子標記所含多態性位點的基因型為AA相較于基因型為GG的植物，具備更高的千粒重。
    3.用于擴增權利要求1或2所述分子標記的KASP引物組合，其特征在于，包括如SEQ?IDNO:1所示的正向引物1、如SEQ?ID?NO:2所示的正向引物2和如SEQ?ID?NO:3所示的反向引物。
    4.含有權利要求3所述的引物組合的檢測試劑或試劑盒。
    5.一種鑒定植物千粒重的方法，其特征在于，包括：以待測植物樣品的DNA為模板，采用權利要求3所述KASP引物組合或權利要求4所述檢測試劑或試劑盒進行PCR擴增，根據擴增結果判斷所述待測植物樣品的千粒重。
    6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，以總體系10?μL計，PCR擴增采用的體系包括：2×KASP?Mix?4~6?μL、引物混合物0.12~0.16?μL、DNA模板25~35?ng，余量為水；
    7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，PCR擴增采用的反應程序為：95℃?8~12min；95℃?15~25?s，61℃?60?s，8~12個循環，每個循環退火溫度降低0.5℃~0.7℃；95℃?15~25?s，55℃?35~45?s，32~36個循環；25℃?10~20?min。
    8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，根據擴增結果判斷所述待測植物樣品的千粒重包括：對擴增產物中所述分子標記所含多態性位點的基因型進行分析，基因型為AA相較于基因型為GG的植物，具備更高的千粒重。
    9.根據權利要求5-8任一項所述的方法，其特征在于，所述植物為小麥。
    10.權利要求1或2所述分子標記、權利要求3所述KASP引物組合或權利要求4所述檢測試劑或試劑盒的以下任一應用：
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    【技術特征摘要】
    
                                
    1.一種鑒定小麥粒重的kasp分子標記，其特征在于，其為與植物千粒重相關的snp分子標記，所述分子標記含有小麥2a染色體第153452675?bp處的多態性為g/a的核苷酸序列。
    2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，所述分子標記所含多態性位點的基因型為aa相較于基因型為gg的植物，具備更高的千粒重。
    3.用于擴增權利要求1或2所述分子標記的kasp引物組合，其特征在于，包括如seq?idno:1所示的正向引物1、如seq?id?no:2所示的正向引物2和如seq?id?no:3所示的反向引物。
    4.含有權利要求3所述的引物組合的檢測試劑或試劑盒。
    5.一種鑒定植物千粒重的方法，其特征在于，包括：以待測植物樣品的dna為模板，采用權利要求3所述kasp引物組合或權利要求4所述檢測試劑或試劑盒進行pcr擴增，根據擴增結果判斷所述待測植物樣品的千粒重。
    6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，以總體系...
                            
    
                            
    【專利技術屬性】
    
                                技術研發人員：李愛麗，崔達達，毛龍，耿帥鋒，劉少帥，車育青，
    
        申請(專利權)人：中國農業科學院作物科學研究所，
    
        類型：發明
    
        國別省市：
    
                            
    
                            
                        
    
                    
    
                    
                    
                     
                
    
                
                
    
                    
    
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