【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及植物組織培養(yǎng)，特別涉及一種減少紫荊木褐化的組培方法。
技術(shù)介紹
1、紫荊木(madhucapasquieri)別名叫木花生、天星木，是山欖科紫荊木屬常綠喬木，是廣西主要珍貴樹(shù)種之一，屬于“廣西五大硬木之一”被列為國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生植物(ⅱ級(jí))，同時(shí)也是極小種群野生植物、全國(guó)重點(diǎn)植物保護(hù)對(duì)象和廣西重點(diǎn)保護(hù)植物。
2、雖然很早以前就建立自然保護(hù)區(qū)對(duì)紫荊木進(jìn)行保護(hù)，但是紫荊木的野生資源仍有急劇減少的趨勢(shì)，植物組織培養(yǎng)對(duì)紫荊木進(jìn)行種質(zhì)資源保存是十分有必要的。
3、為實(shí)現(xiàn)紫荊木的種質(zhì)資源保護(hù)，本專利技術(shù)專利技術(shù)人致力于通過(guò)植物組織培養(yǎng)獲得紫荊木組培苗。但在對(duì)紫荊木進(jìn)行組織培養(yǎng)過(guò)程中，專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)紫荊木組培的難點(diǎn)如下：
4、(1)紫荊木腋芽在初培養(yǎng)階段出現(xiàn)嚴(yán)重的污染、褐化，導(dǎo)致無(wú)菌苗獲得率低；
5、(2)接種的紫荊木腋芽或莖段，在培養(yǎng)過(guò)程中將培養(yǎng)基以接種點(diǎn)為圓點(diǎn)染成淡黃色或褐色，且接種材料也呈現(xiàn)不同程度褐化，褐化輕則影響生長(zhǎng)，嚴(yán)重的枯萎死亡；
6、(3)紫荊木莖段的莖節(jié)生長(zhǎng)緩慢導(dǎo)致培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，且難以萌出較大的葉片。
7、公開(kāi)于該
技術(shù)介紹
部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本專利技術(shù)的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的主要目的在于提供一種減少紫荊木試管苗褐化的組培方法，旨在解決紫荊木的野生資源日漸減少，紫荊木種質(zhì)資源可能缺失的
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供一種減少紫荊木褐化的組培方法，所述組培方法包括：
3、s1，帶腋芽的紫荊木莖段清洗，消毒，在亞硫酸鈉溶液中取腋芽；
4、s2，將所述腋芽進(jìn)行初培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗，所述無(wú)菌苗進(jìn)行抗褐化促生長(zhǎng)培養(yǎng)后，取所述無(wú)菌苗莖段進(jìn)行繼代培養(yǎng)；所述抗褐化培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基組分包括：改良ms、iba、2,4-d、l-半胱氨酸、蕓香葉苷、亞硫酸鈉。
5、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述抗褐化培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基組分由改良ms+1-2mg/l?iba+2-4mg/l?2,4-d+1-2mg/l?l-半胱氨酸+1-2mg/l蕓香葉苷+1-2mg/l亞硫酸鈉。
6、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述抗褐化促生長(zhǎng)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：在培養(yǎng)溫度25±2℃與光照強(qiáng)度3000-4000lx、光照時(shí)間12-14h/d的條件下培養(yǎng)至無(wú)菌苗高5-7cm后進(jìn)行繼代培養(yǎng)。
7、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，在步驟s1中，所述帶腋芽的紫荊木莖段清洗，消毒，在亞硫酸鈉溶液中取腋芽的具體步驟如下：
8、s11，取含2-3cm腋芽的紫荊木枝條；
9、s12，將所述紫荊木枝條用酒精浸泡30-120s后蒸餾水沖洗，用h2o2浸泡5-8min后蒸餾水沖洗；
10、s13，在亞硫酸鈉溶液中，將紫荊木枝條上的2-3cm腋芽取下，獲得腋芽。
11、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述紫荊木枝條的長(zhǎng)度為保留所述2-3cm腋芽腋芽所在莖節(jié)的相鄰節(jié)間3-5cm。
12、根據(jù)上述技術(shù)方案，本專利技術(shù)通過(guò)保留保留所述2-3cm腋芽腋芽所在莖節(jié)的相鄰節(jié)間3-5cm的方式，保護(hù)腋芽，避免紫荊木外植體在消毒過(guò)程中消毒液引起切口附近細(xì)胞細(xì)胞膜損傷，以減少腋芽細(xì)胞損傷引發(fā)的外植體死亡。
13、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述h2o2濃度為10-12％。
14、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述亞硫酸鈉溶液為在20-40ml蒸餾水中添加5-7μl1mg/l亞硫酸鈉獲得。
15、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述初培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基組分由wpm+1-2mg/l亞硫酸鈉。
