【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于食源性生物活性肽開發，具體涉及到一種具有ace抑制活性的蓮子蛋白肽及其應用。
技術介紹
1、高血壓是一種常見病，此病一般起病較慢，典型癥狀包括頭痛、疲倦或不安、心律失常、心悸耳鳴等，治療不當會引起腦中風、心肌梗死、腎功能衰竭等其他健康問題，收縮壓過高每年可導致全球超過1000萬人死亡。臨床上采用的降壓藥類型分為血管緊張素轉換酶抑制劑(acei)、β-受體阻斷劑、鈣通道阻斷劑、利尿劑等，多以acei為主；目前為止，合成的降壓藥物卡托普利、賴諾普利等acei雖然具有很好的降壓作用，但長期服用會存在著一定的副作用，如竇性心律過速、下壁心肌梗死、咳嗽、眩暈等。尋找安全有效的能夠發揮ace抑制作用從而達到降血壓功效的生物活性物質成為迫切需求。
2、血壓的調節機制較為復雜，包括腎素-血管緊張素系統(raas系統)和激肽釋放酶-激肽系統(kks系統)，在raas系統中，由肝臟釋放的血管緊張素i(angi)會經血管緊張素酶(ace酶)的作用進一步水解成具有收縮血管功能的血管緊張素ii(angii)，從而使得機體血壓升高，同時，angii與受體at1結合釋放醛固酮(ald)，促進水和鈉離子的重吸收作用，引起鈉濃度升高和血容量增加，致使機體血壓升高。
3、許多食源性蛋白質本身并不具有降血壓活性，但是通過酶解或者發酵，其中的蛋白質被分解后釋放出具有降血壓活性的肽段。目前，已從多種食源性蛋白質中分離出大量高活性的ace抑制肽，表現出較好的降血壓效果。例如公開號cn115947781a的專利公開了以發酵小麥為原料生產
技術實現思路
1、本部分的目的在于概述本專利技術的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和專利技術名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和專利技術名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本專利技術的范圍。
2、鑒于上述和/或現有技術中存在的問題，提出了本專利技術。
3、因此，本專利技術的目的是，克服現有技術中的不足，提供一種具有ace抑制活性的蛋白肽。
4、為解決上述技術問題，本專利技術提供了如下技術方案：一種具有ace抑制活性的蛋白肽，其特征在于所述蛋白肽的氨基酸序列為wvpryfpf，即trp-val-pro-arg-tyr-phe-pro-phe。
5、本專利技術的再一個目的是，克服現有技術中的不足，提供一種蛋白肽在制備降壓產品中的應用。
6、本專利技術的再一個目的是，克服現有技術中的不足，提供一種具有ace抑制活性的蛋白肽篩選鑒定的方法，其特征在于：包括，
7、采用堿溶酸沉法從蓮子粉中提取蓮子蛋白；
8、利用蛋白酶水解蓮子蛋白產生蓮子肽；
9、超濾進行分離純化，選擇活性幾乎是超濾前兩倍的＜3kda的組分進行測序；
10、通過多肽組學對＜3kda的蓮子肽進行測序；
11、篩選潛在高活性的ace抑制肽；
12、利用分子對接技術對篩選得到的肽段進行驗證；
13、計算機模擬胃腸消化；
14、體外固相合成并驗證ace抑制活性。
15、作為本專利技術所述方法的一種優選方案，其中：所述采用堿溶酸沉法從蓮子粉中提取蓮子蛋白，其中，蓮子粉與水的料液比為1：10～1：25。
16、作為本專利技術所述方法的一種優選方案，其中：所述利用蛋白酶水解蓮子蛋白產生蓮子肽，其中，所述水解的溫度為45～60℃，ph＝6.5～8.5。
17、作為本專利技術所述方法的一種優選方案，其中：所述篩選潛在高活性的ace抑制肽，包括：在peptideranker中對肽段進行生物活性預測評分；在蛋白數據庫中查詢肽段的蛋白質來源；通過toxinpred進行毒性預測；通過allertop進行致敏性預測；從測序的肽段中選擇蛋白來源的，未被功能基團修飾的，峰面積大于1.00×107，活性評分>0.8，3-12個氨基酸序列，不具有毒性和致敏性并且還未公開的序列，同時篩選c末端和n末端同時具有疏水性氨基酸的肽段。
18、作為本專利技術所述方法的一種優選方案，其中：所述利用分子對接技術對篩選得到的肽段進行驗證，包括：
19、ace酶pdb文件的準備：從蛋白質數據庫中檢索ace酶的蛋白質晶體結構，從1o86中去除多余的配體與h2o以便進行后續與肽段的對接實驗；
20、篩選出的肽序列與1o86對接后獲得結合能，根據結合能的大小進行潛在的ace抑制活性評估，分子對接結合能越低表明ace抑制的潛在活性越強。
21、作為本專利技術所述方法的一種優選方案，其中：所述篩選得到的肽段的分子對接結合能均小于-9.4kcal/mol。
