【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于免疫測定領域，更具體地說屬于藥代動力學免疫測定領域。本文報道了用于在干擾性單特異性抗體存在的情況下檢測含血清樣品中的雙特異性抗體的干擾抑制免疫測定等。
技術介紹
1、為了分析體外或體內來源的樣品中的治療性單克隆抗體(tmab)，需要進行相應的測定，尤其是在tmab開發的早期階段。這需要提供特異性結合試劑，例如用于確定tmab的抗獨特型抗體。
2、特別是對于tmab的完整藥代動力學評價，了解在類似治療條件下給藥后血漿/血清樣品中的可溶性tmab濃度很重要。
3、lee,j.w.,等人(aaps?j.13(2011)99-110)報告稱，支持藥物開發的生物分析的主要驅動因素是數據的預期用途。測量循環中的mab及其抗原配體(l)的可靠方法對于評估暴露-應答關系以支持療效和安全性評價以及劑量選擇至關重要。
4、de?zwart等人(bioanal.8(2016)2065-2070)在一份白皮書中報道了生物分析方法驗證中聯合用藥的干擾測試。de?zwart等人根據以往經驗使用的調查數據得出結論，對于計劃內和計劃外聯合用藥，不存在聯合用藥干擾試驗藥的lc-ms/ms測定的情況(數據來自389項觀察)，而對于基于lba的測定，調查數據僅確定了36項測定中報告干擾的一項。
5、配體結合測定(lba)廣泛用于分析蛋白質生物治療藥物和抗原配體(l)，以支持藥代動力學/藥效學(pk/pd)和安全性評估。
技術實現思路
1、本文報道了一種用于確
2、根據本專利技術的一個方面是一種用于確定含血清樣品中的多特異性治療性抗體，優選雙特異性抗體的方法，所述方法包括以下步驟：
3、a)將已經固定化有與所述治療性抗體特異性結合的捕獲抗體的固相與所述樣品一起孵育以形成固定化的捕獲抗體-治療性抗體-復合物，
4、b)任選地洗滌所述固相，其中所述捕獲抗體-治療性抗體-復合物保持與所述固相結合，
5、c)將所述固相與在空間上干擾所述捕獲抗體與所述治療性抗體的結合，或同所述捕獲抗體競爭與所述治療性抗體的結合，或同所述治療性抗體上和所述捕獲抗體相同的表位結合的替換抗體孵育，從而將治療性抗體從固相分離并形成包含替換抗體-治療性抗體-復合物的溶液，
6、d)在步驟c)中獲得的所述溶液中確定所述替換抗體-治療性抗體-復合物，從而確定含血清樣品中的所述治療性抗體。
7、根據本專利技術的進一步方面是一種用于從含血清樣品中富集治療性抗體，優選多特異性，最優選雙特異性抗體的方法，所述方法包括以下步驟：
8、a)將已經固定化有與所述治療性抗體特異性結合的捕獲抗體的固相與所述樣品一起孵育以形成固定化的捕獲抗體-治療性抗體-復合物，
9、b)任選地洗滌所述固相，其中所述捕獲抗體-治療性抗體-復合物保持與所述固相結合，
10、c)將所述固相與同所述捕獲抗體競爭與所述治療性抗體的結合的替換抗體一起孵育，并且由此將所述治療性抗體從所述固相分離，并形成包含替換抗體-治療性抗體-復合物的溶液，從而從含血清的樣品中富集所述治療性抗體。
11、在所有方面和實施例的一個實施例中，替換抗體是具有與捕獲抗體相同的特異性并且具有(稍微)更高親和力的抗體。在一個實施例中，替換抗體具有與治療性抗體結合的kd值(作為結合親和力的量度)，該值比捕獲抗體的kd值低一個數量級。
12、在所有方面和實施例的一個實施例中，捕獲抗體被生物素化，固相與鏈霉親和素綴合，并且通過抗體的生物素和固相的鏈霉親和素的相互作用來進行捕獲抗體的固定化。
13、在所有方面和實施例的一個實施例中，在免疫測定中進行替換抗體-治療性抗體-復合物的檢測。在一個實施例中，免疫測定是橋接免疫測定，優選橋接elisa。
14、在所有方面和實施例的一個實施例中，標記替換抗體，并且通過檢測所述標記來進行替換抗體-治療性抗體-復合物的確定。在一個實施例中，替換抗體與異羥基洋地黃毒苷綴合，并且通過抗異羥基洋地黃毒苷抗體來進行檢測。
15、在所有方面和實施例的一個實施例中，治療性抗體包含與第一抗原特異性結合的第一結合位點和與第二抗原特異性結合的第二結合位點。在一個實施例中，治療性抗體是雙特異性三價抗體，該治療性抗體具有一個與第一抗原特異性結合的結合位點和兩個與第二抗原特異性結合的結合位點。
16、在所有方面和實施例的一個實施例中，捕獲抗體或替換抗體或兩者都是抗獨特型抗體。在一個實施例中，捕獲抗體或替換抗體或兩者是與治療性抗體的第一結合位點特異性結合的抗獨特型抗體。
