【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及移植后并發(fā)癥的細(xì)胞免疫學(xué)應(yīng)用，具體涉及用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病（agvhd）的試劑盒及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、異基因造血干細(xì)胞移植（allo-hsct）是治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的有效方法，但急性移植物抗宿主病（agvhd）仍是主要的發(fā)病和死亡原因，威脅患者的生存。在接受allo-hsct的患者中，agvhd的發(fā)生率為30-50%，其中重度agvhd為14%。因此，移植后早期預(yù)警和靶向干預(yù)對(duì)于提高療效至關(guān)重要。
2、黏膜相關(guān)恒定t細(xì)胞（mait細(xì)胞）是一類在人類中廣泛存在的多功能先天免疫t細(xì)胞，主要分布于血液和黏膜組織中，如腸道、肺和肝臟。mait細(xì)胞通過(guò)識(shí)別mr1蛋白及其配體發(fā)揮作用，具有傳統(tǒng)效應(yīng)和組織維護(hù)功能，表明其在保護(hù)黏膜免受微生物侵害方面的重要性。我們前期工作發(fā)現(xiàn)，在清髓allo-hsct中，受體mait細(xì)胞的重建主要依賴于移植物中mait細(xì)胞的數(shù)量，且移植物中mait細(xì)胞數(shù)量與移植后腸道agvhd低發(fā)生率相關(guān)。mait細(xì)胞抗腸道gvhd效應(yīng)可能是通過(guò)與腸道菌群的相互作用激活,并觸發(fā)了組織修復(fù)功能，并通過(guò)發(fā)揮一定的免疫抑制作用，來(lái)共同抑制腸道gvhd的發(fā)生。成人血液中的mait細(xì)胞表達(dá)多種趨化因子受體，如ccr5、ccr6、cxcr6和ccr9，這些受體能使mait細(xì)胞從循環(huán)系統(tǒng)中募集到炎癥組織，在抗腸道agvhd和組織修復(fù)中起關(guān)鍵作用。因此，mait細(xì)胞的組織遷移能力和在組織中的絕對(duì)數(shù)量，是其黏膜保護(hù)或抗腸道agvhd作用的關(guān)鍵因素。
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技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的之一是提供一種在異基因造血干細(xì)胞移植（allo-hsct）前對(duì)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病進(jìn)行預(yù)測(cè)的抗體組合物、試劑盒及其應(yīng)用；本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問(wèn)題不限于所描述的技術(shù)主題，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技術(shù)主題。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)首先提供了用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病的抗體組合物，所述抗體組合物包括cd3抗體、cd161抗體、vα7.2抗體、cd114抗體、il-17a抗體、il-4抗體和cxcr6抗體。
3、所述抗體組合物中的各抗體均可為單克隆抗體。
4、進(jìn)一步地，所述抗體組合物中的各抗體均可為熒光染料標(biāo)記的抗體。
5、所述熒光染料包括但不限于自異硫氰酸熒光素（fitc）、別藻藍(lán)蛋白（apc）、別藻藍(lán)蛋白-花青素7（apc-cy7）、apc-h7、藻紅蛋白（pe）、藻紅蛋白-得克薩斯紅（pe-tr，ecd）、藻紅蛋白-花青素5（pe-cy5）、藻紅蛋白-花青素7（pe-cy7）、percp/cy5.5、羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯（cfse）、綠色熒光蛋白（gfp）、煙酸己可堿33342（hoechst?33342）、碘化丙啶（pi）、4',6-二脒基-2-苯基吲哚（dapi）、7-氨基放線菌素d（7-aad）、pb染料（pacificblue）、氨基甲基香豆素乙酸酯（amca）、bv480、bv785、bv510、bv711、bv421、bv605、v500（bdhorizon?v500）和alexa?700（alexa?fluor?700，af700）。
6、進(jìn)一步地，所述cd3抗體、cd161抗體、vα7.2抗體、cd114抗體、il-17a抗體、il-4抗體和cxcr6抗體的熒光染料標(biāo)記依次可為：pe-cy7、apc、pe、bv480、bv785、bv510和bv711。
7、pe-cy7標(biāo)記的cd3抗體名稱可為pe-cy7-cd3；apc標(biāo)記的cd161抗體名稱可為apc-cd161；pe標(biāo)記的vα7.2抗體名稱可為pe-vα7.2；bv480標(biāo)記的cd114抗體名稱可為bv480-cd114；bv785標(biāo)記的il-17a抗體名稱可為bv785-il-17a；bv510標(biāo)記的il-4抗體名稱可為bv510-il-4；bv711標(biāo)記的cxcr6抗體名稱可為bv711-cxcr6。
8、本專利技術(shù)所述抗體組合物可包括抗體pe-cy7-cd3、apc-cd161、pe-vα7.2、bv480-cd114、bv785-il-17a、bv510-il-4和bv711-cxcr6。
9、本專利技術(shù)還提供了試劑盒，所述試劑盒包括本文中任一所述的抗體組合物。
10、所述試劑盒具有下述至少一種用途：
11、（1）用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病；
12、（2）用于檢測(cè)cd3、cd161、vα7.2、cd114、il-17a、il-4和cxcr6；
13、（3）用于檢測(cè)mait細(xì)胞、cd114+mait細(xì)胞、il-17a+mait細(xì)胞、il-4+mait細(xì)胞和cxcr6+mait細(xì)胞比例。
14、進(jìn)一步地，所述試劑盒還可包括紅細(xì)胞裂解液和/或固定破膜液。
15、進(jìn)一步地，所述試劑盒還可包括破膜緩沖液和/或細(xì)胞清洗液。
