【技術實現步驟摘要】
技術介紹
1、腸外致病性大腸桿菌(expec)與共生大腸桿菌菌株一起通常是人類腸道中無害的棲居生物。然而，expec菌株可能具有用于定植和感染胃腸道外部位從而導致多種嚴重的侵襲性疾病的毒力因子，這導致每年顯著的發病率、死亡率和費用(參見例如，johnson等人,jlab?clin?med.[實驗室與臨床醫學雜志]2002；139(3):155-162；kohler等人,int?j?medmicrobiol.[國際醫學微生物學雜志]2011；301(8):642-647；foxman,am?j?med.[美國醫學雜志]2002；113增刊1a:5s-13s；以及russo等人,microbes?infect.[微生物感染]2003；5(5):449-456)。expec菌株是尿路感染(uti)的最常見原因。它們也是手術部位感染和新生兒腦膜炎的促成因素(johnson等人,2002；russo等人,2003)，與腹部和盆腔感染以及醫院獲得性肺炎有關，偶爾還涉及其他腸外感染，例如骨髓炎、蜂窩組織炎和傷口感染。所有這些主要感染部位都可能導致expec菌血癥(russo等人,2003)。新生兒、老年人和免疫功能低下的患者特別容易受到expec感染，包括侵襲性expec疾病(ied)。
2、細菌對抗生素的耐藥性是對抗細菌感染的主要問題，并且多藥耐藥性(mdr)大腸桿菌菌株正變得越來越普遍(參見例如，schito等人,2009,int.j.antimicrob.agents[國際抗微生物藥劑雜志]34(5):407-413；以及
3、o抗原血清型基于o多糖抗原的化學結構，該o多糖抗原是革蘭氏陰性細菌中脂多糖(lps)的外膜部分。已經報道了超過180種血清學獨特的大腸桿菌o抗原(stenutz等人,fems?microbial?rev.[fems微生物學評論]2006；30:382-403)，盡管絕大多數expec分離株被歸類在不到20種o抗原血清型中。全長大腸桿菌o抗原典型地由附接到高度保守的lps核心結構的約10至25個重復糖單元組成，每個組分分別由主要在rfb和rfa基因簇中編碼的酶獨立地合成。o抗原聚合后，典型地可以通過添加乙酰基或葡萄糖殘基來修飾o抗原多糖骨架。這些修飾通過產生具有共同多糖骨架但側枝不同的抗原性不同血清型而有效地增加了血清型的多樣性。編碼o抗原修飾酶的基因典型地位于染色體上的rfb簇之外，并且在某些情況下，這些基因存在于溶原性噬菌體中。
4、expec感染可由任何血清型引起。盡管expec感染中某些血清型的比例過高，但來自expec分離株的表面多糖仍然表現出相當大的抗原多樣性，這使得基于表面多糖的expec疫苗的開發極具挑戰性(russo等人,vaccine.[疫苗]2007；25:3859-3870)。而且，某些o抗原可能免疫原性較差。此外，根據肺炎球菌結合疫苗的研究，當多種血清型可引起疾病時，疫苗組合物(例如對包含在疫苗中的血清型和所包含血清型的劑量水平的選擇)可能至關重要，因為使用針對某些血清型的疫苗可能會潛在地增加疫苗中未包含的血清型的攜帶以及由未包含的血清型引起的疾病，或者甚至增加疫苗中包含的血清型但在針對該血清型的免疫方面效果不佳的血清型的攜帶以及由其引起的疾病(lipsitch,emerging?infectiousdiseases[新發傳染病]；1999,5:336-345)。理想地，疫苗應最大限度地發揮其在預防由疫苗中包含的血清型引起的疾病方面的有益作用，同時使因非疫苗血清型攜帶增加而引起的新增疾病的風險最小化。
5、開發疫苗以預防expec感染的努力集中在o抗原多糖綴合物上。通過提取和純化o抗原多糖以及化學綴合至去毒的銅綠假單胞菌(pseudomonas?aeruginosa)外毒素a，合成了12價o抗原結合疫苗，并在1期臨床研究中測試了其安全性和免疫原性(cross等人,j.infect.dis.[傳染病雜志](1994)第170卷,第834-40頁)。這種候選疫苗從未獲得臨床使用許可。最近在大腸桿菌中開發了一種生物綴合系統，其中多糖抗原和載體蛋白都在體內合成，隨后通過寡糖基轉移酶pglb(一種在大腸桿菌中表達的空腸彎曲桿菌(campylobacter?jejuni)酶)的活性在體內綴合(wacker等人,proc.nat.acad.sci.[美國國家科學院院刊](2006)第103卷,第7088-93頁)。這種n連接的蛋白質糖基化系統能夠將多種多糖轉移到載體蛋白上，從而可以使用簡單明了的方法來純化綴合物。
