【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫藥領域，具體而言，涉及一種靶向溶酶體蛋白降解藥物。
技術介紹
1、靶向蛋白降解技術（targeted?protein?degradation，tpd）通過泛素蛋白酶體和溶酶體降解目標蛋白，是近年發展起來的一項具有顛覆意義的蛋白調控新技術。
2、其中，蛋白降解靶向嵌合體（proteolysis?targeting?chimera，?protac）發展最為成熟，在疾病治療領域顯示出廣闊應用前景，其主要利用細胞內天然的蛋白降解體系——泛素蛋白酶系統（ubiquitin-proteasome?system，?ups）實現目標蛋白（protein?ofinterest，?poi）的靶向降解。protac是一種雙功能的小分子，其一端靶向poi，一端招募e3泛素連接酶形成啞鈴型結構的三元復合物，poi被打上泛素化標簽，進而被蛋白酶體識別降解。在過去的20年里，基于protac技術的各類降解系統層出不窮，相關研究成果在近些年呈爆發式增長，例如分子膠、自噬靶向嵌合體等，極大豐富了胞內蛋白穩態調控手段。更令人興奮的是，截止2023年3月，已有19款protac藥物進入臨床研究，并初步顯示出良好的治療效果。
3、溶酶體靶向嵌合體（lysosome-targeting?chimaeras，lytac）技術是另一種新型的靶向蛋白降解技術。該技術由2022年諾貝爾獎得主，斯坦福大學carolyn.?r.?bertozzi教授團隊于2020年開發設計。lytac依賴溶酶體降解途徑，首次實現了將腫瘤細胞膜表面靶標蛋白及胞
4、雖然lytac技術得到了快速發展，仍存在以下兩個關鍵技術亟待解決：
5、（1）如何制備結構相對簡單又精準可控的lytac分子？基于傳統技術上的親和素和生物素分子的偶聯方式亦不夠精準調控，存在很大的相對不確定性?；谔堑鞍紫嗷プR別的糖基lytac分子依靠糖配體與抗體偶聯制備，一方面識別溶酶體靶向受體蛋白（lysosometargeting?receptors，ltr）的糖配體合成復雜、產率低、成本高；另一方面，靶向ltr的糖配體對抗體的標記是非特異的，最優數量和最佳偶聯點尚不明確；
6、（2）如何提高lytac的腫瘤治療功效？越來越多的證據表明lytac的降解效率受到多種因素的影響，例如lytac分子與目標蛋白的親和力、細胞內的運輸和回收機制等。因此lytac的腫瘤治療功效有待提升。
技術實現思路
1、為解決現有技術提及的上述問題，本專利技術提供了一種光激活雙特異性核酸適體嵌合體（photoactive?bispecific?aptamer?chimeras?(pbacs)），其分子結構可以精確控制，且響應近紅外光，增強細胞內ros的生成并觸發增強細胞自噬，通過細胞自噬強化溶酶體途徑靶向蛋白降解，實現大幅限制腫瘤細胞克隆、遷移能力，提高腫瘤細胞殺傷效果和lytac的治療效果。
2、具體技術方案如下：所述光激活雙特異性核酸適體嵌合體包括第一核酸序列、第二核酸序列和光敏劑；
3、所述第一核酸序列包括：第一核酸適體序列、第一互補序列，所述第一核酸適體特異性識別并結合細胞表面轉運蛋白；
4、所述第二核酸序列包括：第二核酸適體序列、第二互補序列、載藥序列，所述第二核酸適體特異性識別并結合待降解的膜蛋白靶點，所述第二互補序列與第一互補序列能夠實現精準的堿基互補配對；
5、所述光敏劑精準修飾在第二核酸序列的所述載藥序列上；所述光敏劑響應近紅外光，增加腫瘤細胞內ros生成，啟動細胞自噬，
6、其中第一核酸序列被設計為帶有靶向igfiir的核酸適體序列和互補序列；第二核酸序列被設計為帶有sgc8核酸適體序列、互補序列和載藥序列；igfiir的序列為ttgccagtgattgatcca；sgc8的序列為ggatcaatcactggcaa。
7、通過設計第一和第二互補序列以及在第二核酸適體的載藥序列上精準修飾光敏劑，本專利技術的產物結構可以實現穩定、精準地控制。
8、優選地，所述第二核酸適體為腫瘤靶向的dna核酸分子。特別優選地，所述第二核酸適體為sgc8、as1411或xq-2d核酸適體。