16、所述紅細(xì)胞裂解液、固定破膜液、破膜緩沖液和細(xì)胞清洗液均為本領(lǐng)域常規(guī)試劑，可商購(gòu)獲得，例如在本專利技術(shù)的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述紅細(xì)胞裂解液為bd?lsyingsolution，所述固定破膜液為ebioscience固定破膜液，所述破膜緩沖液為5×permeablization?buffer，所述細(xì)胞清洗液為pbs緩沖液。
17、進(jìn)一步地，所述試劑盒可為流式細(xì)胞分析試劑盒。
18、所述試劑盒的檢測(cè)樣本可為異基因造血干細(xì)胞移植供者外周造血干細(xì)胞移植物樣本。
19、所述試劑盒的各種試劑組分可以存在于分開(kāi)的容器中，或者可以全部或部分預(yù)組合成試劑混合物。
20、所述試劑盒的組分可以溶液形式提供，例如水溶液的形式提供。在以水溶液狀態(tài)存在的情況下，這些成分的濃度或含量是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)不同需求而方便地確定的。例如，用于儲(chǔ)存的目的時(shí)，組分的濃度可以較高的形式存在，當(dāng)處于工作狀態(tài)或使用時(shí)，可通過(guò)稀釋上述較高濃度的溶液來(lái)將濃度降低至工作濃度。
21、本專利技術(shù)還提供了本文中任一所述抗體組合物在下述任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
22、a1）在制備用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病的產(chǎn)品中的應(yīng)用；
23、a2）在制備用于檢測(cè)cd3、cd161、vα7.2、cd114、il-17a、il-4和cxcr6的產(chǎn)品中的應(yīng)用；
24、a3）在制備用于檢測(cè)mait細(xì)胞、cd114+mait細(xì)胞、il-17a+mait細(xì)胞、il-4+mait細(xì)胞和cxcr6+mait細(xì)本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病的抗體組合物，其特征在于，所述抗體組合物包括CD3抗體、CD161抗體、Vα7.2抗體、CD114抗體、IL-17A抗體、IL-4抗體和CXCR6抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體組合物，其特征在于，所述抗體組合物中的各抗體均為熒光染料標(biāo)記的抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體組合物，其特征在于，所述CD3抗體、CD161抗體、Vα7.2抗體、CD114抗體、IL-17A抗體、IL-4抗體和CXCR6抗體的熒光染料標(biāo)記依次為：PE-CY7、APC、PE、BV480、BV785、BV510和BV711。
4.試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1-3中任一所述的抗體組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括紅細(xì)胞裂解液和/或固定破膜液。
6.權(quán)利要求1-3中任一所述抗體組合物在下述任一項(xiàng)中的應(yīng)用：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括利用權(quán)利要求2或3中所述的抗體組合物通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)和/或分
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括如下步驟：
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，在所述B4）之后，還包括如下步驟：
10.用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病的裝置，其特征在于，所述裝置包括數(shù)據(jù)接收模塊、數(shù)據(jù)處理模塊和輸出模塊；所述數(shù)據(jù)接收模塊用于接收異基因造血干細(xì)胞移植供者外周血干細(xì)胞移植物中MAIT細(xì)胞、CD114+MAIT細(xì)胞、IL-17A+MAIT細(xì)胞、IL-4+MAIT細(xì)胞和CXCR6+MAIT細(xì)胞的比例數(shù)據(jù)；所述數(shù)據(jù)處理模塊用于根據(jù)所述比例數(shù)據(jù)進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病的預(yù)測(cè)；所述輸出模塊用于顯示預(yù)測(cè)結(jié)果。
...【技術(shù)特征摘要】
1.用于預(yù)測(cè)異基因造血干細(xì)胞移植后腸道急性移植物抗宿主病的抗體組合物，其特征在于，所述抗體組合物包括cd3抗體、cd161抗體、vα7.2抗體、cd114抗體、il-17a抗體、il-4抗體和cxcr6抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體組合物，其特征在于，所述抗體組合物中的各抗體均為熒光染料標(biāo)記的抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體組合物，其特征在于，所述cd3抗體、cd161抗體、vα7.2抗體、cd114抗體、il-17a抗體、il-4抗體和cxcr6抗體的熒光染料標(biāo)記依次為：pe-cy7、apc、pe、bv480、bv785、bv510和bv711。
4.試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1-3中任一所述的抗體組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括紅細(xì)胞裂解液和/或固定破膜液。
6.權(quán)利要求1-...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙曉甦，高夢(mèng)鴿，常英軍，黃曉軍，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京大學(xué)人民醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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