6、生物綴合已成功地用于生產大腸桿菌四價o抗原候選疫苗的綴合多糖(poolman和wacker,j.infect.dis.[傳染病雜志](2016)第213(1)卷,第6-13頁)。然而，成功的expec疫苗的開發需要覆蓋主要血清型，并且在expec分離株亞群中存在進一步的o抗原修飾對覆蓋展現出未修飾和修飾lps的分離株提出了進一步的挑戰。此外，對包含來自多種血清型的o抗原的疫苗組合物的免疫應答可能因血清型而異。因此，本領域持續需要針對expec的疫苗。特別地，需要一種基于表面多糖的expec疫苗，該疫苗可用于提供針對expec?o75血清型和expec中普遍存在的其他血清型的有效免疫保護。
技術實現思路
1、令人驚訝地發現，當以o抗原(各自與臨床試驗中具有相同濃度的此類其他o抗原的組合物中的載體蛋白共價結合)的綴合物形式進行測試時，大腸桿菌o75抗原似乎比其他大腸桿菌o抗原(例如，o1、o2和o6)的免疫原性更低。用如下組合物進行疫苗接種提供了針對expec?o75血清型和一種或多種額外expec?o-血清型的提高的免疫應答，該組合物含有合適的劑量和比率的大腸桿菌o75抗原的綴合物以及一種或多種額外大腸桿菌o抗原的綴合物。
2、因此，在第一個一般方面，本文提供了組合物，該組合物包含大腸桿菌o1、o2、o4、o1本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種組合物，所述組合物包含以下i)-viii)任一項：
2.如權利要求1所述的組合物，其中
3.如權利要求1或2所述的組合物，其中所述O1抗原為O1A，所述O4為葡糖基化的，所述O6抗原為O6A，所述O18抗原為O18A，和/或所述O25抗原為O25B。
4.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中：
5.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中所述O75抗原多糖的濃度為約8至約50μg/mL，優選約12至約40μg/mL，例如約16至約32μg/mL，優選約28至約36μg/mL，優選約32μg/mL。
6.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，所述組合物進一步包含至少一種共價連接至載體蛋白的額外大腸桿菌抗原多糖。
7.如權利要求6所述的組合物，其中所述至少一種額外的大腸桿菌抗原多糖包含具有式(O8)的O8抗原多糖：
8.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中每種載體蛋白獨立地選自由以下組成的組：銅綠假單胞菌去毒外毒素A(EPA)、大腸桿菌鞭毛蛋白(FliC)、CRM197、麥芽糖結
9.一種宿主細胞(例如重組宿主細胞)，所述宿主細胞用于產生共價連接至載體蛋白的大腸桿菌抗原多糖的綴合物，其中所述宿主細胞包含編碼能夠產生以下的酶(例如糖基轉移酶)的核酸：
10.如權利要求9所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞天然表達能夠產生目的O抗原的核酸，或者使所述宿主細胞表達這樣的核酸。
...【技術特征摘要】
1.一種組合物，所述組合物包含以下i)-viii)任一項：
2.如權利要求1所述的組合物，其中
3.如權利要求1或2所述的組合物，其中所述o1抗原為o1a，所述o4為葡糖基化的，所述o6抗原為o6a，所述o18抗原為o18a，和/或所述o25抗原為o25b。
4.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中：
5.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中所述o75抗原多糖的濃度為約8至約50μg/ml，優選約12至約40μg/ml，例如約16至約32μg/ml，優選約28至約36μg/ml，優選約32μg/ml。
6.如權利要求1-3中任一項所述的組合物，所述組合物進一步包含至少一種共價連接至載體蛋白的額外大腸桿菌抗原多糖。
7.如權利要求6所述的組合物，其中所述至少一種額外的大腸桿菌抗原多糖包含具有式(o8)的o8抗原多糖：
8.如權利要求1-3中任一項所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：J·T·普爾曼，K·C·法埃，M·薩內基，J·戈爾特森，D·R·阿巴納特，B·G·M·施皮森斯，F·G·F·斯特勒伊夫，
申請(專利權)人：楊森制藥公司，
類型：發明
國別省市：
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