16、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述初培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度18±2℃與光照強(qiáng)度500-1000lx、光照時(shí)間為6-8h/d的條件下培養(yǎng)4-5天。
17、優(yōu)選地，在上述技術(shù)方案中，所述無(wú)菌苗進(jìn)行抗褐化促生長(zhǎng)培養(yǎng)后的步驟中，所述無(wú)菌苗為整株移植。
18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有如下有益效果：
19、(1)消毒后采用亞硫酸鈉溶液中取下紫荊木腋芽，一是進(jìn)一步殺滅腋芽表面微生物，以減少紫荊木腋芽污染，污染率僅為5.00％；二是與wpm和亞硫酸鈉培養(yǎng)基共同抑制多酚氧化酶活性，以減少紫荊木腋芽在初培養(yǎng)階段褐化，褐化率僅為13.33％，無(wú)菌苗獲得率為81.67％；
20、(2)篩選出減少紫荊木褐化并促進(jìn)紫荊木營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，即改良ms、iba、2,4-d、l-半胱氨酸、蕓香葉苷和亞硫酸鈉，獲得移植存活率為88.33％，且存活的紫荊木無(wú)菌苗葉片呈深綠色或青色，莖更健壯。
本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述組培方法包括：
2.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述抗褐化培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基組分由改良MS+1-2mg/L?IBA+2-4mg/L2,4-D+1-2mg/L?L-半胱氨酸+1-2mg/L蕓香葉苷+1-2mg/L亞硫酸鈉。
3.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述抗褐化促生長(zhǎng)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：在培養(yǎng)溫度25±2℃與光照強(qiáng)度3000-4000Lx、光照時(shí)間12-14h/d的條件下培養(yǎng)至無(wú)菌苗高5-7cm后進(jìn)行繼代培養(yǎng)。
4.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，在步驟S1中，所述帶腋芽的紫荊木莖段清洗，消毒，在亞硫酸鈉溶液中取腋芽的具體步驟如下：
5.如權(quán)利要求4所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述紫荊木枝條的長(zhǎng)度為保留所述2-3cm腋芽腋芽所在莖節(jié)的相鄰節(jié)間3-5cm。
6.如權(quán)利要求4所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述H2O2濃度為10-12％。
7.如權(quán)利要求4所述
8.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述初培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基組分由WPM+1-2mg/L亞硫酸鈉。
9.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述初培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度18±2℃與光照強(qiáng)度500-1000Lx、光照時(shí)間為6-8h/d的條件下培養(yǎng)4-5天。
10.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述無(wú)菌苗進(jìn)行抗褐化促生長(zhǎng)培養(yǎng)后的步驟中，所述無(wú)菌苗為整株移植。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述組培方法包括：
2.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述抗褐化培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基組分由改良ms+1-2mg/l?iba+2-4mg/l2,4-d+1-2mg/l?l-半胱氨酸+1-2mg/l蕓香葉苷+1-2mg/l亞硫酸鈉。
3.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述抗褐化促生長(zhǎng)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：在培養(yǎng)溫度25±2℃與光照強(qiáng)度3000-4000lx、光照時(shí)間12-14h/d的條件下培養(yǎng)至無(wú)菌苗高5-7cm后進(jìn)行繼代培養(yǎng)。
4.如權(quán)利要求1所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，在步驟s1中，所述帶腋芽的紫荊木莖段清洗，消毒，在亞硫酸鈉溶液中取腋芽的具體步驟如下：
5.如權(quán)利要求4所述的減少紫荊木褐化的組培方法，其特征在于，所述紫荊木枝條的...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張曉寧，盧娟，孫熹，張燁，劉海龍，覃子海，李莉莉，陸栩雅，李建凡，林東，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
還沒(méi)有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。