17、在所有方面和實施例的一個優選實施例中，捕獲抗體是針對雙特異性治療性抗體的第一結合位點/與雙特異性治療性抗體的第一結合位點特異性結合的抗獨特型抗體。
18、在所有方面和實施例的一個優選實施例中，替換抗體是針對雙特異性治療性抗體的第一結合位點/與雙特異性治療性抗體的第一結合位點特異性結合的抗獨特型抗體。
19、在所有方面和實施例的一個優選實施例中，捕獲抗體和替換抗體是針對雙特異性治療性抗體的第一結合位點/與雙特異性治療性抗體的第一結合位點特異性結合的不同抗獨特型抗體。
20、在所有方面和實施例的一個實施例中，經由與治療性抗體的第二結合特異性進行特異性結合的固定化的抗獨特型抗體來進行替換抗體-治療性抗體可溶性復合物的捕獲，并且經由與替換抗體綴合的可檢測標記進行檢測。
21、在所有方面和實施例的一個實施例中，步驟d)是將步驟c)中獲得的溶液與第二固相一起孵育以形成固定化的第二捕獲分子-治療性抗體-替換抗體復合物，與治療性抗體(例如，第二抗原或與治療性抗體的第二結合位點特異性結合的抗獨特型抗體或與人抗體的恒定區/恒定結構域特異性結合的抗體)特異性結合的第二捕獲分子，優選地第二捕獲抗體(其不同于第一捕獲抗體)已經固定化到所述第二固相，其中所述溶液包含替換抗體-治療性抗體-復合物，并且通過確定所述固定化的第二捕獲分子-治療性抗體-替換抗體復合物進行確定。在一個實施例中，第二捕獲分子不同替換抗體競爭與治療性抗體的結合。
22、在所有方面和實施例的一個實施例中，替換抗體是具有與捕獲抗體相同的結合特異性(相同表位)或捕獲抗體本身的抗體。
23、在所有方面和實施例的一個實施例中，將步驟c)中的固相與約6.67nm或更高濃度的替換抗體一起孵育。
24、在所有方面和實施例的一個實施例中，含血清樣品包含治療性抗體(其為多特異性抗體)和包含治療性抗體的一個結合位點的單特異性本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于確定含血清樣品中的雙特異性抗體的方法，所述方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其中標記所述替換抗體，并且通過檢測所述標記來確定所述替換抗體-雙特異性抗體-復合物。
3.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述替換抗體是所述捕獲抗體。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中將步驟c)中的所述固相與6.67nM或更高濃度的所述替換抗體一起孵育。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述含血清樣品包含所述雙特異性抗體和含有所述雙特異性抗體的一個結合位點的單特異性抗體，并且所述方法是在確定所述雙特異性抗體時減少所述單特異性抗體的干擾的方法。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述雙特異性抗體是抗CD3/CD20雙特異性抗體。
7.根據權利要求6所述的方法，其中雙特異性抗CD3/CD20抗體是RG6026。
8.根據權利要求5至7中任一項所述的方法，其中所述單特異性抗體是抗CD20抗體。
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述抗CD2
...【技術特征摘要】
1.一種用于確定含血清樣品中的雙特異性抗體的方法，所述方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其中標記所述替換抗體，并且通過檢測所述標記來確定所述替換抗體-雙特異性抗體-復合物。
3.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述替換抗體是所述捕獲抗體。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中將步驟c)中的所述固相與6.67nm或更高濃度的所述替換抗體一起孵育。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述含血清樣品包含所述雙特異性抗...
【專利技術屬性】
技術研發人員：G·喬丹，A·盧茨，M·維耶特，
申請(專利權)人：豪夫邁·羅氏有限公司，
類型：發明
國別省市：
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