【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種抗大豆花葉病毒的分子標記引物組、試劑盒及其應用。
技術介紹
1、大豆花葉病毒(soybean?mosaic?virus，smv)是一種嚴重威脅全球大豆產業的植物病毒，主要侵染大豆植株，導致其出現花葉和畸形等明顯癥狀。這些病癥直接影響光合作用，嚴重情況下，受感染的大豆田塊產量可能下降30％至50％，經濟損失較大。
2、傳統的育種方法時間長且效率低，目前分子輔助選擇(marker-assistedselection，mas)是鑒定和篩選抗性材料較為有效便捷的技術。該技術利用分子標記來輔助對作物進行選擇和育種，通過對應的分子標記，育種者可以在早期階段就確定材料的抗病性，節省了大量的時間和資源。目前較常用的分子標記類型有ssr、snp、caps、基因芯片等，但這些標記的檢測方法程序繁瑣或者花費較多，難以用于大量的育種材料篩選。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種抗大豆花葉病毒的分子標記引物組、試劑盒及其應用，利用本專利技術所述分子標記引物組擴增得到的產物呈共顯性結果，無需設置對照，成本低，可短時間內高通量地對育種材料進行基因型檢測，節約時間和精力。
2、本專利技術提供了一種抗大豆花葉病毒的分子標記引物組，所述分子標記引物組包括：基于rsc3k基因組序列設計的引物組；
3、所述rsc3k基因組序列包括：感病品種的兩個等位基因loc100526921和loc100812666各發生一段缺失后重組而成。
5、所述jt1229-f的基因序列如seq?id?no.1所示；
6、所述jt1229-r1的基因序列如seq?id?no.2所示；
7、所述jt1229-r2的基因序列如seq?id?no.3所示。
8、本專利技術提供了上述的分子標記引物組在制備抗性鑒定試劑盒中的應用。
9、作為一種優選方案，所述抗性包括：抗大豆花葉病毒。
10、本專利技術提供了一種抗性鑒定試劑盒，包括上述的分子標記引物組和常規pcr試劑。
11、本專利技術提供了一種抗性鑒定方法，包括以下步驟：提取待測樣本的基因組dna，利用上述的分子標記引物組或上述試劑盒中的分子標記引物組進行pcr擴增，根據擴增結果進行抗性鑒定。
12、作為一種優選方案，當利用所述分子標記引物組擴增到1.5kb的產物，待測樣本為含rsc3k型；
13、當利用所述分子標記引物組擴增到1.0kb的產物，待測樣本為不含rsc3k型。
14、作為一種優選方案，所述分子標記引物組的各引物的使用終濃度為0.20～0.25μm/條。
15、作為一種優選方案，所述pcr擴增的反應體系以50μl計，包括：上游引物1μl，下游引物各0.5μl，dna模板1μl，2×taq?dna聚合酶25μl和余量的超純水。
16、本專利技術還提供了上述的分子標記引物組或上述的試劑盒或上述抗性鑒定方法在抗性育種中的應用。
17、有益效果：本專利技術提供了一種抗大豆花葉病毒的分子標記引物組，所述分子標記引物組包括：基于rsc3k基因組序列設計的引物組；所述rsc3k基因組序列包括：感病品種的兩個等位基因loc100526921和loc100812666各發生一段缺失后重組而成。本專利技術涉及的分子標記類型為插入-缺失(insertion-deletion，indel)標記，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測樣品的基因型。相比其他類型的分子標記如簡單重復序列(simple?sequence?repeat，ssr)、單核苷酸多態性(single?nucleotide?polymorphism，snp)、酶切擴增多態性序列(c1eavedamplified?polymorphic?sequences，caps)等操作簡單，產物呈共顯性結果，無需設置對照，成本低，可短時間內高通量地對育種材料進行基因型檢測，節約時間和精力。
18、由ssr引物擴增的產物往往需要聚丙烯酰胺凝膠電泳，耗時長且程序繁瑣；利用snp鑒定的序列需要測序反應來完成，利用caps鑒定的序列需要內切酶的參與，兩者成本較高，不適用于育種材料的篩選。利用本專利技術的indel引物擴增得到的產物間存在較大的長度差異，可使用瓊脂糖凝膠電泳實現大量材料的篩選，是目前輔助選擇育種較為理想的選擇。本專利技術的分子標記則省略了內參對照的步驟，節省成本，提高檢測效率。
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1.一種抗大豆花葉病毒的分子標記引物組，其特征在于，所述分子標記引物組包括：基于RSC3K基因組序列設計的引物組；
2.根據權利要求1所述的分子標記引物組，其特征在于，所述分子標記引物組包括：一條上游引物JT1229-F，兩條下游引物JT1229-R1和JT1229-R2；
3.權利要求1或2所述的分子標記引物組在制備抗性鑒定試劑盒中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗性包括：抗大豆花葉病毒。
5.一種抗性鑒定試劑盒，其特征在于，包括權利要求1或2所述的分子標記引物組和常規PCR試劑。
6.一種抗性鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：提取待測樣本的基因組DNA，利用權利要求1或2所述的分子標記引物組或權利要求5所述試劑盒中的分子標記引物組進行PCR擴增，根據擴增結果進行抗性鑒定。
7.根據權利要求6所述的抗性鑒定方法，其特征在于，當利用所述分子標記引物組擴增到1.5kb的產物，待測樣本為含RSC3K型；
8.根據權利要求6所述的抗性鑒定方法，其特征在于，所述分子標記引物組的各
9.根據權利要求6所述的抗性鑒定方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系以50μL計，包括：上游引物1μL，下游引物各0.5μL，DNA模板1μL，2×Taq?DNA聚合酶25μL和余量的超純水。
10.權利要求1或2所述的分子標記引物組或權利要求5所述的試劑盒或權利要求6～9任一項所述抗性鑒定方法在抗性育種中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種抗大豆花葉病毒的分子標記引物組，其特征在于，所述分子標記引物組包括：基于rsc3k基因組序列設計的引物組；
2.根據權利要求1所述的分子標記引物組，其特征在于，所述分子標記引物組包括：一條上游引物jt1229-f，兩條下游引物jt1229-r1和jt1229-r2；
3.權利要求1或2所述的分子標記引物組在制備抗性鑒定試劑盒中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抗性包括：抗大豆花葉病毒。
5.一種抗性鑒定試劑盒，其特征在于，包括權利要求1或2所述的分子標記引物組和常規pcr試劑。
6.一種抗性鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：提取待測樣本的基因組dna，利用權利要求1或2所述的分子標記引物組或權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：晉彤彤，王幸，王好讓，李思夢，徐澤俊，齊玉軍，邢興華，
申請(專利權)人：江蘇徐淮地區徐州農業科學研究所江蘇徐州甘薯研究中心，
類型：發明
國別省市：
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