【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫用材料，具體涉及兩性離子在改善外泌體凍存效率及粒徑均勻性中的應用。
技術介紹
1、外泌體是指包含了復雜rna和蛋白質的小膜泡(30-150nm)。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。近年來，外泌體作為一種新型的生物學介質，其在生物醫學應用中展示出了巨大的潛力。首先，外泌體作為生物標志物，在臨床診斷和監測方面具有潛在應用。外泌體中攜帶豐富的生物分子，如蛋白質、核酸和代謝產物等，可以作為疾病的生物標志物，用于疾病的早期診斷、預后評估和治療效果監測。例如，外泌體中的mirna被廣泛研究用于腫瘤的早期診斷和預后評估。其次，外泌體在藥物遞送和基因治療方面也顯示出了潛在的應用價值。外泌體可以作為一種天然的納米藥物遞送系統，通過修飾外泌體表面蛋白或直接裝載藥物，實現對藥物的靶向遞送，從而提高藥物的生物利用度和減少毒副作用。此外，外泌體還可以作為一種有效的基因傳遞工具，通過攜帶的核酸進入靶細胞并發揮生物學效應，從而實現基因治療的目的。最后，外泌體還在組織修復和再生方面具有潛在應用。研究表明，外泌體可以促進細胞增殖和遷移，調控細胞分化和修復，從而在組織修復和再生過程中發揮積極作用。
2、然而，目前外泌體技術存在的一個瓶頸是：通常提取出來的外泌體存放在pbs或其他緩沖液中，然后直接進行凍存，凍存復蘇后會出現外泌體小膜泡破裂，內容物有效成分流出，從而影響外泌體在臨床診斷和檢測方面的使用效果。
3、在cn?112514892a中公開了一種外泌體凍存
技術實現思路
1、本專利技術意外發現，通過使用甜菜堿、磺基甜菜堿和磷酸膽堿等兩性離子，能夠大幅改善外泌體的凍存效率及粒徑均勻性。
2、基于上述發現，本專利技術首先提供了兩性離子在以下任一方面的應用：
3、1)改善外泌體凍存效率及粒徑均勻性；
4、2)制備用于改善外泌體凍存效率及粒徑均勻性的試劑；
5、其中，所述兩性離子選自甜菜堿、磺基甜菜堿和磷酸膽堿中的一種或其組合。
6、作為優選方案，每100ml外泌體凍存保護液中含有1～10g所述兩性離子。
7、作為進一步優選的方案，所述兩性離子的含量為3～10g/100ml，更優選為5～10g/100ml。
8、作為優選方案，所述外泌體源自干細胞、免疫細胞、上皮細胞、結締組織細胞、神經細胞及病毒感染細胞中的一種或多種。
9、作為優選方案，所述外泌體用于遞送mrna。
10、本專利技術還提供一種外泌體凍存保護液，其含有兩性離子，所述兩性離子選自甜菜堿、磺基甜菜堿和磷酸膽堿中的一種或其組合。
11、作為優選方案，每100ml外泌體凍存保護液中含有1～10g所述兩性離子。
12、作為進一步優選的方案，所述兩性離子的含量為3～10g/100ml，更優選為5～10g/100ml。
13、作為優選方案，所述外泌體凍存保護液還含有15～25mm檸檬酸鈉。
14、作為進一步優選的方案，所述檸檬酸鈉的含量為20±2mm。
15、作為優選方案，所述外泌體凍存保護液還含有ph值為7.0～8.0的tris-hcl緩沖溶液。
16、作為進一步優選的方案，所述tris-hcl緩沖溶液的ph值為7.5±0.3。
17、本專利技術還提供一種外泌體凍存方法，其包括：使用前述任一方案所述的外泌體凍存保護液與外泌體混合后，對混合液進行凍存。
18、作為優選方案，所述外泌體與所述外泌體凍存保護液的體積比為1:0.5～2。
19、作為優選方案，所述外泌體源自干細胞、免疫細胞、上皮細胞、結締組織細胞、神經細胞及病毒感染細胞中的一種或多種。
20、作為優選方案，所述外泌體用于遞送mrna。
21、本專利技術發現，通過使用所述的兩性離子，能夠使外泌體的凍存效率大幅提升，有效增強了對外泌體的保護效力。
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1.兩性離子在以下任一方面的應用：
2.根據權利要求1所述的應用，其中，每100mL外泌體凍存保護液中含有1～10g所述兩性離子，優選所述兩性離子的含量為3～10g/100mL，更優選為5～10g/100mL。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其中，所述外泌體源自干細胞、免疫細胞、上皮細胞、結締組織細胞、神經細胞及病毒感染細胞中的一種或多種；優選所述外泌體用于遞送mRNA。
4.一種外泌體凍存保護液，其含有兩性離子，所述兩性離子選自甜菜堿、磺基甜菜堿和磷酸膽堿中的一種或其組合。
5.根據權利要求4所述的外泌體凍存保護液，其中，每100mL外泌體凍存保護液中含有1～10g所述兩性離子，優選所述兩性離子的含量為3～10g/100mL，更優選為5～10g/100mL。
6.根據權利要求4或5所述的外泌體凍存保護液，其還含有15～25mM檸檬酸鈉；優選所述檸檬酸鈉的含量為20±2mM。
7.根據權利要求4～6中任一項所述的外泌體凍存保護液，其還含有pH值為7.0～8.0的Tris-HCl緩沖溶液；優選所述Tris-
8.一種外泌體凍存方法，其包括：使用權利要求4～7中任一項所述的外泌體凍存保護液與外泌體混合后，對混合液進行凍存。
9.根據權利要求8所述的外泌體凍存方法，其中，所述外泌體與所述外泌體凍存保護液的體積比為1:0.5～2。
10.根據權利要求8或9所述的外泌體凍存方法，其中，所述外泌體源自干細胞、免疫細胞、上皮細胞、結締組織細胞、神經細胞及病毒感染細胞中的一種或多種；優選所述外泌體用于遞送mRNA。
...【技術特征摘要】
1.兩性離子在以下任一方面的應用：
2.根據權利要求1所述的應用，其中，每100ml外泌體凍存保護液中含有1～10g所述兩性離子，優選所述兩性離子的含量為3～10g/100ml，更優選為5～10g/100ml。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其中，所述外泌體源自干細胞、免疫細胞、上皮細胞、結締組織細胞、神經細胞及病毒感染細胞中的一種或多種；優選所述外泌體用于遞送mrna。
4.一種外泌體凍存保護液，其含有兩性離子，所述兩性離子選自甜菜堿、磺基甜菜堿和磷酸膽堿中的一種或其組合。
5.根據權利要求4所述的外泌體凍存保護液，其中，每100ml外泌體凍存保護液中含有1～10g所述兩性離子，優選所述兩性離子的含量為3～10g/100ml，更優選為5～10g/100ml。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：孫玉玲，黃曉丹，
申請(專利權)人：賽存北京生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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