【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植物基因工程，涉及一種調控番茄果實葉黃素含量的sltagl1基因、方法以及應用。
技術介紹
1、番茄是世界性三大貿易型蔬菜之一。根據聯合國糧食及農業組織2023年統計結果表明，2022年全球番茄總產量為1.86億噸，中國番茄產量占全球產量的三分之一。番茄果實中富含的類胡蘿卜素類化合物以及維生素c等多種營養物質，且風味酸甜適口深受消費者喜歡。近年來，隨著番茄產業的發展和人們生活水平的提高，對番茄品種的品質、風味、產量、抗性以及營養物質的需求逐漸增高。
2、葉黃素(lutein)是一種四萜類胡蘿卜素，是人眼視網膜黃斑區域的主要色素，能夠過濾藍光和保護視網膜抗氧化損傷，在維持視覺健康方面具有重要作用；另外葉黃素在阻斷腫瘤、心血管疾病的發生與發展、抑制人胃癌和乳腺癌細胞的增殖、以及增強機體免疫力等方面具有重要作用；同時也可以作為天然色素。近年來其作用在保健食品、化妝品和醫藥行業越來越受到重視。隨著手機、電腦等電子設備的普及，我國各年齡段人群的視覺疲勞患病率大大增加。葉黃素無法在人類體內自行合成，只能通過攝入來進行補充。
3、在植物體內，葉黃素通過類胡蘿卜素生物合成途徑合成。番茄果實富含類胡蘿卜素，提高番茄果實中的葉黃素含量，可從日常水果蔬菜中攝入葉黃素從而緩解視覺疲勞，保護視網膜。因此研發一種如何快速提高番茄果實葉黃素含量的方法是本領域人員亟需解決的技術問題。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種調控番茄果實葉黃素含量的sltagl1基因、方法以及應用
2、為實現上述目的，本專利技術采用的技術方案是：
3、本專利技術的目的之一，提供一種調控番茄果實葉黃素含量的sltagl1基因，所述sltagl1基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
4、本專利技術的目的之二，提供一種調控番茄果實葉黃素含量的蛋白質，所述蛋白質的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
5、本專利技術的目的之三，提供一種調控番茄果實葉黃素含量的方法，包括以下步驟：
6、步驟一：根據sltagl1基因設計sgrna靶點的特異性引物，將靶點連接到crispr/cas9上，構建crispr/cas9-sltagl1載體，所述特異性引物的序列為：
7、sltagl1-sgrna1-f：5′-tgattgtattcatagagacggccg-3′(seq?id?no.3)；
8、sltagl1-sgrna1-r：5′-aaaccggccgtctctatgaataca-3′(seq?id?no.4)；
9、步驟二：將步驟一構建的crispr/cas9-sltagl1載體通過農桿菌侵染法導入到番茄細胞中，得到sltagl1基因突變的番茄突變體植株。
10、優選地，步驟一包括：將靶點的正向引物和反向引物在pcr儀中95℃5min退火后，用t4連接酶連接到切開的p1300-atu6-35s-cas9載體上。
11、優選地，步驟二包括：將crispr/cas9-sltagl1載體轉化到eha105農桿菌感受態細胞，再將含有crispr/cas9-sltagl1質粒的eha105菌株侵染番茄外植體，制備得到番茄sltagl1突變體材料。
12、更優選地，所用的外植體為種子發芽2周的番茄子葉。
13、優選地，上述方法還包括：將步驟二獲得的番茄突變體植株進行正常生長管理，獲得穩定遺傳的sltagl1基因突變體材料。
14、更優選地，上述方法的具體步驟如下：
15、1)構建番茄sltagl1基因crispr/cas9載體的根癌農桿菌，所用的農桿菌為eha105菌株；
16、2)利用農桿菌侵染法將步驟1)得到的含有crispr/cas9-sltagl1質粒的eha105菌株轉化到目標番茄外植體，制備得到sltagl1基因突變體植株；
17、3)將步驟2)得到的sltagl1基因突變體植株進行正常生長管理，獲得穩定遺傳的sltagl1基因突變體材料及后代純合種子。
18、本專利技術的目的之四，提供sltagl1基因在調控番茄果實葉黃素含量中的應用。
19、本專利技術的有益效果在于：
20、本專利技術從番茄基因組中獲得sltagl1基因的編碼序列，通過設計靶點將靶點連接到crispr/cas9上，并利用農桿菌感受態細胞成功侵染番茄，獲得番茄的crispr/cas9基因編輯植株，對基因編輯植株進行分析，結果表明與野生型番茄相比，敲除sltagl1后的番茄果實中葉黃素含量顯著上調1.6～2.2倍。本專利技術采用一種高效穩定遺傳的方法來提高番茄果實中葉黃素的含量，從而提高了番茄果實品質，為培養高葉黃素番茄品種提供基因資源和策略。
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1.一種調控番茄果實葉黃素含量的SlTAGL1基因，所述SlTAGL1基因的核苷酸序列如SEQID?NO.1所示。
2.一種調控番茄果實葉黃素含量的蛋白質，所述蛋白質的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
3.一種調控番茄果實葉黃素含量的方法，包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟一包括：將靶點的正向引物和反向引物在PCR儀中95℃5min退火后，用T4連接酶連接到切開的p1300-AtU6-35S-Cas9載體上。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟二包括：將CRISPR/Cas9-SlTAGL1載體轉化到EHA105農桿菌感受態細胞，再將含有CRISPR/Cas9-SlTAGL1質粒的EHA105菌株侵染番茄外植體，制備得到番茄SlTAGL1突變體材料。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所用的番茄外植體為種子發芽2周的番茄子葉。
7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，還包括：將步驟二獲得的番茄突變體植株進行正常生長管理，獲得穩定遺傳的SlTAGL1基因
8.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：
9.SlTAGL1基因在調控番茄果實葉黃素含量中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種調控番茄果實葉黃素含量的sltagl1基因，所述sltagl1基因的核苷酸序列如seqid?no.1所示。
2.一種調控番茄果實葉黃素含量的蛋白質，所述蛋白質的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
3.一種調控番茄果實葉黃素含量的方法，包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟一包括：將靶點的正向引物和反向引物在pcr儀中95℃5min退火后，用t4連接酶連接到切開的p1300-atu6-35s-cas9載體上。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟二包括：將crispr/cas9-...
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