【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種提高蠟樣芽孢桿菌高溫存活率的方法，屬于生物。
技術(shù)介紹
1、蠟樣芽孢桿菌能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，抑制有害微生物的繁殖，具有分解有機(jī)物和抑制有害微生物生長的特性，從而具有一定的預(yù)防感染能力。因此蠟樣芽孢桿菌可以添加到農(nóng)業(yè)肥料中，抑制有害微生物的生長。然而蠟樣芽孢桿菌在高溫條件下存活率顯著降低，代謝活動(dòng)減弱，在堆肥過程中會(huì)影響其發(fā)酵能力和益生效果。因此，尋找用于提高蠟樣芽孢桿菌高溫下菌體存活率的方法，可以提高其在農(nóng)業(yè)方面的應(yīng)用能力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本專利技術(shù)提供了一種提高蠟樣芽孢桿菌高溫下菌體存活率的方法。本專利技術(shù)方法可以減少蠟樣芽孢桿菌在高溫中的活性損失。
2、本專利技術(shù)提高蠟樣芽孢桿菌高溫存活率的方法，是在蠟樣芽孢桿菌發(fā)酵后的菌液中加入穩(wěn)定劑。
3、所述穩(wěn)定劑為海藻糖、2-氮己環(huán)酮、沒食子酸、甘油、3-苯丙酸、蔗糖、l-丙氨酸中的一種或多種配制的無菌水溶液，穩(wěn)定劑添加的質(zhì)量濃度為0.1-8%。
4、進(jìn)一步，所述穩(wěn)定劑為海藻糖，添加濃度為0.1-0.5%；或所述穩(wěn)定劑為2-氮己環(huán)酮，添加濃度為0.1-0.5%；或所述穩(wěn)定劑為甘油，添加濃度為3-8%；或所述穩(wěn)定劑為3-苯丙酸，添加濃度為0.1-0.5%；或所述穩(wěn)定劑為蔗糖，添加濃度為3-8%；或所述穩(wěn)定劑為l-丙氨酸，添加濃度為0.1-0.3%。
5、更進(jìn)一步，所述穩(wěn)定劑由l-丙氨酸和2-氮己環(huán)酮復(fù)配構(gòu)成。
6、體系中l(wèi)-丙氨酸的濃
7、最優(yōu)選，體系中l(wèi)-丙氨酸的濃度為0.2%，2-氮己環(huán)酮的濃度為0.1%。
8、本專利技術(shù)提高蠟樣芽孢桿菌高溫存活率的方法，具體包括如下步驟：
9、步驟1：將蠟樣芽孢桿菌甘油保藏管菌種劃線于lb瓊脂培養(yǎng)基平板中，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?h，挑選單菌落至含有5?ml的lb液體培養(yǎng)基中的試管中，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后獲得發(fā)酵液。
10、步驟2：以體積比5%的比例，將蠟樣芽孢桿菌試管發(fā)酵液接種至200ml的lb液體培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，獲得蠟樣芽孢桿菌發(fā)酵液。
11、步驟3：步驟2獲得的蠟樣芽孢桿菌發(fā)酵液于4℃、10000rpm下離心20min，獲得蠟樣芽孢桿菌發(fā)酵菌體；將所得菌體重懸于無菌水中，添加穩(wěn)定劑。
12、所述蠟樣芽孢桿菌可通過常規(guī)購買獲得。
13、所述lb培養(yǎng)基成分為：胰蛋白胨10.0g/l、酵母提取物5.0g/l、氯化鈉10.0g/l。配置瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，添加瓊脂2g?/l。
14、本專利技術(shù)的有益效果體現(xiàn)在：
15、本專利技術(shù)提供了提高一種蠟樣芽孢桿菌高溫存活率的方法，并對(duì)所加穩(wěn)定劑種類、添加量等進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化后的復(fù)合穩(wěn)定劑配方為體系質(zhì)量濃度0.1%的2-氮己環(huán)酮和體系質(zhì)量濃度0.2%的l-丙氨酸，可在50℃高溫下使蠟樣芽孢桿菌菌體存活率提高1.67倍。
16、現(xiàn)有技術(shù)未見關(guān)注蠟樣芽孢桿菌的高溫下菌體存活率，本專利技術(shù)通過穩(wěn)定劑的添加，提高了蠟樣芽孢桿菌的高溫穩(wěn)定性，拓寬了蠟樣芽孢桿菌的應(yīng)用領(lǐng)域，有效解決了溫度對(duì)其應(yīng)用的限制。
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【技術(shù)特征摘要】
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：尹強(qiáng)，章雪蘋，劉祚軍，方勇，劉姣姣，夏麗明，穆德梅，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)機(jī)械裝備與工程研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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