22、作為本專利技術所述方法的一種優選方案，其中：所述計算機模擬胃腸消化，包括：通過biopep數據庫中的biopep-uwm：analysis功能對肽段進行酶切；選取凝乳胰蛋白酶a、胰蛋白酶、胃蛋白酶進行模擬酶切。
23、本專利技術有益效果：
24、(1)本專利技術提取的蓮子肽與其余十種植物來源ace抑制肽相比，具有較高的體外ace抑制活性。
25、(2)本專利技術有效地從蓮子蛋白肽中鑒定出高活性ace抑制肽wvpryfpf，其ic50為16.7μm。分子對接結果顯示，對接結合能為-12.1kcal/mol，wvpryfpf與ace活性口袋中的his353、his513兩個殘基形成口袋氫鍵，與asn66、arg124、trp220、tyr360、ser517、arg522六個殘基形成非口袋氫鍵，與tyr62、glu123、arg124、glu143、ile204、ala207、trp357、phe512、val518九個殘基形成疏水相互作用。
26、(3)本專利技術首次從蓮子蛋白中分離得到一種具有ace抑制作用的蓮子蛋白肽，所述多肽經過自發性高血壓大鼠(shr)實驗驗證，具有良好的降低shr大鼠體內血壓的特性，并在蓮子肽干預的2周后開始呈現良好的降血壓效果。因此，本專利技術提供的蓮子肽能夠用于體外抑制ace酶活性以及制備降壓類藥物，豐富了降壓藥的種類，大大提高了蓮子蛋白的藥用價值。
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1.一種具有ACE抑制活性的蛋白肽，其特征在于所述蛋白肽的氨基酸序列為WVPRYFPF，即Trp-Val-Pro-Arg-Tyr-Phe-Pro-Phe。
2.如權利要求1所述的蛋白肽在制備降壓產品中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述產品為保健食品、藥用或化學品。
4.如權利要求1所述的具有ACE抑制活性的蛋白肽篩選鑒定的方法，其特征在于：包括，
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述采用堿溶酸沉法從蓮子粉中提取蓮子蛋白，其中，蓮子粉與水的料液比為1：10～1：25。
6.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述利用蛋白酶水解蓮子蛋白產生蓮子肽，其中，所述水解的溫度為45～60℃，pH＝6.5～8.5。
7.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述篩選潛在高活性的ACE抑制肽，包括：在PeptideRanker中對肽段進行生物活性預測評分；在蛋白數據庫中查詢肽段的蛋白質來源；通過Toxinpred進行毒性預測；通過AllerTOP進行致敏性預測；從測序的肽段中選擇蛋白來源的，未被功能
8.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述利用分子對接技術對篩選得到的肽段進行驗證，包括：
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述篩選得到的肽段的分子對接結合能均小于-9.4kcal/mol。
10.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述計算機模擬胃腸消化，包括：通過BIOPEP數據庫中的BIOPEP-UWM：ANALYSIS功能對肽段進行酶切；選取凝乳胰蛋白酶A、胰蛋白酶、胃蛋白酶進行模擬酶切。
...【技術特征摘要】
1.一種具有ace抑制活性的蛋白肽，其特征在于所述蛋白肽的氨基酸序列為wvpryfpf，即trp-val-pro-arg-tyr-phe-pro-phe。
2.如權利要求1所述的蛋白肽在制備降壓產品中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述產品為保健食品、藥用或化學品。
4.如權利要求1所述的具有ace抑制活性的蛋白肽篩選鑒定的方法，其特征在于：包括，
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述采用堿溶酸沉法從蓮子粉中提取蓮子蛋白，其中，蓮子粉與水的料液比為1：10～1：25。
6.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述利用蛋白酶水解蓮子蛋白產生蓮子肽，其中，所述水解的溫度為45～60℃，ph＝6.5～8.5。
7.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述篩選潛在高活性的ace抑制肽，包括：在peptider...
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