9、優選地，所述第二核酸適體所識別結合的待降解的膜蛋白靶點為ptk7、核仁素蛋白、pdl1蛋白或pd1蛋白等。
10、第二核酸適體能夠幫助本專利技術靶向腫瘤細胞，其結合的膜蛋白可以是與腫瘤細胞的發生、發展密切有關的蛋白質，使本專利技術欲開啟和強化的溶酶體靶向蛋白降解能夠有效干擾腫瘤的發生、發展。上述所提及的核酸適體和膜蛋白中，sgc8核酸適體識別腫瘤細胞表面的ptk7蛋白，ptk7與腫瘤的生長和浸潤有關；as1411核酸適體結合的核仁素蛋白是作為與血管生成和腫瘤發生有關的幾種配體的結合蛋白；xq-2d核酸適體是與cd71特異性結合的胰腺癌特異性核酸適體，cd71為轉鐵蛋白受體，介導細胞對鐵的吸收；而腫瘤細胞膜上的pd-1蛋白和pd-l1蛋白能夠通過信號通路影響腫瘤細胞的生長。
11、優選地，所述細胞表面的轉運蛋白包括：溶酶體靶向受體（lysosome-targetingreceptor，ltr）、蛋白酶體轉運蛋白、甘露糖6磷酸受體（m6pr）或溶酶體整合膜蛋白2（lysosomal?integral?membrane?protein?2，limp-2）等，這些轉運蛋白已被驗證能夠開啟溶酶體轉運，其能夠與本專利技術產物pbacs的第一核酸適體相互識別并結合，并攜帶本專利技術pbacs和與之結合待降解的靶標膜蛋白內吞入細胞，以開啟后續溶酶體途徑的蛋白降解。
12、優選地，所述光敏劑為能夠響應近紅外光的第一代、第二代、第三代或第四代光敏小分子藥物。光敏劑作為腫瘤的光動力治療常用藥物，其在細胞中進行光響應產生活性氧物質，產生細胞毒性作用，實現光動力治療。其中，第一代光敏劑主要是血卟啉類；第二代光敏劑為二氫卟吩類，包括5-氨基酮戊酸、海姆泊芬、維替泊芬等；第三代光敏劑是第二代的光敏劑偶聯上不同的靶向分子的衍生物，第四代光敏劑包括前三者具備其他功能的進一步衍生或一些新型光動力納米材料。包括光動力治療常用的疏水性ce6，吲哚青綠，5-ala，焦脫鎂葉綠素?a（pyropheophorbide?a，pa）在內，各代光敏劑都含有能與核酸分子通過化學手段實現精準共價連接的羥基、羧基或不飽和鍵，因此它們都能夠精準修飾在本專利技術設計的載藥序列上。載藥序列可以僅為單個載藥位點，可以設計在第二核酸序列的3’端或5’端或不影響第二本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種光激活雙特異性核酸適體嵌合體，其特征在于：包括第一核酸序列、第二核酸序列和光敏劑；
2.如權利要求1所述的一種光激活雙特異性核酸適體嵌合體，其特征在于，所述光敏劑為能夠響應近紅外光的第一代、第二代、第三代或第四代光敏小分子藥物。
3.如權利要求1或2所述的光激活雙特異性核酸適體嵌合體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于：在載藥序列上精準修飾光敏劑所采用的修飾方法為：點擊化學疊氮化修飾、炔基與疊氮的環加成反應、環炔基與疊氮的環加成反應、非醇醛羰基化合物的縮合反應、巰基與碳碳多鍵的加成反應或氨基或羧基脫水縮合反應。
5.如權利要求1所述的光激活雙特異性核酸適體嵌合體在制備用于結直腸癌治療的相關藥物中的應用。
【技術特征摘要】
1.一種光激活雙特異性核酸適體嵌合體，其特征在于：包括第一核酸序列、第二核酸序列和光敏劑；
2.如權利要求1所述的一種光激活雙特異性核酸適體嵌合體，其特征在于，所述光敏劑為能夠響應近紅外光的第一代、第二代、第三代或第四代光敏小分子藥物。
3.如權利要求1或2所述的光激活雙特異性核酸適體嵌合體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：<...
【專利技術屬性】
技術研發人員：姬丁坤，譚蔚泓，章榮俊，楊昌杰，
申請(專利權)人：上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院，
類型：發明
國別省市：
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