【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫療模型構建，具體涉及一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷的小鼠模型構建方法。
技術介紹
1、人體的月經周期分為4個階段，增殖期、分泌期、月經期和再生期，維持正常的子宮內膜周期是保證女性生理功能和生殖功能的前提。但由于剖宮產手術、流產手術的頻繁應用，繼而引起的子宮內膜愈合不良、內膜再生障礙、子宮內膜容受性缺陷等問題嚴重影響了育齡女性的生育率。許多研究者認為刮宮和宮腔手術是引起子宮內膜修復異常、血管分布紊亂、腺體稀疏、子宮內膜變薄的重要原因，進而引起胚胎異常、復發性妊娠丟失、不孕及一系列婦科疾病，嚴重影響女性的生活和健康。目前，中、重度子宮內膜損傷患者內膜大面積損傷后殘留量極少，臨床上現有的藥物治療效果不佳，間充質干細胞(mscs)作為一種具有強大的免疫調節功能和組織修復能力的細胞藥物，在修復子宮內膜方面效果良好，可防止子宮內膜炎及子宮粘連的復發，但其治療效率仍不足以滿足大多數患者的需求。臨床上亟需探索新的治療方法解決重度損傷患者治愈率低的問題。
2、目前現有的子宮內膜損傷模型建立方式為物理搔刮加脂多糖雙重誘導的形式，但這種造模方法不能很好的適配于臨床上反復刮宮引起不孕的生理過程，不能表征重度子宮內膜損傷患者的內膜損傷嚴重程度，并且無法模擬臨床中mscs治療無效的重度iua患者，因此本專利技術對原有造模方法進行改進，更加適配于反復的刮宮過程，建立重度的子宮內膜損傷以更好的模擬臨床mscs治療無效的重度iua患者，并為現有治療手段的進一步優化提供更大的空間，極具臨床價值和探索意義。
1、針對現有技術的不足，本專利技術的目的可以通過以下技術方案實現：
2、一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，所述構建方法包括下述步驟：
3、s1、選取雌性小鼠環境適應2-3天；
4、s2、小鼠環境適應后，第0天對小鼠進行麻醉，然后開腹對小鼠子宮內壁進行物理搔刮，搔刮完成后使用lps溶液對子宮內壁進行損傷誘導，然后縫合；
5、s3、第三天重復s2的步驟，重新對小鼠進行開腹、搔刮、lps誘導、縫合；
6、s4、第五天初步評估小鼠的重度子宮內膜損傷情況；
7、s5、向重度子宮內膜損傷的小鼠的宮內注射mscs治療子宮內膜損傷；
8、s6、第八天收取子宮樣本對mscs的修復能力進行評估，篩選得到mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型。
9、進一步地，步驟s1中所述小鼠為6-8周齡性成熟c57bl/6j雌性小鼠，飼養條件為：溫度為21～23℃，相對濕度為50-60％，12h循環晝夜節律，于spf級飼養室適應環境2～3天。
10、進一步地，步驟s2中物理搔刮的具體操作為：剔除小鼠腹部第4、5對乳頭間毛發，然后在腹部第4、5對乳頭間偏左側，做一長約1.0厘米縱向皮膚切口；使用無菌動脈夾夾住子宮角近輸卵管端，使用1ml注射器針頭在子宮角近陰道端刺穿一個小口，然后用預先磨鈍的1ml注射器針頭對子宮內壁進行搔刮，分別搔刮10次，直至小鼠子宮充血明顯，感到內壁粗糙為準。
11、進一步地，所述lps注射濃度為1μg/μl，注射體積為25μl。
12、進一步地，步驟s2中lps注射后子宮角近輸卵管端及近子宮端用血管夾固定防止液體漏出，保持時間5分鐘。
13、進一步地，步驟s4中的檢測指標包括子宮長度，he染色檢測子宮內膜面積、腺體數量，配種形成胚胎檢測胚胎個數、胚胎總重、內含胚胎的子宮長度。
14、進一步地，mscs給藥方式為宮內給藥，注射后子宮角近輸卵管端及近子宮端用血管夾固定防止液體漏出，保持時間5分鐘；mscs為細胞懸液，密度為1×107個/ml,注射體積為25μl。
15、進一步地，評估mscs的修復能力檢測指標包括子宮長度，he染色檢測子宮內膜面積、腺體數量，mscs的駐留量。
16、一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型由上述所述的一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法構建而成。
17、本專利技術的有益效果：本專利技術通過兩次開腹對子宮進行物理搔刮加脂多糖誘導的方式，更接近臨床上反復刮宮引起重度子宮內膜損傷患者的發病過程，更符合重度子宮內膜損傷患者的損傷嚴重程度，更好的模擬了臨床mscs治療無效的重度iua患者，具有廣闊的應用價值。
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1.一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括下述步驟：
2.根據權利要求1所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟S1中所述小鼠為6-8周齡性成熟C57BL/6J雌性小鼠，飼養條件為：溫度為21～23℃，相對濕度為50-60％，12h循環晝夜節律，于SPF級飼養室適應環境2～3天。
3.根據權利要求1所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟S2中物理搔刮的具體操作為：剔除小鼠腹部第4、5對乳頭間毛發，然后在腹部第4、5對乳頭間偏左側，做一長約1.0厘米縱向皮膚切口；使用無菌動脈夾夾住子宮角近輸卵管端，使用1mL注射器針頭在子宮角近陰道端刺穿一個小口，然后用預先磨鈍的1mL注射器針頭對子宮內壁進行搔刮，分別搔刮10次，直至小鼠子宮充血明顯，感到內壁粗糙為準。
4.根據權利要求1所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述LPS注射濃度為1μg/μL，注射體積為25μL。
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6.根據權利要求1所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟S4中的檢測指標包括子宮長度，HE染色檢測子宮內膜面積、腺體數量，配種形成胚胎檢測胚胎個數、胚胎總重、內含胚胎的子宮長度。
7.根據權利要求1所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，MSCs給藥方式為宮內給藥，注射后子宮角近輸卵管端及近子宮端用血管夾固定防止液體漏出，保持時間5分鐘；MSCs為細胞懸液，密度為1×107個/mL,注射體積為25μL。
8.根據權利要求1所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，評估MSCs的修復能力檢測指標包括子宮長度，HE染色檢測子宮內膜面積、腺體數量，MSCs的駐留量。
9.一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型由權利要求1～9任一所述的一種MSCs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法構建而成。
...【技術特征摘要】
1.一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括下述步驟：
2.根據權利要求1所述的一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟s1中所述小鼠為6-8周齡性成熟c57bl/6j雌性小鼠，飼養條件為：溫度為21～23℃，相對濕度為50-60％，12h循環晝夜節律，于spf級飼養室適應環境2～3天。
3.根據權利要求1所述的一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，步驟s2中物理搔刮的具體操作為：剔除小鼠腹部第4、5對乳頭間毛發，然后在腹部第4、5對乳頭間偏左側，做一長約1.0厘米縱向皮膚切口；使用無菌動脈夾夾住子宮角近輸卵管端，使用1ml注射器針頭在子宮角近陰道端刺穿一個小口，然后用預先磨鈍的1ml注射器針頭對子宮內壁進行搔刮，分別搔刮10次，直至小鼠子宮充血明顯，感到內壁粗糙為準。
4.根據權利要求1所述的一種mscs治療無效的重度子宮內膜損傷小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述lps注射濃度為1μg/μl，注射體積為25μl。
5.根據權利要求1所述的一種msc...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉嘉莉，周聰婷，黨玥，王廣基，周芳，
申請(專利權)人：中國藥科大學，
類型：發明
國別省市：
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